刘丽凡
- 作品数：10 被引量：6H指数：2
- 供职机构：吉林农业大学动物科学技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家现代农业产业技术体系建设项目吉林省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 乳酸菌素Gassericin T基因的合成及其在大肠杆菌中的融合表达被引量：2
- 2007年
- 目的:在大肠杆菌系统中表达有抗菌活性的乳酸菌素Gassericin T。方法:根据乳酸菌素Gassericin T的基因序列,把Gassericin T的结构基因gatA编码的氨基酸的密码子转换成大肠杆菌偏爱的形式;用人工合成的寡核苷酸片段,通过重叠PCR法扩增得到gatA片段(gat基因);将合成的gat基因插入pGEX-4T-1,构建pGEX-4T-1-gat融合表达载体,转化大肠杆菌DH5α株,IPTG诱导表达,经超声裂解后获得包涵体蛋白,经溶解、变性、复性处理后获得GST-Gassericin T融合蛋白;用琼脂扩散法测定其对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、李斯特菌、枯草杆菌等的抗菌活性。结果与结论:采用pGEX-4T-1融合表达系统在大肠杆菌中表达了有活性的Gassericin T,融合蛋白以包涵体形式存在。复性的融合蛋白对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌有明显的抑制作用,对李斯特菌的抑制作用不明显。
- 刘丽凡赵建增雷连成韩文瑜
- 关键词：基因合成抗菌活性
- 牛蛙(Rana catesbeiana)皮肤cDNA文库的构建与鉴定被引量：3
- 2008年
- 以牛蛙皮肤组织为材料获得总RNA,用偶联Oligo（dT）的磁珠纯化mRNA后,利用含SfiⅠ酶切位点的CDSⅢ引物在逆转录酶的作用下合成cDNA的第1链,以含SfiⅠ酶切位点的CDSⅢ引物和SMART引物,利用LD-PCR合成双链cDNA,双链cDNA经SfiⅠ酶切,通过T4DNA连接酶连接到经过相同酶切的λTripIEx2载体,体外包装后转染E.coliXLI-Blue宿主菌,进行滴度测试和文库扩增。结果构建的牛蛙皮肤cDNA文库原始库容量为1.42×10^6PFU/mL,插入片段长度在0.5～1.5kb,重组率为89.5%,扩增后的文库滴度为1.35×10^9PFU/mL,构建的文库质量符合要求,可用于大规模的功能基因分析。
- 赵瑞利韩俊友李莲瑞乔红伟雷连成胡博谢芳刘丽凡韩文瑜
- 关键词：CDNA文库牛蛙抗菌肽
- 中国鲎抗菌肽Tachyplesin Ⅰ基因的原核表达及鉴定
- 目的: 克隆中国鲎抗菌肽tachyplesin Ⅰ基因并构建其原核表达载体,为更深入的研究抗菌肽的活性及提高抗菌肽的产率制备新型的肽类抗生素创造条件.方法: 以已构建的tachyplesin Ⅰ基因的质粒pPIC9-KR...
- 韩艳韩文瑜雷连成冯新刘丽凡赵瑞利程福亮
- 关键词：基因克隆原核表达
- 文献传递
- 乳酸菌素Gassericin T基因的人工合成及其组成型表达载体的构建
- 2007年
- 目的:为了研究乳酸菌素Gassericin T的作用机制及应用价值,人工合成Gassericin T基因并构建能高效表达外源蛋白的毕赤酵母组成型表达载体。方法:应用PCR方法从毕赤酵母染色体中扩增GAP启动子,经测序正确后与已线性化的不含pAOX1启动子的毕赤酵母诱导型表达载体pPIC9K连接,转化大肠杆菌DH5α。根据Gassericin T的基因序列,把Gassericin T的结构基因gatA的密码子转换成毕赤酵母偏爱的形式,设计了6条59nt的寡聚核苷酸引物,通过3次连续PCR反应,人工合成gatA片段(简称gat基因),经测序正确后插入pGAP9K质粒的多克隆位点。结果:用GAP启动子(pGAP)取代了pPIC9K上的pAOX1,构建了毕赤酵母组成型表达载体pGAP9K;PCR拼接获得250bp的目的基因序列,将目的基因克隆于pGAP9K,获得组成型表达载体pGAP9K-gat。结论:为下一步在毕赤酵母中组成型表达外源蛋白,研究其作用机理和遗传机制奠定了基础。
- 刘丽凡韩文瑜赵瑞丽王好
- 关键词：乳酸菌素基因合成组成型表达启动子
- 锦鲤疱疹病毒减毒株的筛选及免疫原性研究被引量：1
- 2016年
- 为了致弱锦鲤疱疹病毒得到减毒株,试验采用细叶桉叶的提取液与病毒在细胞中共培养来致弱病毒,并以中和抗体试验检验弱毒株的免疫原性。结果表明:利用获得的减毒株在加强免疫42天时,抗锦鲤疱疹病毒中和抗体效价达到最高水平,同时灭活病毒免疫组的抗锦鲤疱疹病毒中和抗体水平低于KHV-P_(52)免疫组,PBS对照组未检测出抗锦鲤疱疹病毒的中和抗体,两个免疫组与对照组比较差异显著(P<0.05);KHV-P52免疫组对鲤鱼的免疫保护效果好,免疫保护率为100%。说明细叶桉叶提取液能有效致弱锦鲤疱疹病毒,通过试验获得了一株锦鲤疱疹病毒弱毒株。
- 王好刘丽凡于丹王友超周井祥刘艳辉
- 关键词：减毒株免疫原性中和抗体
- 重组乳酸菌素GassericinT的表达及活性测定
- 乳酸菌素gassericin T是一种由Lactobacillus gasseri SBT 2055分泌的一种广谱抗菌的细菌素,对其作用机理及遗传机制都不是很明确。在本研究中,首先对已发表的gassericinT的DNA...
