向志光
- 作品数：51 被引量：113H指数：7
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医学实验动物研究所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家科技支撑计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学化学工程更多>>
- 实验动物金黄色葡萄球菌LAMP检测方法的建立
- 目的 建立一种能够应用于实验动物金黄色葡萄球菌检测及鉴定的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法.方法 本研究针对金黄色葡萄球菌特异的nuc基因设计4...
- 荣蓉张丽芳李雨函佟巍刘先菊王艳蓉向志光刘云波
- 关键词：LAMP金黄色葡萄球菌
- 超声波均质化对仙台病毒ELISA测试中抗原稳定性的影响
- 2012年
- 目的研究超声波均质化(homogenization)处理对于仙台病毒在ELISA测试中抗原稳定性的影响。方法对BHK-21细胞内扩增培养的仙台病毒通过差速离心,富集后使用超声波做均质化处理,和未处理的病毒分别包被酶标板,使用标准免疫小鼠血清和SPF小鼠血清对包被平板进行测试,比较样品测试孔间测量数据的变异率。结果对免疫血清做梯度稀释,各梯度样品在未经超声处理仙台病毒抗原包被ELISA检测中测量值的变异率在1.97%～6.02%之间;在经超声处理仙台病毒抗原包被ELISA检测中测量值的变异率在0.53%～2.26%之间;SPF血清测量值的变异率均高于免疫血清;所有样品在经超声处理的病毒抗原包被ELISA检测中测量值的变异率均较小。结论超声波处理有效的提高了仙台病毒抗原的均质性,在ELISA测试中提高了抗原的稳定性。
- 向志光刘先菊佟巍李雨函张丽芳魏强
- 关键词：仙台病毒超声波小鼠
- 一个灵长类种属特异基因--XAGE-3转基因
- 2010年
- 目的分析XAGE-3基因在灵长类和啮齿类动物的基因组中的同源性,通过转基因研究XAGE-3基因在小鼠中的功能及生物学意义。方法根据Homologene及Taxplot数据库,通过Blast比对方法分析XAGE-3在两类动物基因组中的同源性;从人胎盘组织克隆XAGE-3基因,转入真核表达载体pCDNA3.1(+),显微注射方法得到转基因动物,基因组PCR鉴定基因型,反转录PCR分析基因的表达;Brdu标记3周龄动物显示睾丸内细胞的增殖。结果XAGE-3在人、黑猩猩和猕猴中存在高度同源基因,而在小鼠和大鼠中无同源区域;在基因型鉴定阳性的5个首建系中3个品系睾丸组织目的基因表达较高,在传代的两个品系中,在小肠,胸腺,睾丸等组织中目的基因均有表达;睾丸组织Brdu标记显示XAGE-3转基因动物有更多的发育晚期的精细胞被标记。结论XAGE-3作为灵长类种属特有基因在转基因小鼠中影响了精细胞发育。
- 向志光陈炜全雄志董伟曹兴水高珊张晓娟张海涛张连峰
- 关键词：转基因
- 兔抗狨猴IgG-HRP标记抗体的制备及初步鉴定被引量：1
- 2018年
- 目的狨猴血清中纯化IgG抗体,制备兔抗狨猴抗血清,并纯化抗血清中IgG,HRP(辣根过氧化物酶)标记兔抗狨猴IgG。方法 Hi TrapTMProtein G亲和层析纯化狨猴和兔抗狨猴血清IgG,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行纯度鉴定,免疫琼脂双扩散法(double immunodiffusion assay)测定制备的兔抗狨猴抗血清效价,改良"简易过碘酸钠标记法"制备兔抗狨猴IgG-HRP标记抗体,酶联免疫吸附测定法(ELISA)及蛋白免疫印迹法(Western blotting)对兔抗狨猴IgG-HRP标记抗体进行工作浓度测定及特异性鉴定。