颜念龙
- 作品数：11 被引量：15H指数：2
- 供职机构：南昌大学基础医学院更多>>
- 发文基金：江西省自然科学基金江西省学位与研究生教育教学改革研究项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生文化科学更多>>
- 鞘磷脂合酶(SMS)的活性对肝细胞Huh7载脂蛋白A-I分泌和脂质含量及分泌的影响
- <正>动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)是危害人类健康的最常见的心血管疾病。进来研究发现在AS斑块处,具有鞘磷脂(SM)的累积,临床流行病研究显示血浆SM升高是AS的独立危险因子。在SM生物合成过程中,...
- 颜念龙
- 人鞘磷脂合酶干扰载体的构建与鉴定被引量：1
- 2013年
- 目的构建沉默人鞘磷脂合酶1(SMS1)和鞘磷脂合酶2(SMS2)基因表达的重组干扰载体,为进一步研究人SMS1和SMS2基因与动脉粥样硬化及其他疾病发生的关系提供研究基础。方法根据基因序列数据库中报道的人SMS1和SMS2基因序列及短发夹RNA(shRNA)设计原则,设计并合成用于构建人SMS沉默载体的DNA寡核苷酸,应用基因重组技术分别和线性化pSUPER干扰载体连接,构建了pSUPER-SMS1和pSUPER-SMS2重组干扰载体,并用EcoRI和HindIII限制性内切酶同时处理重组载体pSUPER-SMS1和pSUPER-SMS2,随后测序,以鉴定重组干扰载体含有目的序列。同时为检测重组干扰载体对人SMS1和SMS2基因的干扰效率,本研究利用脂质体(Lipofectamine 2000)分别转染肝癌细胞HepG2,于48h后分别检测HepG2细胞SMS1和SMS2mRNA的转录水平与SMS酶活(薄层层析法,TLC)。结果所筛选到的重组质粒pSUPER-SMS1和pSUPER-SMS2经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切后获得了281bp DNA片段,且测序结果和理论设计的DNA寡核苷酸一致;随后检测转染HepG2细胞后SMS1和SMS2的mRNA表达水平。实验结果显示SMS1和SMS2的表达分别下降了45%和67%(P<0.001,n=3),而TLC法的酶活结果检测显示,SMS1和SMS2干扰后的SMS酶活均有显著下降,分别下降了56%和63%(P<0.001,n=3)。结论成功构建了人SMS1以及SMS2基因的沉默载体即pSUPER-SMS1和pSUPER-SMS2。
- 胡时栋丁毅宋丹丹陈清兰颜念龙
- 关键词：HEPG2细胞
- 脂多糖对小鼠肝脏鞘磷脂合酶2表达的影响
- 2014年
- LPS在细菌性感染所致的全身性炎症反应中具有重要的作用,而鞘磷脂(SM)参与了炎症反应的发生。催化SM从头合成的关键酶是SMS1和SMS2,其中SMS2和炎症反应最为密切。目前,由LPS所致的小鼠全身性炎症反应中,在小鼠肝脏部位SMS2的表达情况未见报道。为了阐明这一情况,本研究利用10mg/kg的LPS处理BABC/L小鼠18h,取小鼠肝脏进行HE染色,并提总RNA和总蛋白,分别利用实时荧光定量PCR和Western blot研究SMS2在mRNA和蛋白水平的表达情况,并利用薄层层析(TLC)测定对其酶活的影响。研究发现,和对照组相比,实验组SMS2的mRNA和蛋白水平均有显著增加(P<0.05,n=6),分别增加了116%和65.8%,而在酶活水平亦有非常显著增加(P<0.001,n=6),增加了64.3%。由此可见SMS2在LPS所致的炎症反应中起到重要作用,其酶活增加是LPS所致炎症反应所必要的,这将对炎症的治疗提供新的靶点,为新的抗炎药物的开发提供理论依据。
- 潘泽政赵红艳熊明娣江瑜颜念龙
- 关键词：全身性炎症反应内毒素
- SMS沉默对HepG2细胞炎症和CD14表达的影响被引量：1
- 2013年
- 肝细胞的炎性损伤与全身性炎症引起的多器官功能障碍的发生相关,LPS可致全身性炎症,在炎症发生过程中,CD14是LPS的膜受体,可通过激活NF-κB诱导炎症相关因子的表达,CD14主要分布于细胞膜脂筏部位,脂筏是由鞘磷脂(SM)和胆固醇相互锚定,并与相关蛋白质组成的一种微空间结构,因此降低SM的合成,会降低SM在脂筏部位的含量,进而改变脂筏结构及CD14在脂筏部位的分布,最终影响炎症的发生。本研究利用干扰载体pSUPER-SMS沉默HepG2细胞鞘磷脂合酶(SMS)的表达,并检测SM在脂筏部位的含量及CD14和TNF-ɑ的表达,结果显示SMS1和SMS2的mRNA水平表达和酶活都有显著下降(P<0.001,n=3),SM在脂筏部位含量和CD14的表达均有显著降低(P<0.001,n=3),导致LPS所致HepG2细胞TNF-ɑmRNA水平的表达下降。可见SMS可通过改变CD14在脂筏部位的含量,最终影响和炎症发生相关分子TNF-ɑ的表达。
- 张心怡胡时栋罗达亚李华熊明娣丁毅朱伟锋颜念龙
- 关键词：脂筏CD14
- 鞘磷脂合酶(SMS)的活性对肝细胞Huh7载脂蛋白A-I分泌和脂质含量及分泌的影响
- 动脉粥样硬化Atherosclerosis,AS)是危害人类健康的最常见的心血管疾病。进来研究发现在AS斑块处,具有鞘磷脂(SM)的累积,临床流行病研究显示血浆sM升高是As的独立危险因子。在SM生物合成过程中,鞘磷脂合...
