吴玲玲
- 作品数：7 被引量：10H指数：2
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- 缝隙连接在HCY和TGF-β1介导大鼠血管平滑肌细胞增殖中的作用及机制研究
- 目的:探讨缝隙连接在同型半胱氨酸(Hcy)和转化生长因子β1(TGF-β1)介导大鼠血管平滑肌细胞增殖中作用及机制。 方法:(1)用组织贴块法原代培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMC),用胰蛋白酶消化法进行细胞传代...
- 吴玲玲
- 关键词：血管平滑肌细胞细胞增殖转化生长因子Β1
- 文献传递
- 缝隙连接阻断剂18α-甘草次酸对大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用被引量：4
- 2013年
- 为探讨缝隙连接是否参与抑制大鼠血管平滑肌细胞的增殖及可能的分子机制,本研究以原代及传代培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞为模型,实验分2组:对照组、缝隙连接阻断剂18α-甘草次酸(18α-Glycyrrhetinic acid,18α-GA)组。MTT法及流式细胞术检测细胞的增殖活性,染料示踪分子传递法(划痕标记染料传输法)检测细胞的缝隙连接功能,Western blotting法检测细胞中缝隙连接蛋白40(Cx40)和43(Cx43)表达。结果显示:(1)与对照组相比,18α-GA组MTT法测得的A570值及细胞周期S期比例均降低(P<0.01),细胞增殖活性减弱;(2)与对照组相比,18α-GA组罗氏黄荧光染料传递百分数显著降低,缝隙连接功能明显减弱(P<0.01);(3)与对照组相比,18α-GA组Cx40和总Cx43蛋白表达无显著差异(P>0.05),磷酸化Cx43与非磷酸化Cx43的比值显著降低(P<0.01)。由此可知,18α-GA可能主要通过下调血管平滑肌细胞磷酸化Cx43蛋白表达,引起缝隙连接通讯功能减弱,从而抑制了血管平滑肌细胞的增殖。
- 吴玲玲钟华王恩帮唐娜李佳蔚何芳
- 关键词：增殖血管平滑肌细胞
- Filipin对人脐静脉内皮细胞小凹蛋白-1作用的研究被引量：1
- 2012年
- 为探讨filipin对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)中小凹蛋白-1(Cav-1)的亚细胞定位影响,为进一步研究Cav-1作用机制提供理论依据。培养2～4代HUVECs随机分为:对照组;filipin处理组;采用Na_2CO_3蔗糖密度梯度离心法提取HUVECs中含caveolae的膜碎片,Western blot技术鉴定Caveolae和检测Cav-1蛋白表达。结果显示,与Control组比较,filipin处理组caveolae区Cav-1表达减弱(P<0.05)。由此可知,Cav-1富集于HUVECs的caveolae,filipin可抑制Cav-1在小凹的表达。
- 罗小林梁霄赵慧王静吴玲玲钟华何芳
- 关键词：小凹蛋白-1人脐静脉内皮细胞
- 缝隙连接在血管内皮和平滑肌细胞中的作用及其与高血压的关系被引量：4
- 2013年
- 细胞间的直接通讯——缝隙连接在控制和协调血管功能方面起重要作用。缝隙连接是沟通相邻细胞质膜的唯一一类通道,为离子、小分子代谢物质、第二信使等细胞间信号分子的直接交换提供一个通道。血管内皮细胞和平滑肌细胞表达多种类型缝隙连接蛋白(connexin,Cx),多种Cx在心血管系统中的共同表达并协调一致地工作,对心血管系统的发育、平滑肌和内皮细胞功能的整合、以及对血管壁细胞功能协调等起着重要作用。在血管发生疾病时Cx表达相应发生改变,以与缝隙连接调节血管紧张度和动脉血压的作用相一致。本综述讨论了在血管内皮和平滑肌细胞在生理和病理情况下(以高血压为例)缝隙连接对血管结构和功能的影响。
- 吴玲玲何芳
- 关键词：缝隙连接蛋白内皮细胞平滑肌细胞高血压
- 人脐静脉内皮细胞中C-型瞬时型感受器电位通道3RNA干扰质粒构建及筛选