结果狨猴和兔抗狨猴血清纯化IgG纯度分别大于95%、97%;兔抗狨猴IgG抗血清的效价为1∶64。ELISA和Western blotting鉴定了兔抗狨猴IgG-HRP酶标抗体参考工作浓度为1∶256 000、1∶15 000,特异性明显。结论制备狨猴IgG-HRP标记抗体并初步鉴定,包括ELISA及Western blotting的特异性及使用浓度,为狨猴病原体免疫学检测体系及分子免疫学检测体系储备了资源。
- 丛日旭刘先菊滕永康向志光佟巍张丽芳阮研硕刘云波
- 关键词：狨猴抗体制备酶标抗体
- IL-33及其受体ST2的研究进展被引量：11
- 2009年
- IL-33是的IL-1家族的新成员,通过受体ST2活化Th2辅助性T细胞。近来在自身免疫性疾病、变态反应性疾病和心脏疾病的研究表明IL-33是炎症性因子。本文总结了IL-33和其受体ST2信号通路的研究进展。
- 向志光张连峰
- 关键词：ST2TH2细胞
- 三种小鼠RNA病毒样品储运条件对核酸检测的影响被引量：1
- 2018年
- 目的分析实验动物小鼠三种肠道病毒MHV、Reo-3、MNV生物样品的储运条件对病原核酸检测结果的影响。方法将MHV、Reo-3、MNV三种RNA病毒与小鼠盲肠内容物混合制备参考品;保存剂包括RNA提取试剂裂解液(Buffer AVL)及生理盐水,存储温度为4℃及室温(22℃~25℃);在保存1、2、3、7、14 d时间点提取各样品核酸,采用实时荧光定量PCR方法检测病毒样品量的变化。结果生理盐水作为保存剂核酸样品检出量低于RNA提取试剂裂解液组,且检出量下降明显;Buffer AVL组样品储于4℃条件的样品检出量优于室温25℃的条件;4℃-buffer AVL组的三种病毒参考品在3 d时间点的病毒检出量在50%以上,在7 d时间点仍有检出,但14 d时已检测不到。结论三种小鼠RNA病毒样品储运条件优选使用RNA提取试剂裂解液,并在低温条件下储运,最好在3 d内完成核酸检测。
- 李欣悦佟巍张丽芳阮研硕丛日旭向志光
- 关键词：实时荧光定量PCR储运
- 人类白细胞抗原DR4（＊0405）表达细胞系的建立
- 2007年
- 目的构建人类白细胞抗原（HIA）DR4（＊0005）真核表达载体，并使其在小鼠成纤维细胞系中得到稳定表达。方法从含且HLA-DRA全长eDNA的质粒中扩增HLA．DRA的开放读码框（ORF）序列，通过酶切将载体pIRES2-EGFP中的增强绿色荧光蛋白（EGFP）切除，将HLA-DRAORF插入到载体中；采用RT-PCR方法从HLA．DR4（＊04051阳性人外周血单个核细胞中克隆出HLA-DRB1＊0405ORF序列，将其插入pIRESrDRct载体的多克隆位点处，构建出真核表达载体pIRES，DRccβ＊0405。对构建的载体进行限制性内切酶鉴定和测序。采用脂质体转染方法将表达载体转入小鼠成纤维细胞系DAP2．3中，G418抗性筛选，并进行单克隆扩增。通过流式细胞术对细胞克隆进行鉴定，筛选出高表达HLA．DR4（＊0005）的细胞株，并采用激光共聚焦显微镜观察H1A-DR4（＊0405）在小鼠成纤维细胞中的表达情况。结果酶切鉴定和测序证实目的基因插入正确且序列与Genbank一致。流式细胞术筛选得到了高表达HLA-DR4（＊0005）的稳定转染细胞株，阳性率达到74．65％。激光共聚焦显微镜观察证实HLA-DR4（＊0405）分子在小鼠成纤维细胞系得到了表达，主要分布于胞膜及胞质内。结论成功构建出真核表达载体pIRES2-DRαβ1＊0405，并在小鼠成纤维细胞系中获得稳定表达，为进一步开展HM-DRB1＊0405的功能研究和转基因鼠模型的建立奠定了基础。
