刘世海
- 作品数：12 被引量：20H指数：2
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- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 人白介素24单克隆抗体的制备与鉴定
- 2011年
- 目的:制备抗白细胞介素24(Interleukin 24,IL-24)的单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定。方法:应用分子生物学技术,构建含人IL-24编码序列的原核表达载体,表达并纯化了人IL-24融合蛋白。用纯化人IL-24融合蛋白免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,用间接ELISA方法筛选杂交瘤细胞,有限稀释法进行亚克隆,采用免疫印迹及免疫组化染色对抗体的特异性进行了鉴定。结果:获得3株能稳定分泌抗IL-24单抗的杂交瘤细胞,分别命名为1G2,3F4,4A6。通过免疫印迹及免疫组化染色检测显示,这3株单抗均能够与IL-24特异性结合。结论:成功制备抗IL-24单克隆抗体,为进一步探索IL-24在抗肿瘤中的作用机制奠定了基础。
- 刘世海李荣华王东阳王丽娴夏海滨
- 关键词：白细胞介素24原核表达杂交瘤单克隆抗体
- 小肽修饰表达两个外源基因的条件复制型溶瘤腺病毒载体及构建方法和应用
- 一种小肽修饰表达两个外源基因的条件复制型溶瘤腺病毒载体，在人腺病毒5型基因组2245bp-3327b之间有1083bp碱基的缺失，在人腺病毒5型基因组2245bp与3327bp之间处插入一个表达第一外源基因的表达元件，在...
- 夏海滨刘世海
- 一种丹参高质量总RNA的提取方法被引量：13
- 2004年
- 高质量RNA的获得是开展丹参分子生物学研究的基础。采用异硫氰酸胍(GuanidineThiocyanate,GT)法、尿素法、CTAB法、苯酚法和热硼酸改良法等五种方法,以丹参组织培养的幼苗为材料,进行丹参RNA的分离试验,发现所采用的几种方法获得的RNA都有不同程度的降解。分析可能是由于丹参中含有大量的多糖以及各种次生代谢成分造成的。在分析现有结果的基础上对GT法进行了改良,在第二次沉淀前附加低浓度乙醇(10%～20%)沉淀20min对于高质量总RNA的获得效果较好。琼脂糖凝胶电泳检测改良后的GT法无论对于组织培养中幼嫩的根、茎、叶还是大田两年生的丹参根、茎、叶和种子均具有很好的RNA分离效果。mRNA电泳检测发现所得mRNA集中分布在500b～3kb之间且质量较高,完全可以满足丹参各种RNA相关的分子生物学实验要求,为丹参RT-PCR、Northern杂交等分子生物学实验提供了良好的基础。
- 闫亚平刘世海王喆之
- 关键词：丹参总RNA异硫氰酸胍
- 携带eGFP及人endostatin-K5的嵌合腺病毒载体Ad5/11的构建及其体外实验研究被引量：2
- 2011年
- 目的:构建携带报告基因eGFP及人内皮他丁en-dostatin-K5的嵌合型腺病毒载体Ad5/11。方法:采用重叠PCR及在细菌E.coli.BJ5183中同源重组的方法,获得表达eGFP报告基因的嵌合腺病毒骨架载体,然后以经PacI线性化的嵌合腺病毒载体骨架与PacI线性化的表达endostatin-K5的腺病毒E1穿梭载体共转染真核细胞HEK293细胞中获得携带报告基因eGFP及人endostatin-K5的嵌合型腺病毒载体Ad5/11-E1-CMV-endo-K5/E3-CMV-eGFP。以获得的嵌合型腺病毒载体感染U87MG细胞,在荧光显微镜观察eGFP的表达,采用RT-PCR检测endostatin-K5的表达;将所构建的嵌合病毒载体Ad5/11-E1-CMV-endo-K5/E3-CMV-eGFP与未经修饰的腺病毒载体Ad5-E1-CMV-eGFP在体外感染人胶质瘤细胞系A172及乳腺癌细胞系MDA-MB-231;通过荧光蛋白eG-FP的表达,比较它们对以上肿瘤细胞的感染效率。结果:嵌合病毒载体Ad5/11-E1-CMV-endo-K5/E3-CMV-eGFP可成功地表达eGFP及endostatin-K5。以经过修饰的嵌合型腺病毒载体Ad5/11-E1-CMV-endo-K5/E3-CMV-eGFP感染人脑胶质瘤细胞系A172及人乳腺癌细胞MDA-MB-231的感染效率,明显高于对照未经修饰的腺病毒载体Ad5-E1-CMV-eGFP。结论:携带eGFP及人endostatin-K5的嵌合型腺病毒载体Ad5/11,可明显提高对人脑胶质瘤细胞系A172及人乳腺癌细胞系MDA-MB-231的感染效率。
- 王东阳刘世海李星赵俊丽陈皓冯飞雪王丽娴夏海滨
- 关键词：腺病毒载体
- IL-24-Tat PTD融合蛋白及其构建方法和应用
- 一种IL-24-Tat PTD融合蛋白，它是由IL-24与Tat PTD小肽两部分所组成的融合蛋白，Tat PTD小肽由11氨基酸(YGRKKRRQRRR)组成，位于IL-24的碳末端。构建方法包括携带IL-24融合蛋白...
