于海生
- 作品数：7 被引量：24H指数：3
- 供职机构：西北农林科技大学动物医学院国家干细胞工程技术研究中心陕西分中心更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 尿嘧啶、三价因子和ATP对牛卵母细胞体外成熟的影响被引量：10
- 2006年
- 研究了尿嘧啶、三价因子和三磷酸腺苷二钠盐（ATP）对牛卵母细胞体外成熟及后期发育的影响。结果表明，培养液中添加尿嘧啶和三价因子能够促进颗粒细胞的增殖，提高牛卵母细胞的成熟率、卵裂率及8～16细胞率；ATP对牛卵母细胞成熟率影响不大，但能提高孤雌激活胚胎发育能力。
- 王洪锋王晓磊于海生雷安民贾文文黄伟伟窦忠英
- 关键词：牛卵母细胞线粒体尿嘧啶ATP
- 人类原始生殖细胞的体外培养被引量：1
- 2006年
- 为了探讨人原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)的体外分离培养条件及相关影响因素,以小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEF)作为饲养层,室温下用1．25 g／L胰蛋白酶+0．2 g／L EDTA消化人胚胎组织5～9 min,或用1 g／L胶原酶(IV型)消化20～40 min,分离得到PGCs,然后用不同培养液培养,从培养液角度较为系统的研究原代培养人原始生殖细胞的条件。结果表明,在KSR培养液(体积分数15％ Knockout serum replacement+高糖DMEM+10 ng／mL人重组白血病抑制因子(LIF)+4 ng／mL人重组碱性成纤维细胞生长因子+10 ng／mL Forskolin)和STO(建系的小鼠胚胎成纤维细胞)条件培养液中培养的原代人原始生殖细胞,有较高的克隆形成率;培养液中添加不同质量浓度的LIF对克隆形成率影响差异不大。
- 于海生华进联王洪锋杨炜峰刘胜蒋会婷窦忠英
- 关键词：原始生殖细胞胚胎干细胞白血病抑制因子条件培养液
- 人胎肺间充质干细胞分离培养条件及向心肌细胞诱导分化的可能关联被引量：3
- 2007年
- 目的:观察分离培养得到人胎肺间充质干细胞的条件,并分析诱导其转分化为心肌细胞的可能性及其相关因素。方法:实验于2003-01/2005-12在西北农林科技大学陕西省干细胞工程技术研究中心完成。取10周龄人工流产胎儿肺组织,0.25%胰蛋白酶消化,经培养得到人胎肺间充质干细胞。观察细胞形态及增殖,测细胞生长曲线。将人胎肺间充质干细胞以1.8×104/孔接种于明胶预处理的24孔板中。加Dulbecco修正Eagle’s基础培养液培养24h后弃去培养液,磷酸盐缓冲液(-)洗两三次。每14孔为1组,分别加入Dulbecco修正Eagle’s基础培养液和先进的Dulbecco修正Eagle’s(分别添加2%、5%、8%和10%新生牛血清)5种不同的培养液,其后方法同上,每天选任意两孔计数,求平均值。用流式细胞仪对所分离第8代细胞进行以下细胞表面标志检测:CD45、CD11a、CD14、CD90、CD34、CD71、CD25、CD105、CD117、CD166和CD44。人胎肺间充质干细胞向心肌细胞诱导分化:将第12代人胎肺间充质干细胞以500个/孔接种于明胶预处理的24孔板中。每6孔为1组,分别在Dulbecco修正Eagle’s基础培养液中添加0、5、10、20μmol/L5-氮胞苷,每组中每2孔为一诱导时间段,分别诱导培养24,48,72h后换成Dulbecco修正Eagle’s基础培养液,以后每3d换液1次。观察细胞在各组中变化情况,诱导12d后固定进行糖元染色和α平滑肌肌动蛋白免疫组化染色。结果:成功分离了人胎肺间充质干细胞,细胞已扩增至26代,流式细胞仪检测CD25、CD105、CD166和CD44表达阳性;CD71(39.1%)和CD117(29.8%)弱阳性。Dulbecco修正Eagle’s培养液比先进的Dulbecco修正Eagle’s培养液更适合于这类细胞生长。经10μmol/L5-氮胞苷诱导48h后,糖元染色、心肌α平滑肌肌动蛋白免疫组化染色阳性细胞率达60%以上。结论:①人胎肺间充质干细胞在Dulbecco修正Eagle’s基础培养液中能够大量扩增。②并表达CD25,CD105,CD166�
- 贾文文华进联于海生杨玉艾赵婷窦忠英
- 关键词：间质干细胞细胞学
- 人类饲养层及无血清培养体系培养人类胚胎生殖细胞研究(英文)被引量：2
- 2007年
- 使用人类胚胎皮肤成纤维细胞(hESF)作饲养层,以血清替代物及一些细胞因子作无血清培养基,培养人类胚胎生殖(hEG)细胞。结果显示,在该培养体系下,人类胚胎生殖细胞能够存活、增殖,并表现出干细胞特有的形态学特征,具有很高的碱性磷酸酶(AP)活性,在体外能够保持未分化状态50 d左右。接种hEG细胞后,该体系能够比以前的人类胚胎生殖细胞培养体系形成更多的集落,并且这些集落AP活性维持更久。结果为人类胚胎生殖细胞的基础研究和临床应用提供了一种更为安全的培养方法。
- 刘胜华进联于海生窦忠英
- 关键词：原始生殖细胞胚胎生殖细胞无血清培养
- 胚胎干细胞起源与本质的探讨被引量：4
- 2006年
- 胚胎干细胞(ESC)建系取材包括桑椹胚的卵裂球、囊胚的内细胞团(ICM)、上胚层细胞和原始生殖细胞(PGCs),甚至从新生鼠睾丸细胞也分离得到ES样细胞。传统观念常常把ESC等同于ICM细胞,也有学者认为ESC更像上胚层细胞,而在已知的基因标记方面,ESC所具有的特征更接近体内早期生殖细胞。不清楚ESC最接近的体内细胞类型与本质,可能是制约许多品系小鼠和大多哺乳类动物建系成功率提高的原因之一。综述了胚胎多能性细胞、早期生殖细胞和ESC的研究进展及相互关系,发现ESC可源于多种细胞类型。目前仍难以确定ESC最接近的体内细胞类型,进一步应通过研究不同体内细胞类型源ESC系间的差异,以弄清ESC本质,为提高ESC建系效率提供理论支持。
- 杨炜峰华进联于海生窦忠英
- 关键词：胚胎干细胞胚胎生殖细胞
- Oct-4和人端粒酶逆转录酶在不同胎龄人胚原始生殖细胞的表达变化被引量：3
- 2008年
- 目的检测不同胎龄人胚原始生殖细胞中Oct-4、人端粒酶逆转录酶（hTERT）的表达变化。方法取人胚胎生殖嵴,通过RT-PCR检测5-13周龄人胚生殖嵴中Oct-4、hTERT的表达变化;同时,取人胚胎生殖嵴,经石蜡切片,HE染色、免疫组织化学染色等技术,观察不同胎龄人胚原始生殖细胞的形态,检测Oct-4、hTERT的表达情况。结果胎龄6-7周时,生殖嵴中可见少量原始生殖细胞,且表达Oct-4及hTERT;胎龄8~12周时,生殖嵴中原始生殖细胞数量增多,Oct-4及hTERT表达增强（P〈0.05）;胎龄13周以后,生殖嵴中Oct-4阳性的原始生殖细胞数量逐渐减少,Oct-4表达减弱,但hTERT仍然高表达。结论不同胎龄人胚原始生殖细胞中Oct-4的表达呈动态变化,胎龄8-12周时表达较强,但hTERT的表达量始终维持在较高水平,没有明显变化。
- 王晗于海生华进联窦忠英王华岩
- 关键词：原始生殖细胞OCT-4人端粒酶逆转录酶
- 人胚胎生殖细胞的分离培养与鉴定
- 人胚胎生殖细胞(embryonicgermcells，EGcells)来源于原始生殖细胞的多能性的干细胞，目前，小鼠和人胚胎干细胞的分离培养均取得了一些重大的进展，但是有关人PGCs发育分化、体外分离培养体系及人EG细胞...
- 于海生
- 关键词：人胚胎生殖细胞条件培养液细胞原代培养细胞生物学特性人胚胎干细胞流产胎儿
- 文献传递
