严华 作品数:62 被引量:294 H指数:8 供职机构: 扬州大学医学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 江苏省自然科学基金 扬州大学校科研和教改项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 文化科学 语言文字 生物学 更多>>
风疹病毒抗原基因E1植物表达载体的构建 被引量:1 2012年 目的:为了提高目的基因在番茄果实中的表达量,为进一步研究口服植物疫苗打下基础。方法:PCR扩增1.1kb番茄果实特异性启动子E8基因、460bp风疹病毒抗原E1基因、256bp NOS基因,将这些片段插入到pCAMBIA1301多克隆位点,得到植物表达载体pCAM1301E8-E1,经测序鉴定正确,将其转化至根癌农杆菌EHA105,然后进行酶切鉴定。结果:重组质粒酶切鉴定均得到预期片段,测序结果正确。结论:该实验成功构建番茄果实特异性启动子驱动风疹病毒E1基因的植物表达载体。 贾霜凯 严华关键词:风疹病毒 番茄 网络自主学习、多媒体教学与传统教学对比分析——一项关于大学英语听力学习的实证研究 被引量:22 2006年 对网络自主学习、多媒体教学与传统教学这三种学习环境下的听力学习进行实验对比,结果表明网络自主学习学习环境的效果要优于多媒体教学与传统教学,亦即网络自主学习是可行的,但在学生自主学习能力发展初期教师要发挥正确引导作用。 严华 秦旭关键词:网络自主学习 多媒体教学 大学英语教学 日本血吸虫虫源性抗原诱导效应性B细胞 2013年 目的观察日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)和可溶性成虫抗原(SWAP)诱导小鼠效应性B细胞分化情况。方法 SEA、SWAP和脂多糖(LPS)分别体外刺激小鼠脾脏单个核细胞和脾脏CD19+B细胞,72 h后采用流式细胞术检测CD19+IL 6+及CD19+IFNγ+细胞比例;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗原刺激后脾脏B细胞培养上清中IL 6和IFNγ水平。用SEA、SWAP、PBS分别和不完全弗氏佐剂混合免疫小鼠,每周1次,共3次,末次免疫后7 d取小鼠脾脏,流式细胞术检测CD19+IL 6+及CD19+IFNγ+细胞比例,用ELISA法检测培养上清中IL 6和IFNγ水平。结果 SEA与LPS可以体外诱导脾脏单个核细胞和脾脏B细胞分化为CD19+IL 6+B细胞(F=5.099,P<0.05;F=6.951,P<0.05),并刺激脾脏B细胞分泌IL 6(F=55.184,P<0.01);SEA免疫小鼠后,可以在体内刺激小鼠脾脏B细胞分泌IL 6(F=19.244,P<0.01),并诱导小鼠脾脏单个核细胞分化为CD19+IL 6+B细胞(F=14.904,P<0.05)。SWAP可以体外诱导脾脏单个核细胞分化为CD19+IFNγ+B细胞(F=3.277,P<0.05),但不能单独诱导脾脏B细胞分化为IFNγ+B细胞,也不能刺激脾脏B细胞分泌IFNγ;SWAP免疫小鼠后,可以在体内刺激小鼠脾脏B细胞分泌IFNγ(F=31.886,P<0.01),并诱导其分化为CD19+IFNγ+B细胞(F=49.873,P<0.01)。结论日本血吸虫SEA可以优势诱导小鼠脾脏单个核细胞分化为CD19+IL 6+B细胞,而SWAP可以优势诱导小鼠脾脏单个核细胞分化为CD19+IFNγ+B细胞,但依赖于其他免疫细胞的参与。 田芳 胡雪莉 刘浩 魏慧 杨维平 段秋芳 钱莉 严华关键词:日本血吸虫 可溶性虫卵抗原 淋病奈瑟菌孔蛋白PorB的原核表达及其在疫苗血清学检测中的初步应用 被引量:3 2016年 目的克隆并表达淋病奈瑟菌孔蛋白Por B,以重组蛋白为抗原,间接ELISA检测免疫血清的抗体水平。方法利用PCR从淋病奈瑟菌WHO株基因组中扩增出Por B的基因,克隆入原核表达载体p ET-30a中,构建出重组表达质粒p ET30aPor B,并转化大肠杆菌BL21(DE3)中,异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。表达的蛋白进行SDS-PAGE分析,Western blot检测其反应原性。以纯化的重组蛋白r Por B作为检测抗原建立间接ELISA方法,用于检测淋病疫苗p VAX1-Por B免疫小鼠后的血清抗体水平。