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双向凝胶电泳-飞行时间质谱法分析人肺鳞癌细胞NCI-H520蛋白质组成分被引量：44: 2001年; 目的：建立和优化肿瘤蛋白质组研究的方法系统，并分析人肺鳞癌细胞蛋白质组。方法：用固相ｐＨ梯度双向凝胶电泳分离人肺鳞癌细胞系ＮＣＩ－Ｈ５２０总蛋白，银染显色，ＰＤＱｕｅｓｔ２ＤＥ软件分析，对部分蛋白质点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（ｍａｔｒｉｘ－ａｓｓｉｓｔｅｄ　ｌａｓｅｒ　ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ／ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ　ｔｉｍｅｏｆ　ｆｌｙｉｎｇ　ｍａｓｓ　ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ，ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ－ＭＳ）测定其胶内酶解后的肽质指纹图谱，用ＰｅｐｔＩｄｅｎｔ软件查询ＳＷＩＳＳ－ＰＲＯＴ数据库。结果：获得了分辨率和重复性均较好的双向电泳银染图谱，图像分析探测到３块胶的平均蛋白质点数为（１１４６±１１６），平均匹配的点数为（８５１±９５），匹配率达７３．７％，３块胶在蛋白质点位置上具有较好的重复性，ＩＥＦ方向的平均偏差为（１．５２± ０．２２）ｍｍ，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ方向的平均偏差为（１．９７ ± ０．１３）ｍｍ。随机取６０个蛋白质点进行胶内原位酶解－质谱指纹图分析得到了５４个蛋白质点的肽质指纹图，查询数据库初步鉴定了４４个蛋白质，其中部分是与细胞周期有关的蛋白，部分是与信号传导有关的蛋白。; 詹显全陈主初关勇军李萃何春梅梁宋平谢锦云陈平; 关键词：双向电泳肺肿瘤鳞癌细胞

镇肝熄风汤对脑出血肝阳化风证患者外周血单个核细胞蛋白质组学的影响被引量：8: 2008年; 目的:观察镇肝熄风汤治疗脑出血肝阳化风证(方证相应)前后外周血单个核细胞蛋白质双向凝胶电泳图谱的动态变化,探讨脑出血肝阳化风证的蛋白质表达规律,寻找镇肝熄风汤所作用的蛋白及疗效机制。方法:利用固相梯度双向凝胶电泳技术建立脑出血(10例)肝阳化风证镇肝熄风汤治疗10日前后及健康对照组(10例)外周血单个核细胞蛋白双向凝胶电泳图谱,经PDQuest8.0软件分析,选取差异表达的蛋白质点,应用MALDI-TOF-MS质谱仪获得肽质量指纹图谱,用Mascot软件搜索数据库鉴定部分差异蛋白质。结果:筛选出22个差异表达蛋白质点,其中脑出血肝阳化风证与健康对照组比较有20个差异表达蛋白质点,8个表达下调,7个表达上调,5个缺失;脑出血肝阳化风证经镇肝熄风汤治疗后与健康对照组比较4个表达下调,5个表达上调,2个缺失,9个表达与健康人无明显差异;在挖取的20个蛋白质点中有8个得到鉴定,其中脑出血肝阳化风证与健康对照组比较6个表达下调,1个表达上调,1个缺失;脑出血肝阳化风证经镇肝熄风汤治疗后与健康对照组比较2个表达下调,1个蛋白缺失,5个表达与健康人无明显差异。结论:初步建立了脑出血肝阳化风证外周血单个核细胞蛋白双向凝胶电泳图谱,初步鉴定了部分与脑出血肝阳化风证相关的蛋白及镇肝熄风汤可能的多靶点蛋白调节机制,这些蛋白功能涉及细胞代谢、信号转导、电子传递、细胞骨架等。; 赵艳梁清华熊新贵范荣梁湘辉杨波关勇军; 关键词：外周血单个核细胞镇肝熄风汤蛋白质组学

人NPCEDRG基因启动子的克隆及CCAAT/NFY结合位点初步分析被引量：12: 2011年; NPCEDRG基因是采用基因定位候选克隆策略获得的一个鼻咽癌候选抑瘤基因.NPCEDRG在鼻咽癌细胞和组织中表达下调,重新恢复NPCEDRG基因在CNE2细胞系的表达,可部分逆转CNE2的恶性表型.为揭示NPCEDRG基因在鼻咽癌细胞和组织中表达下调的分子机制,联合应用生物信息学和报告基因载体系统分析方法对NPCEDRG基因启动子区进行克隆及功能分析,系统发育进化足迹分析结果表明,NPCEDRG基因5′端调控区-180～+235 bp区间在脊椎动物中高度保守,该保守区域中存在包括CCAAT/NFY、STAT1和SP1等转录因子结合位点.构建Luc和/或EGFP报告基因表达载体并检测其启动子活性,-146～-8 bp区域有较强的启动子活性,电泳迁移阻滞分析实验(EMSA)提示,CCAAT/NFY转录因子结合位点是NPCEDRG基因的转录调控元件.因此,研究确定-146～-8 bp区域是NPCEDRG基因核心启动子区域且启动子核心元件CCAAT/NFY可能参与NPCEDRG基因的转录调控.; 侯德富关勇军关瑞欧阳咏梅余艳辉陈主初; 关键词：核心启动子转录调控

