刘建
- 作品数：73 被引量：282H指数：8
- 供职机构：贵州大学动物科学学院更多>>
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- 乙型脑炎病毒贵州分离株E基因原核表达及其免疫原性的研究被引量：8
- 2012年
- 收集某猪场1例发病种公猪的睾丸病料,处理后采用细胞培养与乳鼠脑内接毒相结合的方法盲传并结合RT-PCR方法分离鉴定,命名为乙型脑炎病毒(JEV)贵州分离株(GZ株),然后根据GenBank登录的日本乙型脑炎病毒SA14和SA14-14-2株全基因序列设计并合成1对扩增E基因的特异性引物,用RT-PCR方法扩增出JEV贵州分离株E基因,并将E基因克隆到pMD19-T载体上,构建重组质粒pMD19-T-E,经双酶切鉴定、测序及序列分析鉴定后,再将E基因亚克隆到pET-32a(+)原核表达载体上,成功构建乙脑病毒E基因原核表达质粒pET-32a-E,将构建好的原核表达质粒pET-32a-E转化至宿主菌BL21(DH3)中,诱导表达目的蛋白,表达产物经SDS-PAGE电泳和Western blot分析,得到了约59ku条带,与预期大小相符,进一步提取、纯化和浓缩目的蛋白,并将其加入弗氏佐剂后免疫小鼠,免疫后采血检测抗体。结果显示:乙型脑炎病毒贵州分离株E基因原核表达目的蛋白能诱导小鼠产生一定抗体水平,该研究为乙型脑炎亚单位疫苗的研究奠定了基础。
- 汤德元王凤马萍罗险峰李春燕曾智勇徐健刘建
- 关键词：乙型脑炎病毒贵州分离株E基因原核表达免疫原性
- 某规模化猪场猪繁殖障碍性疫病ELISA及六重PCR的检测分析
- 2015年
- 为了解贵州省某规模化猪场6种繁殖障碍性疫病的感染状况,试验采用ELISA试剂盒对送检的血清样品进行了猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒(PCV-2)、猪乙型脑炎病毒(JEV)、猪伪狂犬病毒(PRV)和猪细小病毒(PPV)抗体水平的检测,同时对送检的组织病料进行六重PCR检测。结果表明:CSFV、PRRSV、PCV-2、JEV、PRV和PPV的抗体阳性率分别为93.2%、52.7%、49.4%、83.8%、87.3%和78.8%,其中PRRSV免疫效果较差;另外,该猪场未免疫PCV-2疫苗,但是其抗体阳性率相当高,血清学检测结果显示,该猪场很可能存在PRRSV和PCV-2感染;送检的组织病料经六重PCR检测结果显示,该猪场存在PRRSV和PCV-2野毒感染。说明该猪场应加强猪繁殖与呼吸综合征和猪圆环病毒病的预防工作。
- 罗险峰张华汤德元马萍李春燕曾智勇刘建郝飞李达
- 关键词：规模化猪场繁殖障碍性疫病ELISA抗体水平
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒与猪流感病毒二重RT-PCR检测方法的建立被引量：6
- 2014年
- 为建立可同时检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)与猪流感病毒(SIV)二重RT-PCR方法,研究根据GenBank登录的相关病毒基因序列,选择保守区域设计引物,经过反应条件的优化,建立了可同时检测以上2种病毒的RT-PCR诊断方法,扩增的目的片段长度分别为364 bp(PRRSV)和981 bp(SIV)。通过实验证明该方法具有良好的特异性和较高的敏感性,对PRRSV和SIV的核酸检测最低浓度分别为3.2×10-3 ng和2.7×10-3 ng。应用该方法对32份临床样品进行检测发现,PRRSV阳性率为43.8%,SIV阳性率为31.3%,二重感染率为9.4%。该方法的成功建立为快速高效地检测以上2种病毒提供了有力手段。
- 王洪光汤德元曾智勇罗险峰李春燕郝飞刘建李达
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒猪流感病毒
- 猪伪狂犬病毒Guizhou-DY株gE基因主要抗原表位区的克隆及序列分析
- 2013年
- 为了研究猪伪狂犬病毒(PRV)gE基因主要抗原表位区是否可以进行原核表达,试验根据GenBank中发表的PRV GDSH株(EF552427)和Guizhou-DY株(JX417716)的基因序列,设计1对特异性引物,采用PCR扩增Guizhou-DY株gE基因主要抗原表位区,并进行克隆与序列分析。结果表明:Guizhou-DY株gE基因主要抗原表位区全长为636 bp,与韩国Yangsan株和国内GDSH株核苷酸同源性较高,分别为99.4%和99.2%;与韩国Yangsan株和国内GDSH株、HNJZ株氨基酸同源性较高,均为98.6%。说明该分离株与韩国Yangsan株和国内GDSH株具有较近的亲缘关系。
- 罗险峰郝飞汤德元李春燕曾智勇甘振磊王凤刘建王洪光
- 关键词：GE基因
- 伪狂犬病病毒Guizhou-DY株的分离鉴定及致病性研究被引量：37
- 2013年
