龚国春
- 作品数：20 被引量：212H指数：8
- 供职机构：中国农业大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划北京市自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 鲁西黄牛皮肤成纤维细胞分离与培养的研究被引量：11
- 2004年
- 研究了鲁西黄牛耳皮肤成纤维细胞的分离与培养、纯化方法及生长特征 ,获得了传代培养的鲁西黄牛皮肤成纤维细胞和上皮细胞。鲁西黄牛耳皮肤细胞在体外培养时呈贴壁生长 ,其原代或早期传代培养物由上皮样细胞与成纤维细胞混合组成。传代培养混合生长的细胞用 0 .2 5 %胰蛋白酶液 37℃下消化处理 3～ 4 min,脱壁悬浮的主要为成纤维细胞。采用反复消化法在传代过程中将二者逐步分离纯化 ,获得了可正常传代的鲁西黄牛耳上皮细胞系和成纤维细胞系。通过绘制生长曲线研究了鲁西黄牛耳皮肤成纤维细胞的增殖规律。传代培养至 12代的鲁西黄牛皮肤成纤维细胞染色体倍性正常。利用第 6代成纤维细胞作核供体克隆试验结果证明重构胚体外发育正常 ,囊胚发育率为 2 7.3%。
- 孙秀柱李青旺戴蕴平程金华龚国春万荣朱化彬
- 关键词：体外培养皮肤组织鲁西黄牛
- 以不同类型的转基因细胞为核供体生产牛的转基因克隆胚胎被引量：35
- 2003年
- 利用所构建的含新霉素抗性(Neo^r)基因和绿色荧光蛋白(GFP)基因的双标记选择载体,通过电穿孔的方法,分别转染了牛胎儿成纤维细胞、胎儿输卵管上皮细胞、胎儿卵巢上皮细胞、颗粒细胞,经过800μg/mL的 G418筛选14 d后,均获得了阳性细胞株.分别以未转基因牛颗粒细胞和4种细胞系的转基因细胞为核供体,进行了牛的体细胞核移植.结果表明:(i)转基因与未转基因牛颗粒细胞的重组胚的囊胚发育率(44.6％vs 42.8％)、移植妊娠率(19％ vs 25％)差异不显著(P>0.05);(ii)比较4种类型转基因细胞的重组胚的囊胚发育率,发现胎儿输卵管上皮细胞(49.1％)和颗粒细胞(44.6％)最高,牛胎儿成纤维细胞(37.2％)次之,胎儿卵巢上皮细胞的重组胚囊胚发育率(22.5％)最低,三者之间差异显著(P<0.05).以上结果显示,供体细胞的转基因与否对牛克隆胚胎的体外和体内早期发育影响不明显;通过体细胞核移植技术,牛胎儿输卵管上皮细胞和颗粒细胞可以有效地生产牛转基因囊胚,并且绿色荧光蛋白作为一种无毒性作用的筛选标记,可用于转基因胚胎的筛选.
- 龚国春戴蕴平樊宝良朱化彬王海平王莉莉方昌阁万荣刘颖李荣李宁
- 关键词：转基因细胞核供体核移植绿色荧光蛋白囊胚克隆胚胎
- 利用体细胞核移植技术生产转基因牛被引量：32
- 2003年
- 通过电穿孔的方法,将含有新霉素抗性(Neor)基因和增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因的双标记选择载体导入胎牛输卵管上皮细胞,获得了转基因细胞株.以转基因细胞为核供体,进行了牛的体细胞核移植.重构胚胎424枚,其中208枚体外发育至囊胚,囊胚发育率为49.1％.选择第7天转基因囊胚17枚移入17头同期发情的受体牛子宫角内,共有5头受体牛妊娠,妊娠率为29.4％.经过正常的体内发育,有3头转基因克隆牛出生,产犊率为17.6％.PCR和Southern检测结果表明,3头转基因克隆牛的基因组中都整合有外源目标基因.并且,绿色荧光蛋白在转基因克隆牛的耳部皮肤组织以及从耳部皮肤组织分离出的成纤维细胞中均有表达.上述结果显示,通过体细胞核移植技术可以有效生产转基因牛;所构建的双标记选择载体可以有效筛选出转基因细胞和转基因克隆胚胎,应用于转基因克隆动物的生产,确保所培育的克隆动物均为转基因动物.