- 夏海滨刘世海
- 文献传递
- 丹参DHN2基因的克隆与序列分析被引量：2
- 2005年
- 本文以组织培养2～13周的丹参幼苗为材料,构建丹参cDNA文库并进行大规模EST序列分析,所得序列经NCBI的BLAST工具分析,克隆号为rsmsxl_014903.yl.scf序列与晚期胚胎丰富(late embryo-genesis abundant)基因家族Ⅱ中的成员有较高的同源性.该序列全长864bp,包含1个长726bp开放阅读框(ORF),编码241个氨基酸,并含有ⅡLEA蛋白的特征序列,与NCBI注册的脱水素家族基因具有较高的同源性,表明本基因可能是一种新的脱水素基因,命名为DHN2,并在GenBank上进行了注册,序列号为:AY737725.
- 刘世海闫亚平王喆之
- 关键词：丹参LEANCBI开放阅读框CDNA文库
- 丹参肉硅酸4-羟化酶基因克隆及其功能研究
- 刘世海
- 关键词：丹参RNA干涉
- 白介素24的抗肿瘤机理被引量：2
- 2011年
- 白介素24(interleukin 24,IL-24)是利用消减杂交技术,从重组的纤维母细胞干扰素和密执毒素共同作用的黑色素瘤细胞株中筛选得到的一种高表达基因。由于IL-24能选择性地诱导肿瘤细胞凋亡,而对正常细胞没有细胞毒作用,因此在肿瘤治疗研究中受到人们广泛的重视。IL-24诱导肿瘤细胞凋亡的机理涉及多种信号途径,有些信号途径目前还不十分清楚。本文就IL-24通过启动不同的信号途径,诱导广泛的肿瘤细胞凋亡的机理作一综述,从而为IL-24抗肿瘤机理研究提供一些有用的信息。
- 刘世海夏海滨
- 关键词：白介素24肿瘤细胞凋亡
- 表达多个外源基因的Ad5 D24条件复制型腺病毒载体及其构建方法和应用
- 一种表达多个外源基因的Ad5 D24条件复制型腺病毒载体，重组腺病毒载体中Ad5 E1 CR2中有24bp碱基缺失，在pRB null/mutant的肿瘤细胞中特异扩增；采用E4－fiber穿梭载体在Fiber的末端及E...
- 夏海滨郑晓晶刘世海王东阳冯真真孙晓聪李婧
- 文献传递
- 小肽修饰表达两个外源基因的条件复制型溶瘤腺病毒载体及构建方法和应用
- 一种小肽修饰表达两个外源基因的条件复制型溶瘤腺病毒载体，在人腺病毒5型基因组2245bp-3327b之间有1083bp碱基的缺失，在人腺病毒5型基因组2245bp与3327bp之间处插入一个表达第一外源基因的表达元件，在...
- 夏海滨刘世海
- 文献传递
