何丽芳
- 作品数：20 被引量：73H指数：5
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- 外源导入乙型肝炎病毒增强子Ⅱ片段对乙型肝炎病毒基因表达的影响
- 1993年
- 乙型肝炎病毒(HBV)基因组由一环状,部分双链DNA分子组成,分别编码S、C抗原X蛋白及多聚酶,这些基因的表达受启动子和增强子序列等的调控。近年国内外学者利用氯霉素乙酰转移酶(CAT)系统对HBV基因组进行缺失分析,发现了一个新的具有顺式调控HBV基因转录的元件——增强子Ⅱ(EN Ⅱ),它位于1627-1774核苷酸之间。
- 袁正宏何丽芳闻玉梅吴雪汪垣
- 关键词：乙型肝炎病毒增强子基因表达
- 我国乙型肝炎病毒核心抗原基因突变的发现
- 1992年
- 乙型肝炎病毒的持续感染导致慢性肝炎、肝硬化甚至发展为肝癌。过去研究发现我国慢性乙型肝炎患者肝内有病毒DNA整合者仅为10％左右,故整合并非致乙肝病毒持续的主要因素。通过对比各组乙型肝炎患者肝内及血内病毒DNA的阳性率,发现在慢性活动性肝炎及肝硬化患者中表现为肝内病毒DNA阳性率显著高于血清病毒DNA阳性率,提示乙型肝炎病毒可能在肝内存在缺陷型而致病毒不能包装、成熟而释放入血。分别用编码乙肝病毒表面抗原的S基因及核心抗原的C基因与慢性乙肝患者的肝活检组织DNA杂交,发现有个别患者的C基因缺失而S基因呈整合状态。用蛋白印迹转移技术还发现肝癌组织内有分子量异常的类似核心抗原蛋白。
- 闻玉梅陈子平何丽芳顾健人范大方
- 关键词：乙型肝炎病毒基因突变肝活检核心抗原蛋白印迹基因缺失
- 反义寡脱氧核苷酸在鸭体内抑制鸭乙型肝炎病毒复制与表达的研究被引量：5
- 1998年
- 目的研究反义核酸的抗病毒作用。方法设计合成了针对鸭乙型肝炎病毒（ＤＨＢＶ）前Ｓ（ＰｒｅＳ）基因区第９５１９６８位核苷酸的硫代反义寡脱氧核苷酸（ＡＳＯＤＮ），以２０μｇ／ｇ体重／日剂量对３只腹腔感染ＤＨＢＶ５２毒株后，血清ＤＨＢｓＡｇ及ＤＨＢＶＤＮＡ阳性鸭连续静脉注射１０天，同时以等体积生理盐水注射另３只感染鸭作为对照。结果对照鸭注射生理盐水后，血清ＤＨＢｓＡｇ及ＤＨＢＶＤＮＡ阳性未见明显改变，肝组织ＤＮＡＳｏｕｔｈｅｒｎ杂交在３０与２３ｋｂ左右杂交信号明显。注射ＡＳＯＤＮ鸭在１０天后，２／３鸭血清ＤＨＢｓＡｇ及ＤＨＢＶＤＮＡ量显著降低，３／３鸭肝组织中３０ｋｂ左右的杂交信号显著减弱，２３ｋｂ左右未见杂交信号。结论说明该段ＡＳＯＤＮ在鸭体内能部分抑制ＤＨＢＶ的复制与抗原表达。
- 何丽芳吴祥甫陈常庆陈常庆姚忻陈波
- 关键词：乙型肝炎病毒抗病毒治疗
- 重组治疗性乙型肝炎疫苗(YIC)的实验研究被引量：19
- 1999年
- 研制了抗原－抗体复合物型乙肝治疗性疫苗。用小鼠实验证明这一治疗性疫苗的作用机理为：通过复合物中抗体Ｆｃ段与抗原呈递细胞表面的Ｆｃ受体结合，促进了细胞摄取抗原。复合物中的抗原经呈递后可比单纯抗原更有效地激活Ｔ细胞增殖，释放更多的γ－干扰素和白细胞介素－２，属ＴＨ１类型应答。复合物可在小鼠中诱生较单纯抗原诱生的抗－ＨＢｓ高１０倍以上。复合物还可诱生更强的细胞免疫，表现为经特异的抗原刺激后，γ－干扰素的 ｍＲＮＡ量增多。还发现复合物可在对 ＨＢｓＡｇ低应答鼠系中（Ｂ １０．Ｓ）诱生与正常应答鼠相当的抗体效价。在 ＨＢｓＡｇ阳性转基因鼠中，复合物可使部分鼠的 ＨＢｓＡｇ转为阴性，并可产生抗－ ＨＢｓ，反映这一疫苗具有疗效。为制备人用乙肝治疗性疫苗建立了用重组酵母菌表达的ＨＢｓＡｇ与人高效价抗乙肝免疫球蛋白组建治疗性疫苗的工艺，以及产品标化及效力的参比实验技术。