脑梗死肝阳化风证患者外周血淋巴细胞凝胶图谱分析: ＜正＞目的建立脑梗死肝阳化风证高分辨率的二维凝胶电泳图谱,从蛋白质组学角度探讨脑梗死中医肝阳化风证的本质内涵。方法设脑梗死肝阳化风证组、健康人对照组、脑梗死阴虚生风证对照组3 组,取外周静脉血分离淋巴细胞提取蛋白质,经双...; 曾年菊梁清华陈疆区健刚萧梅芳张雨星梁相辉鄢东红关勇军; 文献传递

化学致癌物DNP致人胚鼻咽上皮细胞转化相关基因的鉴定被引量：3: 2005年; 为了探讨DNP致癌的分子机理,鉴定出化学致癌物二亚硝基哌嗪(DNP)致人胚鼻咽上皮细胞转化相关的基因及其活化方式.采用DNA共转染、裸鼠致瘤性试验、Southern杂交、PCR测序和序列同源性比较分析等,对DNP转化的人胚鼻咽上皮细胞株HENE-DNP进行研究.经过两轮DNA共转染和裸鼠致瘤性实验,Southern杂交表明,裸鼠肿瘤DNA中均含有人特异性高度重复序列Alu.用人Ha-ras、Ki-ras及N-ras癌基因特异性引物对裸鼠肿瘤DNA进行PCR扩增,仅能扩增出人Ha-ras基因相应的片段.Southern杂交进一步证实,裸鼠肿瘤DNA中存在与人Ha-ras基因片段大小一致的杂交带.RT-PCR产物测序,并将测序结果与GenBank进行序列同源性比较分析,发现裸鼠肿瘤中人Ha-ras基因cDNA第26位密码子第2位碱基发生了T→C的转换,编码的氨基酸由亮氨酸相应地变换成丝氨酸.化学致癌物DNP致人胚鼻咽上皮细胞转化相关的基因是Ha-ras,原癌基因c-Ha-ras激活可能是DNP转化人胚鼻咽上皮细胞的分子机制之一.; 段朝军关勇军何春梅李峰肖志强陈主初; 关键词：二亚硝基哌嗪共转染

ZNF403,一个新的细胞周期调节因子的功能研究(英文)被引量：1: 2013年; ZNF403和LCRG1是人类基因ZNF403的2个不同转录剪切本.以往的研究表明LCRG1在喉癌细胞株Hep-2中具有抑瘤特性.本研究旨在探明ZNF403和LCRG1不同剪切本之间的关系以及在肿瘤细胞中对ZNF403的功能进行研究.首先,采用实时荧光定量PCR对这2个转录本的相对表达水平进行分析,结果表明,ZNF403表达水平在不同细胞株中明显高于LCRG1(>10倍),为该基因的主要转录表达产物.随后分别采用MTT细胞生长分析法和裸鼠体内成瘤实验在体外和体内对ZNF403的功能进行分析,结果显示ZNF403的基因沉默可以同时在体内和体外抑制喉癌细胞Hep-2细胞的生长.为了探明其作用机制,本研究还采用细胞信息学、流式细胞周期分析术和高通量PCR点阵分析方法进一步分析,结果表明,ZNF403的基因沉默可显著抑制细胞DNA的复制并延缓细胞周期进入到有丝分裂期.同时发现ZNF403可调节一系列的细胞周期调节蛋白如MCM2、p21、ATM、MRE11A等.综上研究提示ZNF403为一新的细胞周期调节因子,其功能的缺失与肿瘤发生发展密切相关.; 关瑞侯德富饶翔关勇军欧阳咏梅余艳辉Jim HU陈主初; 关键词：选择性剪切细胞周期 AHR

痹肿消汤对胶原性关节炎大鼠滑膜双向电泳蛋白质表达的影响被引量：1: 2006年; 目的:分析痹肿消汤(bizhongxiao decoction,BZXD)对胶原性关节炎大鼠滑膜双向电泳蛋白质表达谱的影响,为阐明痹肿消汤治疗类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)作用机制提供新线索。方法:70只SD大鼠随机分为正常对照组(正常组)、模型对照组(模型组)、痹肿消汤治疗组(BZXD组),采用皮下注射牛Ⅱ型胶原与完全福氏佐剂制成实验性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)模型。应用双向凝胶电泳技术(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)分别分离正常组、模型组、BZXD组大鼠关节滑膜的总蛋白后,胶体考马斯亮蓝染色,扫描2-DE胶获取电子图像,Pdquest图像分析软件比较分析此3组双向凝胶电泳图谱并识别差异表达的蛋白质。结果:成功复制了CIA大鼠模型;建立了正常组、模型组和BZXD组大鼠滑膜的2-DE图谱,其平均蛋白质点数分别为947±39,994±41,1031±52,其匹配率为92%,91%,94.2%;模型组的3块胶在蛋白质点位置上有较好的重复性,不同胶间蛋白质点在等电聚焦(isoelectric focusing,IEF)方向的偏差是(0.896±0.217)mm,在十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodiumdo-decylsufate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)方向的偏差为(1.102±0.104)mm。比较分析模型组和BZXD组大鼠滑膜的2-DE图谱,发现此2组间有328个差异点,BZXD组有174蛋白质点表达上调,147个蛋白质点表达下调,7个蛋白质点只在模型组表达。模型组与正常组之间有193个差异点,123个在模型组表达上调,70个表达下调。结论:建立了CIA大鼠关节滑膜的双向凝胶电泳图谱,识别了328个差异表达的蛋白质,对这些差异蛋白质的鉴定将为痹肿消汤治疗RA的作用机制提供新的实验依据。; 杨波梁清华谢薇蔡颖陈疆熊新贵关勇军左晓霞; 关键词：双向凝胶电泳痹肿消汤胶原性关节炎滑膜蛋白质表达