- 龚国春戴蕴平樊宝良朱化彬王莉莉王海平汤波刘颖李荣万荣黄银花李宁
- 关键词：体细胞核移植转基因绿色荧光蛋白
- 绵羊线粒体DNA控制区5’端序列PCR-SSCP与序列分析被引量：75
- 2001年
- 通过绵羊线粒体ＤＮＡ控制区左功能域（５’端序列）ＰＣＲ－ＳＳＣＰ和序列分析，发现小尾寒 羊、乌珠穆沁羊、湖羊、萨福克羊和夏洛来羊以及多赛特公羊与小尾寒羊杂交家系共２０２只绵羊 可归纳为两种类型：突变型和野生型，提示现代绵羊品种在起源上存在两种主要的进化途径。
- 赵兴波储明星李宁龚国春吴常信
- 关键词：绵羊线粒体DNAPCR-SSCP
- 高效表达人乳铁蛋白等药用保健蛋白的奶牛乳腺生物反应器
- 李宁戴蕴平汤波龚国春张磊连正兴王莉莉王海萍刘颖孙秀柱樊宝良赵志辉郑敏李荣谢媛王美丽刘兆良赵春江于政权于舒洋许宏涛杨鹏华王建武赵永辉丁方荣李燕李京胡晓湘孟庆勇费菁朱化彬雷臣
- 动物乳腺生物反应器是一种利用动物转基因技术在乳腺细胞中特异高效表达多肽药物、疫苗、抗体和营养等蛋白的技术，具有效率高，成本低，表达的重组蛋白具有天然生物活性等特点，已经成为目前研究和应用最为广泛的一类生物反应器。人乳铁蛋...
- 关键词：
- 关键词：人乳铁蛋白
- 利用体细胞克隆技术进行大家畜转基因的研究进展
- 体细胞克隆技术与体细胞基因转移技术相结合形成的转基因克隆技术为生产转基因动物和对大动物进行基因组定点修饰开辟了一条有效的崭新途径。近年来,随着绵羊、牛、山羊、猪、马等大家畜被逐一成功克隆,该技术在制备转基因大家畜的巨大应...
- 龚国春戴蕴平朱化彬连正兴赵志辉樊宝良刘兆良李宁
- 关键词：体细胞克隆动物转基因细胞转染基因打靶
- 文献传递
- 家禽应激反应及防治被引量：2
- 2000年
- 晏向华游金明龚国春
- 关键词：家禽应激反应驯化饥饿维生素油脂
- 应用奶牛乳腺生物反应器高效生产重组人乳铁蛋白和人乳清白蛋白
- 李宁戴蕴平汤波龚国春张磊连正兴王莉莉王海萍刘颖郑敏樊宝良赵志辉
- 动物乳腺生物反应器是一种利用体细胞克隆与转基因方法在动物乳腺中高效生产重组蛋白的技术，具有效率高，成本低，安全环保以及重组蛋白具有天然活性等优点，已成为生物制药的最新发展阶段，其商业前景十分巨大。据美国商业评估公司预测到...
- 关键词：
- 关键词：动物乳腺生物反应器生物制药体细胞克隆技术转基因动物技术
- 人α-乳清白蛋白转基因奶牛的生产和应用
- 李宁戴蕴平汤波张磊王建武王莉莉王海萍郑敏李荣龚国春丁方荣赵建敏连正兴李秋艳李京
- 2005年转基因鱼在美国上市和2006年世界第一例转基因动物生产的重组蛋白药物在欧洲获准销售，展现出转基因动物技术在培育动物新品种和生产重组蛋白上的巨大应用前景，据美国商业评估公司预测到2015年全球转基因动物产品每年销...
- 关键词：
- 关键词：人工授精
- 供体细胞类型对体细胞克隆牛生产效率的影响被引量：21
- 2004年
- 建立了中国红系冀南黄牛颗粒细胞系(YGR)、Holstein奶牛颗粒细胞系(HGR)、Holstein奶牛不同个体的成年成纤维细胞系(AFB)以及Holstein奶牛同一个体的胎儿成纤维细胞系(FFB)和胎儿输卵管上皮细胞系(FOV).以上述不同类型的体细胞为核供体,进行了体细胞核移植,共成功培育出12头体细胞克隆牛.比较了不同类型供体细胞的重构胚的发育潜能,结果表明:(ⅰ)YGR和HGR的重构胚的囊胚发育率(33.2%vs35.1%)无显著差异(P>0.05),妊娠率分别为33.3%和30.2%,产犊率分别为16.7%和11.6%;(ⅱ)Holstein奶牛不同个体AFB的重构胚的囊胚发育率(27.9%vs39.4%)差异显著(P<0.05),妊娠率分别为36.2%和36.4%,产犊率分别为14.9%和27.3%;(ⅲ)Holstein奶牛同一个体的FFB和FOV的重构胚的囊胚发育率(37.9%vs41.5%)差异显著(P<0.05),妊娠率分别为45.7%和24.1%,产犊率分别为22.9%和10.3%.综合比较Holstein奶牛的4种体细胞(HGR,AFB,FFB和FOV)的重构胚的发育情况,结果显示:在体外发育阶段,FOV的重组胚的囊胚发育率(41.5%)最高,FFB(37.9%)和HGR(35.1%)次之,AFB(29.4%)最低,三者之间差异显著(P<0.05).在体内发育阶段,4种供体细胞克隆胚胎的妊娠率分别为30.2%,36.2%,45.7%和24.1%,产犊率分别为11.6%,17.2%,22.9%和10.3%.
- 龚国春戴蕴平朱化彬王海平王莉莉李荣万荣刘颖李宁
- 关键词：体细胞克隆供体细胞成纤维细胞系重构胚核移植
