魏立雯
- 作品数：7 被引量：14H指数：3
- 供职机构：西南医科大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划重庆市教委科研基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 反向斑点杂交检测泰泽病原体被引量：3
- 2014年
- 目的建立一种简洁稳定、特异灵敏的检测泰泽病原体(Tyzzer’s organism)的反向斑点杂交方法(reverse dot blot,RDB)。方法根据泰泽病原体16S rDNA保守基因组序列设计引物和特异性探针,上游引物用生物素标记,进行PCR扩增,建立反向斑点杂交方法,用此法进行了特异性和灵敏度实验,同时,用RDB、ELISA和IFA对41只小鼠、38只大鼠进行了检测。结果 RDB特异性强,最低检测限为4.5 ng/μL。对79例实验动物的检测中,与ELISA检测结果一致性为100%,阳性率是7.59%(6/79);与IFA一致性为92.4%(73/79),IFA阳性率是0%。结论建立了PCR扩增与分子杂交相结合的准确、灵敏、特异的泰泽病原体反向斑点杂交检测方法。
- 赵婷婷严磊魏立雯韦莉王会娟赖国旗谭毅
- 关键词：反向斑点杂交实验动物
- 反向线性探针杂交技术检测慢性乙型肝炎病毒拉米夫定耐药研究被引量：6
- 2012年
- 目的:建立起简单、快速、灵敏、准确的慢性乙型肝炎病毒拉米夫定耐药位点的反向线性探针(reverse lineprobe,RLP)检测方法.方法:根据HBV野生及耐药基因序列设计通用探针、3’、5’对称加有poly-C的特异性探针和5’标记生物素的扩增引物.将探针线性固定在硝酸纤维膜上,使HBV PCR扩增产物与探针进行杂交.通过优化杂交条件,建立RLP检测方法.利用该方法对重庆地区86个慢性乙肝病人进行检测,同时与直接测序结果比较.结果:半巢式PCR可对103拷贝/ml的血清样本进行有效特异扩增,新建的RLP检测方法可对PCR扩增产物在1ng/ml以上,或血清样本中突变型DNA占野生型DNA比例为5%以上的均可有效检测,86例临床的检测灵敏度为100%,野生型和耐药型的检测准确性分别为98.09%(103/105)、100%(43/43),与直接测序法比,RLP检测野生与耐药混合型准确性更好.结论:反向线性探针杂交检测方法检测HBV拉米夫定耐药位点方便、灵敏、准确,是HBV拉米夫定治疗有效的监控工具,该方法适合临床应用.
- 赖国旗张文露胡源唐红张磊谢素兰潘玥魏立雯黄爱龙
- 关键词：乙型肝炎病毒拉米夫定
- 六味地黄丸治疗SD大鼠酒精性绝经综合征的作用研究被引量：2
- 2016年
- 为了研究六味地黄丸在治疗酒精性绝经综合征SD大鼠中的作用,构建酒精性绝经综合征大鼠模型,然后观察六味地黄丸对大鼠精神状态、饮食、体质量等的影响。HE染色显微镜下观察卵巢形态学的变化,测定血清雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)的含量,检测白介素-6(IL-6)在卵巢和子宫中的mRNA表达水平。结果发现:六味地黄丸促进了卵巢各级卵泡发育及生长,减轻了卵巢炎症、囊肿、萎缩状态;提高了试验组E2水平,降低了试验组FSH、LH的水平(P<0.01),而IL-6基因在卵巢和子宫中的mRNA表达水平差异有统计学意义(P<0.01)。本研究证实六味地黄丸可以明显改善酒精性绝经综合征SD大鼠的激素分泌水平,可以考虑运用于人类临床上绝经综合征的治疗,并且细胞因子IL-6可以为绝经综合征和自身免疫性卵巢早衰的诊断与治疗,提供另一个可靠的临床参照。