- 闻玉梅何丽芳瞿涤马张妹姚忻
- 关键词：乙型肝炎治疗性疫苗抗原抗体复合物免疫应答
- 乙肝病毒反义DNA的合成被引量：1
- 1995年
- 为了深入研究反义ＤＮＡ对乙肝病毒的抑制作用，设计合成了针对乙肝病毒基因不同功能区域的反义片段２０个，无关序列４个，长度为１５聚到１８聚，分为无修饰反义ＤＮＡ、反义ＤＮＡ－多聚赖氨酸共价连接物、部分硫代和全硫代反义ＤＮＡ四种。合成反应是在ＡＢＩ３８１型ＤＮＡ合成仪上以１μｍｏｌ或１０μｍｏｌ的规模进行的，但在计算机程序上作了一些修改以适应于部分硫代和全硫代ＤＮＡ合成。抑制实验的结果说明，所有合成的反义ＤＮＡ均对乙肝病毒有不同程度的抑制作用，互补于乙肝病毒ＰｒｅＳ＿２翻译起始区的反义１５聚－多聚赖氨酸表现出很强的抑制活性。针对核心蛋白翻译起始区的反义ＤＮＡ和针对聚合酶翻译起始区下游的反义ＤＮＡ也均表现出好的抑制活性。
- 陈常庆陈波徐金旺吴祥甫何丽芳袁正宏闻玉梅
- 关键词：反义DNA乙肝病毒DNA
- 鸭乙型肝炎病毒DNA体内转染的研究被引量：1
- 1996年
- 利用两种鸭乙型肝炎病毒(DHBV)DNA 双体质粒及环化的 DHBV DNA 体内转染2d 龄鸭及4～20d 龄鸭,大多数鸭产生了短暂病毒血症,少数鸭产生了持续病毒血症。转染鸭血清中检测列DHBs/preS Ag、DHBV DNA 及 DHBV 病毒颗粒,转染鸭血清腹腔注射1d 龄鸭可感染成功,转染鸭肝组织检测到复制型 DHBV DNA,提示转染后既有抗原的表达,又有病毒的复制。另外,用两种DHBV DNA 单体质粒体内转染2d 龄鸭,转染鸭血清中只检测到 DHBs/preS Ag,未测及 DHBVDNA,肝组织中也未测及复制型 DHBV DNA 的存在,提示转染后只有抗原的表达,没有病毒的复制。
- 邓卫文闻玉梅何丽芳赵苏伶
- 关键词：乙型肝炎病毒DNA病毒转染
- 反义寡聚脱氧核苷酸（ODN）衍生物抑制乙肝病毒抗原表达的研究被引量：5
- 1995年
- 为比较针对中不同基因的ＯＤＮ硫代衍生物阻断乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的抗原表达，合成了与核心蛋白编码基因起始码上游序列（＃１８９３－１９０７），多聚酶蛋白编码基因起始码上游及内部序列（＃２２９７－２３１３，＃２７９７－２８１３）３．５ｋｂＲＮＡ３′端起始负链ＤＮＡ合成序列（＃ｌ８１７－１８３１）互补的寡聚脱氧核苷酸硫代衍生物［Ｃ－ＯＤＮ，Ｐ－ＯＤＮ，ＰＭ－ＯＤＮ，ＰＢＳ－ＯＤＮ］，分别在ＨＢＶ短暂表达和稳定表达细胞培养系统中观察其抑制ＨＢＶ抗原表达的作用。结果发现，当培养液中ＯＤＮ浓度为２０μｍｏｌ／Ｌ时，四种ＯＤＮ均能抑制ＨｅｐＧ２２．２．１５细胞ＨＢｓＡｇ（乙肝表面抗原）的产生（抑制率分别为：Ｃ－ＯＤＮ，２４．５％；ＰＯＤＮ，１３．４％；ＰＭ－ＯＤＮ，３８．４％；ＰＢＳ－ＯＤＮ，２８．４％）；与ＨＢＶＤＮＡ双体质粒共转染ＨｅｐＧ２细胞后部分ＯＤＮ可明显抑制ＨＢＶＤＮＡ在细胞内表达（ＨＢｅａｇ分泌抑制率分别为：Ｃ－ＯＤＮ，５２％；ＰＭ－ＯＤＮ，７０％；Ｐ－ＯＤＮ，４８％；ＰＢＳ－ＯＤＮ，１８％）。用测定上清中人白蛋白的结果证明，Ｃ－ＯＤＮ的细胞毒作用最低。对Ｃ－ＯＤＮ的作用机理及进一步发展ＯＤＮ的应用也进行了?
