吴华伟
- 作品数：26 被引量：69H指数：6
- 供职机构：长江大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金博士科研启动基金江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学轻工技术与工程文化科学更多>>
- 易错PCR定向进化大幅度提高极耐热β-葡聚糖酶的活性被引量：6
- 2010年
- 采用易错PCR方法对来自于极耐热海栖热袍菌的内切葡聚糖酶Cel1B进行定向进化。携带有Cel12B基因的重组质粒pET-20b-Cel12B在固定Mn2+浓度下,通过使用不同浓度的Mg2+优化易错PCR条件,产物构建成pET-20b-Mu-Cel12B重组子,并建立突变体文库,重组子经改进的刚果红平板法筛选,通过透明圈的大小获得了酶活性大幅度提高的突变体3个,突变基因经诱导后的酶活力分别是在同样条件下诱导获得的亲本酶的2.1倍、3.2倍和3.7倍。
- 吴华伟张展李相前李迅
- 关键词：酶活
- β-环糊精葡萄糖基转移酶基因的克隆、表达及酶学性质被引量：3
- 2016年
- 获取来自坎皮纳斯类芽孢杆菌(Paenibacillus campinasensis)的编码β-环糊精葡萄糖基转移酶(β-cyclodextrin glycosyltransferase,β-CGTase)的基因cgt,并将带有His-Tag去除信号肽的cgt基因克隆到表达载体p ET28a(+)后,转入大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。通过热变性和Ni-NTA获得重组β-CGTase纯化酶,再通过SDSPAGE检测,蛋白分子量在74 k Da左右,并初步研究了重组β-CGTase的酶学性质。结果表明:重组β-CGTase的酶促反应的最适p H为7.0,并且在p H为5.5~10.0范围稳定,最适反应温度为为65℃,重组酶在55℃保温5 h时仍保持90%以上的活性。研究一些金属离子和化学试剂对重组酶的影响发现β-CGTase是一种金属酶,Ca^(2+)对酶的催化起关键作用,尤其是在低浓度下对酶的活性有促进作用。对重组酶的酶促反应动力学研究得出Km为3.75 mg/m L,Vmax为0.33 mg/(min·m L)。该研究成功实现了β-CGTase基因的异源表达,为进一步实现β-CGTase的工业化生产和应用奠定了基础。
- 谌恩华李相前吴华伟
- 关键词：克隆大肠杆菌酶学性质
- 环糊精葡萄糖基转移酶合成AA-2G反应条件初探被引量：1
- 2023年
- 为了探究重组菌株pET-28a(+)-cgt-T1/BL21(DE3)产生的环糊精葡萄糖基转移酶(Cyclodextrin glucosyltransferase,CGTase)催化合成2-O-α-D-吡喃葡萄糖基-L-抗坏血酸(Ascorbic acid 2-glucoside,AA-2G)的效果,用LB发酵培养基表达重组蛋白CGTase-T1,经亲和纯化柱纯化并浓缩后,测定其β-环化活性和歧化活性。以维生素C(Vitamin C,V_(C))和β-环糊精为底物,酶法合成AA-2G,并通过单因素优化实验,进一步探究了不同糖基供体、底物浓度、pH、温度、底物比例、蛋白浓度以及反应时间对AA-2G产量的影响,对酶合成AA-2G的动力学进行了分析。结果表明:此酶具有合成AA-2G的能力,未优化前AA-2G的产量为0.67 g/L。优化后,考虑到低成本和经济效益,选择可溶性淀粉和麦芽糊精为糖基供体,当糖基供体为可溶性淀粉时,底物浓度为70 g/L,反应pH4.5,反应温度37℃,底物比例3/3(VC/糖基供体),蛋白浓度5.0 mg/mL,反应时间为42 h时,该重组CGTase催化合成AA-2G的产量最高能达到12.68 g/L;当糖基供体为麦芽糊精时,底物浓度为30 g/L,反应pH5.0,反应温度37℃,底物比例4/2,蛋白浓度5.0 mg/mL,反应时间为30 h时,该重组CGTase催化合成AA-2G的产量最高能达到4.96 g/L。在最适条件下,AA-2G的产量分别是未优化反应条件下的18.93倍和7.40倍。经动力学分析发现可溶性淀粉作为糖基供体的催化效率高于麦芽糊精,因此,可溶性淀粉作为糖基供体比麦芽糊精更具有优势,合成得到AA-2G的产量更高。本研究成功将重组CGTase-T1用于AA-2G的合成,通过优化酶法合成的反应条件,使AA-2G的产量得到了大幅提高,为实现AA-2G的工业生产提供参考意义。
- 何亚妹刘振杨郑婉苏瑞阳吴华伟
- 关键词：环糊精葡萄糖基转移酶生物酶法
- 一种大肠杆菌质粒载体及其应用方法
- 一种大肠杆菌质粒载体及其应用方法，涉及可在基因重组技术中使用的质粒载体，以及用该质粒载体表达目的基因的方法。本发明的质粒载体，其特征在于，具有由大肠杆菌σ因子σ<Sup>32</Sup>识别和调控的启动子。应用该质粒载体...