- 魏立雯赵海赵明德魏微刘青青韩建红付陆
- 关键词：六味地黄丸绝经综合征白介素-6动物模型
- 反向线性探针杂交在检测实验动物沙门菌中的研究被引量：2
- 2013年
- 目的建立简便、快速、准确、灵敏、特异的沙门菌检测方法。方法根据沙门菌argT基因序列设计通用引物和3'、5'均加有polyC的特异性探针。上游引物5'标记生物素,将探针线性固定在硝酸纤维素膜上,使沙门菌PCR扩增产物与探针进行杂交,通过优化杂交条件,建立反向线性探针杂交检测方法。利用该方法对重庆地区74只实验动物进行检测,同时与传统分离培养方法比较。结果反向线性探针杂交方法灵敏度高,对沙门菌PCR扩增产物在3ng/μL以上可有效检测。从细菌分离培养及DNA提取到PCR扩增及反向杂交结束仅需27h。该检测方法特异性高,对6种非沙门菌的检测中,其特异性为100%。应用传统分离培养方法和反向线性探针杂交方法分别检测42只KM小鼠和32只SD大鼠,两种方法检测结果一致性为100%。结论反向线性探针杂交检测方法,具有快速、可靠、敏感和特异的特点,可用于沙门菌感染时的检测,适合应用于实验动物沙门菌的监测。
- 魏立雯韦莉张文露潘永全谭毅赖国旗徐永柱
- 关键词：沙门菌实验动物聚合酶链反应
- 小鼠肝炎病毒反向斑点杂交检测方法的建立及初步应用被引量：1
- 2014年
- 目的建立一种反向斑点杂交方法(reverse dot blots,RDB)以检测小鼠肝炎病毒。方法用MHV四个毒株分别感染L929细胞,收获病毒提取RNA并逆转录成cDNA;根据MHV保守区基因组序列设计引物和探针,将上游引物5'端用生物素标记。进行PCR扩增,应用PCR产物进行反向斑点杂交,优化杂交条件,进行稳定性、特异性和灵敏度实验,建立反向斑点杂交法。用此法和酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)对41只小鼠进行检测。RDB检测结果阳性样本进行T载体克隆测序。结果试剂条4℃保质期为8个月。分别检测MHV、金黄色葡萄球菌、沙门菌和乙型肝炎病毒,仅MHV为阳性,RDB特异性为100%,且MHV PCR产物最低检测限为5 ng/μL。41只小鼠经本方法检测后,有5只MHV阳性,分布于3个群,而ELISA检测结果有5只阳性,分布于2个群,阳性样本T载体克隆测序结果与RDB检测结果一致。结论该方法具有简洁明了、稳定可靠、特异性好、灵敏度高等优点,可应用于实验动物小鼠肝炎病毒的检测。
- 赵婷婷严磊魏立雯韦莉王会娟谭毅赖国旗
- 关键词：实验动物反向斑点杂交
- 沙门菌反向线性探针杂交检测方法的建立及应用
- 沙门菌遍布于世界各地，是一种人兽共患病病菌。在世界范围内，沙门菌食物中毒常占首位或第二位。沙门菌感染也是影响实验动物质量和动物实验进程的主要因素之一。随着多重耐药菌株的陆续产生，及时检测出沙门菌，是有效预防沙门菌传播，保...
- 魏立雯
- 关键词：沙门菌PCR扩增
- 金黄色葡萄球菌反向线性杂交探针检测方法的建立被引量：3
- 2012年
- 目的建立一种检测金黄色葡萄球菌的简单、快速、灵敏、准确的方法。方法根据金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶nuc基因,设计一对通用引物及两条特异性探针,用生物素标记通用引物的5'端,将两条特异性探针固定于硝酸纤维膜上,使PCR产物与探针杂交。结果建立的反向线性杂交探针方法,其检测限为2 ng/μL,检测特异性和准确性均为100%。结论建立的反向线性杂交检测方法具有较高的敏感性和特异性,可用于实验动物金黄色葡萄球菌的快速检测。
- 韦莉魏立雯赖国旗谭毅张文露潘永全
- 关键词：金黄色葡萄球菌探针
