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万兴: 作品数：10 被引量：25H指数：3; 供职机构：贵州省人民医院更多>>; 发文基金：贵州省科技厅工业攻关项目贵州省优秀科技教育人才省长资金项目贵州省社会发展科技攻关计划项目更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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雌激素对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的治疗作用及对基质金属蛋白酶-9表达的影响: 2011年; 目的探讨雌激素对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）小鼠中枢神经系统（CNS）中基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达的影响。方法用MOG35-55多肽诱发60只EAE小鼠模型，做去卵巢术。分为治疗组和对照组，治疗组予雌激素治疗。比较2组EAE小鼠的临床症状评分。取脑和脊髓，行HE染色观察各组EAE小鼠炎症反应；实时荧光定量PCR及免疫荧光染色法检测各组EAE小鼠CNS中MMP-9的表达。结果治疗组EAE小鼠与对照组相比临床症状减轻（治疗组3．23±0．83，对照组1．62±1．00，t=3．811，P〈0．05）、发病率降低（治疗组8／30，对照组28／30）；HE染色显示治疗组炎症细胞浸润（急性期0．895±0．206，缓解期0．752±0．302，慢性期0．732±0．183）较对照组（急性期3．472±0．635，缓解期2．881±0．662，慢性期1．891±0．482）减少（t=8．622、6．543、5．027，均P〈0．01），实时荧光定量PCR及免疫荧光染色结果示治疗组EAE小鼠CNS中MMP-9表达降低。结论雌激素能抑制EAE小鼠CNS中MMP-9的表达，减轻EAE小鼠临床症状及炎症反应。; 胡晓朱加应黄伟琨万兴王建怡; 关键词：脑脊髓炎雌激素类基质金属蛋白酶9 小鼠

小鼠雌激素受体α基因重组腺病毒载体的构建及鉴定被引量：2: 2009年; 目的:构建C57BL/6小鼠雌激素受体α(Esr1)重组腺病毒表达载体,扩增并纯化重组腺病毒颗粒.方法:采用RT-PCR方法从C57BL/6小鼠卵巢细胞扩增目的Esr1 CDS区基因片段,至pMD19-TSimple载体后测序鉴定.亚克隆Esr1CDS区基因片段至腺病毒穿梭质粒pDNR-CMV,再与骨架质粒pLP-Adeno-X-CMV在感受态大肠杆菌ElectroMAXTMDH10BTMCells中进行同源重组获得腺病毒载体质粒Adeno-Esr1,PacI酶切线性化后脂质体法转染HEK293细胞进行包装、扩增,测定感染性滴度,获得重组腺病毒Ad-Esr1.将病毒感染HEK293细胞,Western Blot检测Esr1蛋白表达.结果:测序证实提取的Esr1 CDS区基因序列完全正确;测序及酶切鉴定均表明重组腺病毒载体构建成功;感染性滴度为6.4×1013(pfu/L),Western Blot检测Ad-Esr1感染的HEK293细胞能表达Esr1蛋白,而未感染的HEK293细胞蛋白不表达.结论:成功构建了C57BL/6小鼠Esr1基因重组腺病毒载体,为进一步研究Esr1在神经系统中生物学功能及对神经系统疾病的基因治疗奠定了基础.; 胡晓万兴娄磊王建怡; 关键词：雌激素受体Α 腺病毒载体基因治疗