- 通过采集疑似猪伪狂犬病流产胎儿病料，采用细胞接毒分离培养、病毒蚀斑纯化、病毒的形态结构观察、易感动物接种试验和病毒核酸鉴定分离到1株伪狂犬病病毒（PRV），命名为PRVGuizhou—DY株（GenBank登录号为JX417716）；为了摸清其理化特性，进一步对Guizhou—DY分离株进行了耐热、耐酸及脂溶性敏感性试验、核酸类型鉴定及病毒毒价测定，同时进行病毒致病性试验。分离鉴定结果表明：病料接种Vero细胞盲传至第2代时产生明显CPE，盲传至第4代可出现稳定的CPE；病毒粒子在电镜下呈椭圆形、有囊膜、直径为120～180nm，核内可见呈晶格状排列的病毒包涵体；病毒悬液接种家兔能引起家兔奇痒、麻痹死亡；理化特性研究表明：该病毒是一种耐热不耐酸且对氯仿敏感的DNA病毒，gE全基因序列与PRVGZ—Z1株、Fa株及Ea株的相似性分别为97．60A、98．9％和99．4％，其TCID50为10-9.71·100μL-1，PFu为109·mL-1. 攻毒组猪体温升高，临床症状较为明显，在攻毒后第5天开始出现中和抗体，第21天达到最高。该研究可为PRV病原学研究提供参考。
- 郝飞汤德元李春燕曾智勇罗险峰甘振磊刘建王洪光
- 关键词：伪狂犬病病毒
- 我国猪瘟流行新趋势与防控措施被引量：13
- 2013年
- 猪瘟目前仍是严重危害我国乃至全球养猪业的重要传染病之一。近年来我国的猪瘟流行特点发生了较大的变化,以前典型猪瘟频发的大流行状况已经得到了控制,非典型猪瘟或温和型猪瘟逐渐占据主导地位,周期性、波浪式的地区散发性流行日益严重,同时发病猪临床症状和病理变化也不明显,发病率和死亡率相对较低,甚至一些免疫后的猪也会发病,母猪持续性感染造成的繁殖障碍以及仔猪先天感染导致的免疫耐受现象逐渐增多。本文介绍了目前我国猪瘟流行的新趋势,并提出相应的防控措施。
- 刘建汤德元李春燕曾智勇罗险峰甘振磊郝飞王洪光
- 关键词：猪瘟防控措施
- 我国猪瘟病毒基因流行变异研究被引量：4
- 2013年
- 猪瘟是由猪瘟病毒引起的一种高度接触性和致死性病毒性传染病,该病流行广泛,发病率和死亡率较高,是危害我国乃至世界养猪业的主要疫病之一。我国猪瘟病毒流行毒株主要分为猪瘟病毒基因Ⅰ群和基因Ⅱ群,且以基因Ⅱ群为主,尚未发现基因Ⅲ群。基于E2基因序列分析表明,我国猪瘟病毒的流行毒株正在向远离猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV株)方向变异;E0基因序列分析表明,流行株与疫苗株相比虽然发生了一定程度的变异,但是在RNase活性关键位点高度保守,未出现变异。
- 郝飞汤德元曾智勇李春燕罗险峰甘振磊刘建王洪光
- 关键词：猪瘟病毒基因
- 猪细小病毒NS1非结构蛋白和VP2结构蛋白主要抗原区间接ELISA方法的建立与联合应用被引量：3
- 2014年
- 为了建立猪细小病毒野毒抗体的NS1-i ELISA和猪群PPV免疫抗体水平的VP2-i ELISA方法,试验采用猪细小病毒NS1和VP2基因主要抗原区纯化后的原核表达重组蛋白作为包被抗原。结果表明:检测灵敏度为1∶12 800;批内、批间重复性试验变异系数均小于10%,NS1-i ELISA方法与HI试验的符合率为100%;VP2-i ELISA方法与HI试验的符合率为94.7%,且比HI试验具有更高的敏感性。用这两种方法同时检测猪伪狂犬病毒(PRV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪乙型脑炎病毒(JEV)和猪O型口蹄疫病毒(FMDV)6种常见猪病病毒的阳性血清结果均为阴性。说明所建立的NS1-i ELISA和VP2-i ELISA诊断方法具有良好的重复性、敏感性和特异性。这两种方法可联合应于PPV野毒感染的快速诊断、流行病学调查、猪群免疫疫苗后PPV抗体水平的检测以及猪群PPV的净化。
- 刘建汤德元李春燕曾智勇罗险峰郝飞姜德荣王洪光李达
- 关键词：猪细小病毒主要抗原区间接ELISA
- 某规模化猪场猪布鲁氏菌病血清学调查被引量：2
- 2012年
- 为了解贵州省某规模化猪场猪布鲁氏菌病的流行情况,本试验采用虎红平板凝集试验和试管凝集试验对该规模化养猪场经产母猪、后备母猪及公猪共计800份血清样品进行猪布鲁氏菌病初检和确诊。结果表明:被检猪血清中4份呈现布鲁氏菌阳性,阳性率为0.5%,经产母猪、后备母猪和公猪被检血清阳性率分别为0.4%、0.5%和1.0%。
- 刘建汤德元曾智勇罗险峰李春燕甘振磊王凤郝飞
- 关键词：布鲁氏菌病血清学调查
- 中草药添加剂对青田田鱼生长性能、血常规及其免疫功能影响
- 按中医理论将黄芪、党参、白术、杜仲等10余味中药配制加工成中草药添加剂,分别按8%、6%、4%和2%四个浓度添加,对买来的279尾青田田鱼分为4个实验组,同时每组都设有对照组,待7d预试期后,进行为期40d的饲养试验,试...
- 王洪光李春燕汤德元陶玉顺曾智勇甘振磊杨泽平刘建郝飞
- 关键词：中草药添加剂免疫功能
- 文献传递