- 2013年
- 为了探讨C-型瞬时型感受器电位通道3(TRPC3)在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中的作用,本实验针对GenBank中人TRPC3的cDNA序列设计合成短发卡RNA(shRNA),将其转染到HUVEC中,在激光共聚焦显微镜下观察细胞的转染效率,实时定量PCR和免疫印记检测TRPC3mRNA和蛋白表达及转染后的干扰效率。结果显示:(1)激光共聚焦显微镜下观察到绿色荧光,说明已成功将shTRPC3转入到HUVEC中;(2)转染48h后用G418进行稳定筛选后,TRPC3mRNA和蛋白表达均降低(P<0.05),干扰效率分别为71%和74%。由此可知,在HUVEC中成功构建了TRPC3干扰质粒。
- 王静钟华吴玲玲赵慧王腊梅孙志萍庞丽娟何芳
- 关键词：内皮细胞SHRNA
- 小凹蛋白-1下调人脐静脉内皮细胞外钙敏感受体介导的钙内流的作用机制被引量：1
- 2013年
- 目的:研究小凹蛋白-1(Cav-1)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)细胞外钙敏感受体(CaR)介导钙内流的作用机制。方法:取2～3代HUVECs,采用细胞膜穴样凹陷(caveolae)结构破坏剂非律平(filipin)和甲基-β-环糊精(MβCD)及Cav-1基因沉默,配合CaR激动剂精胺(spermine)和负性变构调节剂Calhex 231。Fura-2/AM负载检测细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)。Western blotting检测HUVECs中Cav-1以及CaR蛋白表达,免疫共沉淀技术检测Cav-1和CaR相互作用。用蔗糖密度梯度离心的方法提取并鉴定caveolae,Western blotting检测caveolae的标志蛋白Cav-1和浮舰蛋白1(flotillin-1)及CaR表达。同时检测胞膜、胞浆和高尔基体标志蛋白:转铁蛋白受体(TfR)、β-肌动蛋白(β-actin)和β-外被体蛋白(β-COP)。检测富含Cav-1膜(CEM)区、非caveolae I区(NCF I)和II区(NCF II)的Cav-1和CaR表达。结果:(1)细胞外液为含钙液时,Calhex 231完全阻断精胺刺激引起的[Ca2+]i升高(P<0.05),MβCD可加强精胺升高[Ca2+]i的作用(P<0.05)。不同浓度MβCD处理后各组Cav-1和CaR相互作用的差异无统计学意义(P>0.05);(2)免疫共沉淀结果显示,各组Cav-1和CaR蛋白表达的差异无统计学意义(P>0.05);(3)与control组比较,spermine+Ca2+组、filipin+spermine+Ca2+组和MβCD+spermine+Ca2+组CEM区的Cav-1和CaR蛋白表达均降低(P<0.05),NCF I区的Cav-1和CaR蛋白表达增加(P<0.05),NCF II区Cav-1蛋白表达增加(P<0.05),而CaR蛋白表达的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在HUVECs中,Cav-1和CaR共定位于同一caveolae区,同时Cav-1对CaR介导的Ca2+内流有下调作用,其机制可能与Cav-1抑制CaR膜定位、促使其向非caveolae区转位及减弱其对激动剂的反应性有关。
- 钟华龚艳吴玲玲赵慧王静孙志萍邓峰美何芳
- 关键词：小凹蛋白-1人脐静脉内皮细胞钙信号
- 小凹蛋白-1上调人脐静脉内皮细胞CaR介导NO生成机制的研究
- 目的:探讨小凹蛋白-1(Cav-1)上调人脐静脉内皮细胞(HUVECs)钙敏感受体(CaR)介导一氧化氮(NO)生成的作用机制。方法:培养HUVECs,取同代细胞随机分为:对照组;CaR激动剂(精胺)组;小凹(caveo...
- 罗小林钟华吴玲玲梁霄赵慧王静邓峰美何芳
- 关键词：人脐静脉内皮细胞小凹蛋白CAR