- 赵义向志光陈振军张连峰栗占国
- 关键词：人类白细胞抗原真核表达类风湿关节炎
- 三种小鼠肠道病毒核酸检测技术在小鼠健康监测中的应用
- 2018年
- 目的应用核酸检测技术检测小鼠盲肠内容物中MHV、Reo-3、MNV三种肠道病毒,并与血清学检测结果相比较,分析核酸检测在小鼠健康监测中的适用性。方法随机选取本实验室接收的小鼠盲肠内容物样品,提取核酸,应用荧光定量PCR技术检测MHV、Reo-3、MNV三种肠道病毒;并与其血清学抗体检测结果做关联分析。结果在272份样品中,MHV、Reo-3、MNV三种肠道病毒检出率分别为17.3%,18.8%,16.9%;MHV、Reo-3核酸检出量多呈低拷贝状态;与血清学抗体检测结果的关联分析表明3种病毒的核酸检测结果与抗体检测结果不完全相关。结论实验动物小鼠群体中存在携带MHV,Reo-3,MNV三种病毒的可能,作为血清学抗体检测技术的补充,核酸检测可作为高敏感性的方法应用于实验动物群体的健康监测。
- 李欣悦佟巍丛日旭郭智蔡鹃阮研硕向志光
- 关键词：荧光定量PCR健康监测
- 雪貂微卫星DNA遗传多样性分析被引量：2
- 2018年
- 目的筛选、优化雪貂微卫星DNA引物,评估、分析雪貂种群的遗传多样性。方法采用21个雪貂微卫星位点,对随机抽取的30只雪貂血液样本进行基因组DNA提取及PCR扩增,PCR产物经2%Agrose电泳和6%PAGE电泳鉴定后进行STR扫描检测,用Popgene1.32软件对STR扫描结果进行数据处理和分析。结果 21个微卫星标记均呈现出遗传多样性,共检测到49个等位基因,观测等位基因数1~4个,平均2.3个;有效等位基因数1.000~3.750个,平均1.6685个;观察杂合度0~0.7333,平均0.3216;期望杂合度0~0.6424,平均0.3394;香隆指数0~1.1773,平均1.0768;多态信息含量0~0.6100,平均0.5485。结论本文筛选的21对雪貂微卫星引物,通过微卫星扫描分析验证,具有稳定的PCR扩增,微卫星标记均表现为多态性,并处于期望数值范围,没有显著地偏离Hardy-Weinberg平衡期望值。
- 刘先菊滕永康丛日旭陈敏张旭向志光滕庆峰刘云波
- 关键词：微卫星DNA
- 实验兔三个封闭群微卫星DNA多态性遗传分析被引量：8
- 2012年
- 目的对日本大耳白兔、青紫蓝兔、新西兰兔三个封闭群体开展群体遗传学分析。方法利用10个微卫星位点,进行Hardy-Weinberg平衡(HWE)检验,统计三个种群的基因频率、观测杂合度、期望杂合度、F值和遗传距离。结果青紫蓝品种在12L1E11位点,新西兰品种在INRACCDDV0087位点与INRACCDDV0203位点,日本大耳白兔在Sat12位点与INRACCDDV0203,P<0.05,显著偏离HWE,多数表现为杂合子缺陷;三个群体在Sat13、Sol44、6L1F10、7L1F1、12L4A1、INRACCDDV0016点上均符合HWE;各位点平均等位基因数5.9,种群整体基因频率差别较大,其范围为0～0.9060;三个种群的平均观测杂合度为0.6204,平均期望杂合度为0.6178;群体间分化系数(Fst)平均为0.0750,日本大耳白兔和青紫蓝兔遗传距离最近为0.1223,青紫蓝兔与新西兰兔遗传距离最远为0.1934。结论三个种群的遗传结构均表现出遗传稳定性和均一性,在10个微卫星位点上呈现高度多态性,种群间遗传分化明显。
- 高子淇刘先菊荣蓉高进权佟巍张丽芳王艳蓉向志光刘云波
- 关键词：日本大耳白兔新西兰兔封闭群微卫星