- 刘丽凡
- 关键词：乳酸菌素基因合成毕赤酵母GAP启动子组成型表达
- 文献传递
- 锦鲤疱疹病毒-CJ株ORF108基因的克隆及生物信息学分析
- 2015年
- 为研究我国锦鲤疱疹病毒的基因背景信息,从锦鲤疱疹病毒中国吉林株(KHV-CJ株)获得ORF108基因,应用生物信息学方法分析KHV-CJ株ORF108基因结构和功能。结果显示,ORF108基因长588bp,为一完整的开放阅读框,编码196个氨基酸,理论分子质量为21207.37Da。KHV-CJ株与美国株(KHV-U)的ORF108基因的序列一致性为99%,在第564位的碱基A突变为G。但该突变位置编码的氨基酸并没有发生改变,同为丝氨酸。ORF108基因编码蛋白的1-61位氨基酸位于细胞膜表面,62-84位氨基酸之间形成一个典型的跨膜螺旋区。该蛋白的表面抗原决定簇位点区域广泛、峰值高,预示该基因可作为基因工程疫苗的重要候选基因。
- 王好于丹刘丽凡王友超周井祥
- 关键词：锦鲤疱疹病毒生物信息学分析
- Gassericin T基因的合成及其组成型表达载体的构建
- 2006年
- 目的:构建Gassericin T基因毕赤酵母(Pichia pastoris)组成型表达载体。方法:根据乳酸菌素Gassericin T的基因序列,把Gassericin T的结构基因gatA编码的氨基酸的密码子转换成P.pastoris偏爱的形式,设计了6条59nt的寡聚核苷酸引物,通过3次连续PCR反应,获得了250bp左右的gat A片段(简称gat基因)。应用PCR方法从P.pastoris染色体中扩增了GAP启动子,大小为500bp左右,以其取代诱导型表达载体pPIC9K上的pAOX1,构建了组成型表达载体pGAP9K。将合成的gat基因克隆到pGAP9K质粒的多克隆位点中。结果:获得的gat及gap基因与预期结果一致,序列无碱基突变,构建的表达载体pGAP9K-gat经PCR、酶切鉴定完全正确。结论:成功构建了Gassericin T基因P.pastoris组成型表达载体,为下一步高效表达Gassericin T蛋白,进一步研究其作用机理及应用价值打下基础。
- 刘丽凡王好赵瑞丽韩文瑜
- 关键词：乳酸菌素基因合成组成型表达GAP启动子
- 桉液对锦鲤疱疹病毒细胞内复制影响的试验
- 2016年
- 本试验使用细叶桉树的树叶制备成的桉液作为病毒致弱的试剂,将不同稀释度的桉液分别作用于锦鲤鳍条细胞系和在锦鲤鳍条细胞系复制的锦鲤疱疹病毒。结果表明,桉液浓度越高KF-1细胞增殖越困难。桉液浓度低于1:400时,对细胞生长无明显影响。当桉液浓度在1:400时,其病毒抑制率达到77.2%。用统计软件SPSS11.5的Linear-regression分析直线回归方程为,y=0.375x+6.264,R=0.971,P<0.05。说明桉液的浓度与病毒抑制率间有相关直线关系。即药物浓度越高,抑制病毒增殖的能力越强,其量效关系表现显著。
- 王好刘丽凡于丹王友超周井祥
- 关键词：锦鲤疱疹病毒
- 抗菌肽高效表达酵母菌微生态制剂与饲料添加剂的研制与开发
- 韩文瑜冯新郑伟宋战昀韩俊友赵爱珍乔红伟赵瑞丽韩艳刘丽凡雷连成孙长江杜崇涛高薇
- 《抗菌肽高效表达酵母菌微生态制剂与饲料添加剂的研制与开发》研究为吉林省科技发展计划农业重点项目，课题编号20050210-1。抗菌肽在毕赤酵母中发酵表达，将发酵液代替抗生素饲料添加剂直接饲喂畜禽，省却了抗菌肽提取纯化等繁...
- 关键词：
- 关键词：抗菌肽饲料添加剂疾病防治