- 袁正宏何丽芳赵苏伶吴祥甫陈常庆
- 关键词：乙型肝炎病毒反义寡聚脱氧核苷酸
- 用不同标记的乙型肝炎病毒DNA探针对肝组织内病毒基因进行原位核酸分子杂交
- 1988年
- 本文报道采用国产[α-(55)~S]dATP及进口[3~H]dNTP与生物素标记HBV DNA全基因探针进行原位核酸分子杂交,均可获得阳性结果。其中[3~H]dNTP标记探针的敏感性与特异性最佳。对6例慢性乙型肝炎患者肝组织切片进行原位核酸分子杂交,结果与肝组织提取物经Southern吸印转移HBV DNA杂交的阳性率完全一致。原位核酸杂交显影后的银颗粒呈灶性分布于肝细胞内,提示病毒在肝内扩散为细胞——细胞间传播方式进行。对1例有复制型HBV DNA的肝癌组织进行原位核酸分子杂交,发现HBV DNA主要分布在光镜下癌细胞旁肝细胞胞浆中,而癌细胞中未测得HBV DNA,其意义有待更多病例数检测后才能阐明。
- 黄耀星何丽芳闻玉梅
- 关键词：肝组织同位素标记组织切片病毒基因
- 肾综合征出血热患者血清样本中汉坦病毒RNA检测及其临床意义被引量：1
- 2000年
- 目的 观察病毒血症在病程各期的变化。方法 根据汉坦病毒血清Ⅰ型 76 - 1 1 8株及血清Ⅱ型 80 -39株M基因G1区设计两对公有引物及一条探针 ,应用RT nestedPCR方法对 5 7例 96份肾综合征出血热(HFRS)患者血清中HV RNA检测 ,所有PCR产物用DOT Blot证实。结果 96份样本中 6 8份阳性 ,阳性率70 .8% ;在病程第 1、2、3周 ,HV RNA检测率分别为 94.7%、47.5 %、2 5 % ,P <0 .0 5 ;重型病人持续 2周HV RNA阳性检测率 1 0 0 % ,而轻、中型分别为 1 2 .5 %及 42 .8% ,P <0 .0 5。结论 在HFRS病程中 ,病毒血症是一个急性过程 ,与发热期相平行 。
- 黄玉仙杨佩珍瞿涤何丽芳尹有宽翁心华
- 关键词：汉坦病毒聚合酶链反应肾综合征出血热
- 克隆乙型肝炎病毒DNA在肝与肾细胞中复制与表达的研究
- 1999年
- 目的 对比研究在体外细胞培养系统中乙型肝炎病毒（ Ｈ Ｂ Ｖ） 在肝、肾细胞中的复制与表达。方法 用克隆 Ｈ Ｂ Ｖ Ｄ Ｎ Ａ（ｐ１７７ 、ｐ３ ．８ Ⅱ、ｐ Ｃ Ｍ Ｖ３ ．９） 分别转染 Ｈｅｐ Ｇ２ 与２９３ 细胞系；ｐ１７７ 与ｐ３ ．８ Ⅱ还转染了原代人胚肾细胞。培养后收集转染细胞培养上清液，用 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 法检测 Ｈ Ｂｓ Ａｇ 与 Ｈ Ｂｅ Ａｇ ；提取转染细胞的 Ｄ Ｎ Ａ 与 Ｒ Ｎ Ａ，进行 Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 与 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 印迹杂交检测细胞内 Ｈ Ｂ Ｖ Ｄ Ｎ Ａ 与 Ｈ Ｂ Ｖ Ｒ Ｎ Ａ。结果 转染 Ｈｅｐ Ｇ２ 细胞， Ｈ Ｂｓ Ａｇ 与 Ｈ Ｂｅ Ａｇ 均有高水平表达； Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 与 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 印迹杂交显示特异的 Ｈ Ｂ Ｖ Ｄ Ｎ Ａ 与 Ｈ Ｂ Ｖ Ｒ Ｎ Ａ 杂交信号。而转染２９３ 细胞后， Ｈ Ｂｓ Ａｇ 与 Ｈ Ｂｅ Ａｇ 仅出现很低水平表达； Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 和 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 印迹杂交除ｐ Ｃ Ｍ Ｖ３ ．９ 转染细胞出现明显的 Ｈ Ｂ Ｖ 特异杂交信号外，其他为阴性或微弱阳性。转染原代人胚肾细胞均无 Ｈ Ｂｓ Ａｇ 与 Ｈ Ｂｅ Ａｇ 表达。结论 Ｈ Ｂ Ｖ Ｄ Ｎ Ａ 在肝细胞中可以复制与表达，在肾细胞中仅有低水平的病毒抗原表达而无复制，只?
- 张蕾青张德强姚忻马张妹何丽芳
- 关键词：乙型肝炎病毒抗原表达DNA克隆