喉癌相关基因LCRG1蛋白的细胞亚定位及生物学特性研究被引量：6: 2001年; 目的:研究我们实验室最近克隆的喉癌相关基因LCRG1编码蛋白的细胞亚定位以及其是否具有抑瘤功能。方法:采用绿色荧光蛋白(GFP)荧光定位的方法,研究该基因编码蛋白的细胞亚定位;通过绘制细胞生长曲线,以及运用转染细胞软琼脂集落形成试验和裸鼠致瘤试验,研究喉癌相关基因LCRG1在喉癌细胞系Hep-2中的生物学特性。结果:喉癌相关基因LCRG1编码的蛋白定位在细胞核内;将LCRG1cDNA导入到不表达该基因的喉癌细胞系Hep-2中,观察到明显的生长抑制作用,表现为抑制Hep-2细胞的停泊非依赖性生长和抑制裸鼠致瘤性。结论:喉癌相关基因LCRG1具有一定的抑瘤功能。; 李友军关勇军谢海龙陈主初何春梅段朝军; 关键词：喉肿瘤生物学特性

肺癌组织和肿瘤细胞系中BRG1的表达分析被引量：10: 2007年; BRG1(brahma-related gene1)是进化上高度保守的SWI/SNF染色质重塑复合物的成员之一.研究表明:BRG1具有抑瘤基因的特征,可能与肿瘤的发生发展有关.我们采用RT-PCR、Northern杂交和Westernblotting证实:肺腺癌细胞系A549和鼻咽癌细胞系HNE2、HNE3、CNE1中无BRG1的表达,而肺鳞癌细胞系NCI-H520、永生化正常人支气管上皮细胞系HBE和鼻咽癌细胞系HONE1、HNE1、CNE2中有BRG1的表达.同时,通过RT-PCR检测10例肺癌组织标本,发现60%(6/10)的肺癌组织中BRG1的mRNA水平明显下调,而配对正常肺组织中BRG1的mRNA表达未见改变.对29例肺癌组织和10例配对正常肺组织切片进行免疫组化染色,结果显示:肺癌组织中BRG1蛋白表达的阳性率为37.9%(11/29),配对正常肺组织中BRG1蛋白表达的阳性率为90%(9/10),两者的差异有显著性(P<0.05).这提示BRG1确实在肺癌组织及多种肿瘤细胞系中表达下调或缺失,在肺癌发病过程中可能起一定的作用.; 关勇军蔡秀梅李友军何春梅何琼琼程瑞雪陈主初; 关键词：肺癌肿瘤细胞系

人鼻咽癌细胞系HONE1的蛋白质双向凝胶电泳分析被引量：16: 2001年; 目的 :研究人鼻咽癌细胞系HONE1的蛋白质表达特征。方法 :抽提鼻咽癌细胞系HONE1总蛋白 ,双向凝胶电泳 (2 DE)分离、银染显色 ,用凝胶成像仪和PDQUEST软件获取HONE1总蛋白的 2 DE图像 ;根据获得的 2 DE凝胶图像 ,从胶上切取分辨良好、染色较浓的蛋白质点 ,用胰蛋白酶原位水解 ,所获酶解肽段经基质辅助激光解吸飞行时间质谱 (MALDI TOF MS)测定Mr;以测得的肽段Mr为肽质量指纹 (PMF) ,通过PepIdent软件搜索SWISS PROT和TrEMBL数据库而识别该点对应的蛋白质。结果 :建立了双向凝胶电泳分离总蛋白、质谱鉴定银染蛋白质点的方法 ,并鉴定出人鼻咽癌细胞系HONE1中表达较强的 10个点相应的蛋白质。结论 :本研究为建立人鼻咽癌细胞HONE1的 2 DE参考图和蛋白质数据库提供了有用的基础性研究资料 ,为进一步识别鼻咽癌特异性的蛋白质奠定了实验基础。; 李峰关勇军谢锦云何春梅陈平陈主初梁宋平; 关键词：鼻咽癌细胞系双向凝胶电泳蛋白质

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关勇军

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