高娟
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 供职机构：吉林大学畜牧兽医学院更多>>
- 发文基金：吉林省科技发展计划基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 抗犬瘟热病毒噬菌体抗体库的构建
- 2013年
- 目的构建抗犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)T7噬菌体单链抗体(single-chain antibody fragment,scFv)库。方法用灭活CDV经皮下注射免疫犬,共3次,每次间隔2周,第3次免疫后2周采集犬外周血,分离淋巴细胞,提取淋巴细胞总RNA,RT-PCR分别扩增犬IgG重链(heavy chain,VH)和轻链(light chain,VL)基因片段,通过SOE-PCR法将VH和VL用一段linker连接组装成scFv基因,经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切后,连接到表达载体T7 Select 10-3b上,用包装蛋白包装后,以大肠埃希菌BLT5403为宿主菌进行增殖,随机挑取50个噬菌斑,进行PCR鉴定,并测定文库滴度。结果扩增的VH和VL基因大小均与预期相符,测序结果经blast比对,扩增的片段与犬IgG的VH和VL序列匹配率达90%以上;所构建的原始文库滴度为3.2×107pfu/ml,扩增后的文库滴度为5.0×108pfu/ml。对随机挑取的50个噬菌斑进行PCR鉴定,重组率为94%。结论成功构建了抗CDV的T7噬菌体抗体库,为犬科动物犬瘟热的防治提供了参考。
- 马云青任文陟高娟陈健岳媛高红博高巍
- 关键词：犬瘟热病毒单链抗体