- 颜念龙
- 关键词：脂质含量
- 临床医学研究生分子生物学课程“四位一体”创新教学模式的探索被引量：7
- 2021年
- 传统的医学研究生分子生物学教学模式没有充分调动学生学习的主动性,制约了学生创新能力的培养。以培养科研型、创新型高层次人才的目标为导向,该研究对2007—2019级的临床医学研究生实施了教学模式的改革。通过十余年的探索和努力,建立了师生交流互动的理论授课、以创新性综合实验强化实验技能、以临床诊疗问题为导向的开题报告答辩考评和多学科专家进行科研讲座的"四位一体"创新教学模式,有效地提升了南昌大学医学研究生的临床思维和综合创新能力,为他们后续的科研工作打好了坚实的基础。
- 熊向阳罗达亚黄春洪严晓华颜念龙胡晓鹃叶仰真陈庚发朱伟锋
- 关键词：临床医学研究生分子生物学教学模式科研创新能力
- 定向探索型生物化学实验教学模式的建立与实践体会被引量：4
- 2021年
- 生物化学是一门极具应用性的医学专业基础课程。该学科理论知识较为抽象且知识点之间关联复杂,在"教"与"学"两个方面都具有一定的难度。如何有效利用常规实验教学,激发学生的好奇心,加深其对相关理论知识的理解,进而解决实际问题一直是教师关注的重点话题。本教学团队在实践中尝试建立定向探索型实验教学模式,打破既有的教学习惯,充分体现以学生为主体的教学理念。在教学中鼓励学生在既定教学内容的框架下主动提出科学问题并通过自主设计/实施相应实验进行探索。这一实验教学模式的应用可更有效地辅助学生实现生物化学理论知识的内化并培养其自主、创新思辨能力,同时也打破了教师长期养成的固化教学形式,切实体现出教学相长的魅力。
- 谢彩凤杨晓红颜念龙朱伟锋熊向阳涂硕罗达亚黄春洪胡晓鹃
- 关键词：实验教学生物化学教学改革
- 控制医学生物化学双语教学质量的探讨
- 在各大院校积极开展双语教学的大好形式下,如何提高和保证双语教学的质量是一个值得深思的问题。本课题组在以下五个方面进行了尝试并取得了一定的效果。1、建立师资的自培机制,不断激励教师的教学热情2、精选原版教材,结合国情把握质...
- 揭克敏胡晓鹃颜念龙熊向阳
- 利用Tet-Off表达系统构建鞘磷脂合酶可调控高表达的Huh7肝癌细胞被引量：2
- 2010年
- 目的利用Tet-Off表达系统构建鞘磷脂合酶(sphingomyelin synthase,SMS)可被Dox调控高表达的Huh7细胞,为进一步探讨SMS活性升高致动脉粥样硬化的机制打下基础(建立细胞模型)。方法首先将Tet-Off调控质粒转染Huh7细胞构建Huh7-tTA细胞,然后再将含外源性人SMS基因(hSMS)的PTREE2hyg质粒转染Huh7-tTA细胞,经分离纯化成功构建可调控表达hSMS的Huh7单克隆细胞(命名为SMS细胞,SMS1和SMS2)。为了便于检测外源性hSMS,利用FLAG标记hSMS(SMS-FLAG)。结果 SMS细胞表达SMS-FLAG受不同剂量Dox调控,SMS mRNA测定结果显示:0 ng/mL Dox剂量组较0.01 ng/mL和100 ng/mL Dox组均有显著升高(P<0.05和P<0.001);0.01 ng/mL Dox组较100 ng/mL Dox组也有显著升高(P<0.05)。SMS蛋白测定结果相似于SMS mRNA结果。SMS酶活性测定结果显示0 ng/mL Dox组显著高于100 ng/mL Dx组(P<0.001),而对照组(Huh7-tTA)1、00 ng/mL Dox组和野生型Huh7细胞组之间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论利用Tet-Off体系成功构建SMS高表达可调控Huh7细胞,SMS细胞SMS高表达受Dox剂量调控。
- 颜念龙吴满平
- 关键词：HUH7细胞
- D609增强HT-29细胞对辛伐他汀的敏感性
- 2016年
- 为了探讨D609能否提高HT-29细胞对辛伐他汀的敏感性及其可能的机制,利用不同浓度的辛伐他汀处理人结肠癌细胞(HT-29)24h,利用MTT法测定并计算出IC50。随后根据上述浓度将HT-29细胞随机分为四组:对照组、D609组、辛伐他汀组和D609+辛伐他汀组,加药处理24h后,采用MTT法检测D609和辛伐他汀对HT-29细胞增殖的影响,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹(WB)检测各组RIP140、SMS1、SMS2、BCL-2和BAX的表达。MTT实验结果显示,辛伐他汀可明显抑制HT-29细胞生长,且呈剂量依赖效应,其IC50为:67.98μmol·L-1,而辛伐他汀和D609联用可明显增强辛伐他汀对HT-29的生长抑制作用(P<0.05,n=3)。qRT-PCR和WB实验结果表明D609和辛伐他汀处理均上调了RIP140及BAX的表达,但降低了SMS1、SMS2、BCL-2的表达(P<0.05,n=3),而两者联用可显著增强这些改变(P<0.05,n=3),即D609可提高HT29细胞对辛伐他汀的敏感性,其机制可能与D609通过抑制SMS的活性和增加RIP140的表达有关。
- 熊明娣夏坤章盼盼阮昭慧李华颜念龙
- 关键词：辛伐他汀HT-29细胞