- 邵蔚蓝吴华伟
- 文献传递
- 微波-超声波协同提取烟叶中茄尼醇的工艺研究被引量：6
- 2010年
- 研究了微波-超声波协同萃取烟叶中茄尼醇的适宜条件。对温度、提取时间和萃取溶剂等影响茄尼醇提取效率的条件进行了筛选,确定了最佳的处理条件为:在50℃下,超声波开,提取溶剂为丙酮,处理时间30min,固液比1:15(W/V,g:mL)。这种方法具有萃取速度快、溶剂用量少、萃取效率高等优点。
- 吴华伟夏帆
- 关键词：茄尼醇烟叶
- 结晶纤维素的降解被引量：6
- 2016年
- 随着化石能源的日益消耗及其对环境的污染加重,寻求可再生的清洁能源已成为各国关注的焦点。木质纤维素是地球上最多的有机聚合物,对于解决能源危机具有巨大的潜力,但没有得到有效的利用,纤维素结晶区的存在是阻碍其降解的重大难题。本文介绍了结晶纤维素的结构、解结晶方法及优良的降解菌种;纤维素酶的结构和功能;降解结晶纤维素的机制;纤维素酶的基因工程和酶工程改造。突出应加大对耐热、高效的结晶纤维素降解菌株的挖掘,并深入探究碳水化合物结合结构域的相关作用机理,这对结晶纤维素的高效降解具有重要意义。
- 谌恩华吴华伟李相前
- 关键词：纤维素酶降解机制纤维小体可再生能源
- 产甘露聚糖酶细菌的分离鉴定、酶的部分纯化及酶学性质研究被引量：10
- 2014年
- 以魔芋粉为惟一碳源作为富集条件,利用刚果红染色法从玉米地土壤中筛选到1株产B-甘露聚糖酶的菌株,经摇瓶培养后其酶活力达到101 U/mL.经形态观察及16S rDNA序列分析,鉴定为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）.利用硫酸铵分级沉淀、阴离子交换层析和疏水层析对酶进行了部分纯化.对酶的酶学性质研究发现,该酶的最适反应温度为50℃,最适反应pH为5.0;在45～55℃时酶的稳定性较好,保温30 min后其残留活性在80％以上,在pH4.5～5.5时酶的稳定性较好,保持30 min后其残留活性在80％以上.
- 吴华伟蔚鑫鑫陈雪秋
- 关键词：甘露聚糖酶纯化酶学性质
- 食品微生物学教学改革探讨被引量：9
- 2011年
- 针对食品微生物学课程教学过程中存在的主要问题进行了深入的思考和探索,提出了合理调整课程结构、及时更新教学内容、采用研讨式教学和以研促教等建议,有效地提高了食品微生物课程的教学质量。
- 杨亚珍吴华伟余知和
- 关键词：食品微生物学教学改革教学方法
- 产β-环糊精葡萄糖基转移酶菌株的筛选、鉴定及酶学性质被引量：2
- 2014年
- 利用环糊精葡萄糖基转移酶（CGTase）快速筛选法从枝江酒业的酵泥中筛选获得11株CGTase产生菌。用酚酞法测定所得11株菌株的酶活,最终得到β-CGTase酶活最高的一株菌株,命名为Hhj-1。通过对菌株的形态观察以及16S rDNA测定,并建立该菌株的系统发育树,确定该菌株属于坎皮纳斯类芽孢杆菌（Paenibacillus campinasensis）。对该菌所产的β-CGTase粗酶液酶学性质进行研究,结果表明,该酶的最适反应温度为70℃,最适反应pH为7.5。在35~45℃保温1 h相对酶活仍可保持在90%以上,且该酶在pH 5.0~10.0的较宽范围内都较稳定,说明其对pH适应范围较广,因此应用有较大的灵活性。
- 陈希王淑芬王天赐吴华伟
- 关键词：酶学性质
- 生物工程专业开设综合性实验课程的探索和实践被引量：3
- 2012年
- 从课程设置的必要性、实验内容的选择、课程的实施等方面对开设生物工程专业综合性实验课程进行了系统阐述,最后结合实例介绍了具体的课程体系组成及教学体会。
- 吴华伟杨亚珍余知和夏帆
- 关键词：生物工程课程实施