结果 PCR扩增得到淋病奈瑟菌孔蛋白Por B基因,表达的重组蛋白r Por B相对分子质量约40 k D,经Ni-NTA亲和层析纯化后的r Por B在SDS-PAGE中显示单一条带,Western blot证明纯化后的r Por B可与淋病奈瑟菌免疫血清特异性结合,具有良好的免疫反应性。间接ELISA结果表明,淋病疫苗p VAX1-Por B免疫小鼠血清Por B特异性抗体滴度为1∶200。结论成功构建了重组原核表达质粒p ET30a-Por B,Por B在大肠杆菌中获得表达。以纯化的r Por B为检测抗原,间接ELISA可以用于淋病疫苗免疫效果的评价。该研究为淋病奈瑟菌感染诊断、疫苗的研究奠定了基础。 焦红梅 杨慧 赵丹 李国才 陈红菊 严华 季明春关键词:淋病奈瑟菌 原核表达 免疫检测 淋病奈瑟菌NspA原核表达及其抗原性研究 2012年 目的研究淋病奈瑟菌表面蛋白A(NspA)的抗原性及其在淋病快速诊断技术中的应用价值。方法用PCR技术克隆淋病奈瑟菌NspA基因,构建其原核表达载体,在大肠杆菌中表达重组NspA,表达产物复性后免疫小鼠,Western blot、ELISA分别检测免疫血清与淋病奈瑟菌细胞裂解液中NspA及与淋病奈瑟菌全细胞的结合能力。结果NspA基因可在大肠杆菌中表达,纯化并复性的重组NspA(rrNspA)可在小鼠体内刺激产生高效价特异性抗体,抗rrNspA抗体可与淋病奈瑟菌完整细胞及细胞裂解液中NspA特异性结合。结论获得的rrNspA及抗rrNspA抗体在建立淋病奈瑟菌抗体或抗原快速检测方法中具有潜在的应用价值。 李国才 解如山 蒋桂花 朱立天 焦红梅 潘兴元 陈红菊 严华 季明春关键词:淋病奈瑟菌 抗原性 单纯疱疹病毒包膜糖蛋白的结构及功能研究 被引量:5 2009年 包膜糖蛋白是病毒毒粒表面的抗原决定簇,是有包膜病毒表面脂质双层膜的重要成分。目前,已发现并正式命名的单纯疱疹病毒包膜糖蛋白共有12个,大部分具有重要功能。本文就单纯疱疹病毒I型包膜糖蛋白的结构和功能进行综述。 黄涛 严华关键词:单纯疱疹病毒 包膜糖蛋白 黏膜免疫佐剂研究进展 被引量:2 2007年 免疫佐剂是加入疫苗制剂后能促进、延长或增强对疫苗抗原特异性免疫应答的物质。好的免疫佐剂可使少量的抗原诱导机体产生早期、高效和持久的免疫应答。本文主要就近几年国内外对黏膜免疫佐剂种类(主要包括细菌性物质、各种细胞因子、某些无机成分、可增强抗原呈递的相关载体)及作用机理的研究近况作一综述。 黄涛 严华关键词:黏膜免疫 佐剂 抗原呈递 免疫应答 先天性TORCH综合征的防治现状 被引量:7 1998年 病原体引起的先天性综合征对人类造成的危害日趋严重。尤其是孕4~12周时病原体更易通过胎盘侵入胎儿,影响其正常发育造成畸形或死亡。对部分出生时不显临床症状的先天性感染儿及时合理治疗可防止严重后遗症的出现。当然重点应放在预防方面,研制具有特异性免疫原组分的亚单位疫苗将成为预防先天性感染的理想疫苗。本文就先天性TORCH综合征及其防治的研究现状作一综述。 严华 诸葛末伊关键词:TORCH综合征 先天性 转人溶菌酶基因小鼠乳腺生物反应器的建立 被引量:8 2005年 目的研究人溶菌酶(humanlysozyme,hLYZ)动物乳腺生物反应器制备的可行性。方法将hLYZ基因与动物乳腺特异表达载体p205C3连接,所得重组载体p205C3-hLYZ用显微注射法建立转基因小鼠。结果共出生了136只F0代小鼠,PCR和Southern杂交检测基因整合阳性率分别为5·15%(2♀5♂)和2.94%(1♀3♂)。Western印迹检测结果表明,分泌在小鼠乳汁中的表达产物与正常hLYZ具有相同的分子量。目前转基因小鼠已经繁殖到F7代,每一代基因整合阳性母鼠的乳腺均表达hLYZ,乳汁中的表达量最高达750mg/L。斑点杂交试验证明,表达有较强的组织特异性,除在乳腺表达外,仅在脾脏和小肠有一定的异位表达。结论成功建立了hLYZ小鼠乳腺生物反应器。 严华 李国才 孙怀昌关键词:小鼠 乳腺生物反应器 转基因技术 基因表达 淋球菌AFLP基因分型的初步研究 2005年 采用扩增片段长度多态性技术(AFLP)对奈瑟氏淋球菌菌株进行基因分型研究。以EcoRI和MesI酶切26株淋球菌临床分离株基因组,并进行AFLP分析。同一地区的淋球菌分离株之间存在相当大的DNA多态性。AFLP是鉴别淋球菌临床分离株有用而敏感的基因分型技术,有助于了解流行淋球菌菌株的来源、流行菌株之间的克隆相关性,以及抗生素耐药性菌株的传播情况。 季明春 陈红菊 严华 申厚凤关键词:淋球菌 基因分型 AFLP