小鼠雌激素受体α重组慢病毒的构建及其感染神经细胞的鉴定被引量：3: 2011年; 目的构建携带C57BL/6小鼠雌激素受体α(estrogen receptorα,Erα)的重组慢病毒,感染原代培养的小鼠神经细胞,观察是否能提高Erα的表达,为进一步研究Erα与神经系统疾病的关系奠定基础。方法将Erα基因片段插入慢病毒主体载体LV-GFP-flag,构建重组慢病毒载体LV-Erα-flag。通过琼脂糖凝胶电泳(agarose gel electrophoresis,AGE)、基因测序验证后,将LV-Erα-flag与包装质粒pHelper1.0、pHelper2.0共同转染293T细胞,测定病毒滴度,获得携带Erα基因的重组慢病毒V-Erα-flag。无血清培养C57BL/6小鼠的神经细胞,对照病毒V-GFP-flag感染神经细胞,在荧光显微镜下每天观察荧光表达情况,用流式细胞仪检测感染效率和凋亡率以获得最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)。然后用最佳MOI值的重组慢病毒V-Erα-flag感染神经细胞,采用实时定量PCR、蛋白质印迹方法检测感染后细胞中Erα的转录和蛋白表达水平。结果 AGE及测序鉴定均表明重组慢病毒载体构建成功,包装、扩增后得到V-Erα-flag,感染滴度为2×108 TU/ml;MOI=5的对照病毒V-GFP-flag能感染神经细胞,感染效率达(89.8±4.03)%,而凋亡率仅为(3.6±0.29)%。神经细胞至少能存活8周,在此期间GFP能持续表达,说明慢病毒能有效而稳定感染神经细胞。用MOI=5的V-Erα-flag感染神经细胞后,能显著增强神经细胞中的ErαmRNA和蛋白表达水平。结论成功构建了携带Erα基因的重组慢病毒,其能成功感染神经细胞,使ErαmRNA和蛋白表达水平增高。; 胡晓王建怡袁军万兴黄伟琨秦新月; 关键词：重组慢病毒神经元

选择性雌激素受体调节剂对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的抗炎机制研究被引量：1: 2010年; 目的探讨选择性雌激素受体调节剂(SERM)减轻实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)炎症反应的可能机制。方法用MOG35-55多肽诱发60只EAE小鼠模型,做去卵巢术。分为治疗组和对照组(n=30),治疗组予SERM(雷洛昔芬)治疗。比较2组EAE小鼠的临床症状评分。取脑和脊髓组织,行H-E染色、luxolfastblue(LFB)-H-E染色观察病理学改变;实时荧光定量PCR及ELISA法检测基质金属蛋白酶9(MMP-9)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素4(IL-4)水平;蛋白质印迹分析检测髓鞘碱性蛋白(MBP)表达量,分析脱髓鞘情况。结果治疗组EAE小鼠与对照组相比,治疗组临床症状减轻(P<0.01)、发病率降低(P<0.05);H-E染色显示治疗组炎细胞浸润减少(P<0.05);LFB-H-E染色结果和MBP表达量显示治疗组脱髓鞘减轻(P<0.05);实时荧光定量PCR及ELISA结果示治疗组脑和脊髓组织中MMP-9、TNF-α、IFN-γ表达降低而IL-4增加(P<0.05,P<0.01)。结论 SERM可能通过降低MMP-9、TNF-α、IFN-γ表达,增加IL-4表达,从而减轻EAE小鼠炎症反应。; 胡晓娄磊袁军万兴王建怡秦新月; 关键词：实验性自身免疫性脑脊髓炎选择性雌激素受体调节剂炎症

CT低剂量技术的发展及临床应用探究被引量：1: 2017年; 近年来,随着医学影像学研究的不断深入,怎样在不对图像质量造成影响的同时,将计算机断层扫描(computed tomography,CT)对患者的辐射剂量降低已经成为一个研究重点。本研究主要针对CT低剂量技术的发展情况和临床应用进行探究。; 万兴

雌激素及其受体对中枢神经系统作用的研究进展被引量：1: 2010年; 娄磊胡晓袁军万兴王建怡; 关键词：中枢神经系统作用神经系统发育神经保护作用内分泌系统特异性受体生物学效应

新生小鼠大脑皮质神经细胞体外培养方法及鉴定被引量：3: 2011年; 目的探索用24 h内新生C57BL/6小鼠大脑皮质进行神经细胞体外培养的方法.方法取出生24 h内新生C57BL/6小鼠大脑皮质,胰蛋白酶消化,等体积的基础培养基终止消化,机械性吹打通过细胞过滤器获得单细胞悬液,接种细胞,24 h后更换无血清培养基,每3～4 d半量换液.神经细胞特异性烯醇化酶（NSE）抗体免疫组化方法鉴定神经细胞的纯度.结果细胞在培养12 h后开始贴壁,24 h开始分化生长成梭形.大部分神经细胞于第2天长出突起,第3天神经细胞间形成复杂的联系,第7天神经细胞发育基本成熟.经NSE鉴定,培养细胞中神经细胞纯度可达90%以上.结论无血清体外原代神经细胞培养法简便易行,相对于有血清培养法具有较大的优越性.; 娄磊胡晓朱加应万兴王建怡; 关键词：大脑皮质细胞

雌激素对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠治疗作用的观察被引量：2: 2011年; 目的:探讨雌激素对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠中枢神经系统(CNS)髓鞘及轴突损伤的影响。方法:用MOG35-55多肽诱发建立40只EAE小鼠模型后随机分为2组,各20只,治疗组予雌激素治疗,对照组予同等量的生理盐水灌胃处理。比较2组EAE小鼠的临床症状评分和体质量变化。取各组EAE小鼠脑和脊髓,行罗克沙尔固蓝(LFB)-HE染色及Bielschowsky染色观察髓鞘及轴突损伤情况;实时荧光定量PCR及Westernblot检测各组EAE小鼠CNS中髓鞘碱性蛋白(MBP)及生长相关蛋白-43(GAP-43)的表达。结果:治疗组EAE小鼠较对照组临床症状评分、平均丧失的最大体质量降低;LFB-HE染色、Bielschowsky染色示治疗组较对照组脱髓鞘减轻,轴突损伤减轻,PCR及Westernblot结果显示治疗组MBP和GAP-43表达较对照组增加。结论:雌激素可通过减轻髓鞘损伤及促进轴突再生治疗EAE小鼠。; 胡晓黄伟琨朱加应万兴王建怡; 关键词：脑脊髓炎雌激素类髓鞘髓磷脂碱性蛋白质类 GAP-43蛋白

实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠模型的建立及其病理学和影像学表现被引量：10: 2009年; 目的:建立实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠模型并做病理学及影像学鉴定,为研究多发性硬化的发病机制奠定基础。方法:C57BL/6雌性小鼠80只,分为EAE1组、EAE2组、EAE3组、EAE4组,各15只,用MOG35-55抗原加完全弗氏佐剂不同注射方法制作EAE小鼠模型;佐剂组10只用生理盐水代替MOG35-55制备免疫乳剂,对照组10只仅注射生理盐水;用MRI对小鼠脑和脊髓进行扫描,HE、LFB染色和Bielschowskys银染观察小鼠脑和脊髓病理学改变。结果:免疫后第14天,EAE1组、EAE2组、EAE3组、EAE4组小鼠开始出现EAE临床症状,发病率分别为80%、80%、73%、67%;EAE2组、EAE3组小鼠临床症状评分与EAE1组比较,P>0.05,EAE4组小鼠临床症状评分与EAE1组比较,P<0.05;佐剂组与对照组小鼠均未出现临床神经系统症状;EAE小鼠脑和脊髓小血管周围炎细胞浸润呈袖套状或脱髓鞘改变,神经元变性及轴突损伤,MRI可显示脑和脊髓病灶。结论:应用背部、颈部、腋窝、蹊部多点注射可提高EAE发病率,1次免疫与两次免疫小鼠对EAE发病率的影响没有明显差别。; 胡晓袁军万兴娄磊王建怡; 关键词：脑脊髓炎脊髓神经元小鼠

雌激素对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的抗炎机制被引量：3: 2011年; 目的探讨雌激素减轻实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)炎症反应的可能机制。方法用MOG35-55多肽诱发60只EAE小鼠模型,做去卵巢术。分为治疗组(n=30)和对照组(n=30),治疗组予雌激素治疗。比较两组EAE小鼠的临床症状评分。取脑和脊髓,行H-E染色观察病理学改变,实时荧光定量PCR及ELISA检测EAE小鼠CNS中白细胞介素(interleukin,IL)-17、IL-23、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)、干扰素γ(interferonγ,IFN-γ)、IL-4水平。结果治疗组EAE小鼠与对照组相比临床症状减轻(P<0.05);H-E染色显示治疗组炎细胞浸润减少(P<0.05),实时荧光定量PCR及ELISA结果示治疗组CNS中IL-17、IL-23、TNF-α、IFN-γ表达降低而IL-4增加(P<0.05)。结论雌激素可能通过降低IL-17、IL-23、TNF-α、IFN-γ,增加IL-4,从而减轻EAE小鼠炎症反应。; 胡晓朱加应黄伟琨万兴王建怡; 关键词：实验性自身免疫性脑脊髓炎雌激素炎症反应

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