顾汉艳
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- C型凝集素受体树突细胞特异性捕获细胞间黏附分子3非整合素细胞表达模型的构建及功能研究被引量：3
- 2014年
- 目的构建C型凝集素受体树突细胞特异性捕获细胞间黏附分子3非整合素（DC—SIGN）细胞表达模型，为后续进行DC—SIGN蛋白受体功能研究提供基础。方法PCR扩增获得DC—SIGN分子的cDNA，克隆入真核表达载体P巨细胞病毒启动子-绿色荧光蛋白重组质粒（PCMV—EGFP），EGFP位于Dc—SIGNN末端，转染人胚肾细胞癌I-IEK293T细胞后，流式细胞仪检测DC—SIGN重组分子的表达，激光共聚焦显微镜检测DC—SIGN—EGFP融合蛋白的细胞定位情况，并进一步检测转染表达的DC—SIGN受体对过敏原抗原的识别和内吞过程。结果构建的荧光融合蛋白重组表达质粒，经PCR及Western印迹证明DC—SIGN表达成功；经流式细胞仪检测转染DC—SIGN融合质粒的HEK293T细胞的DC—SIGN受体表达量增多（约50％）。重组表达质粒转染293T细胞后，激光共聚焦显微镜检测显示，绿色荧光标记的DC—SIGN位于细胞膜上，可结合红色荧光素标记的过敏原抗原Derp2，并可将Derp2内吞人细胞内。结论构建的DC—SIGN—EGFP融合蛋白在293T细胞内表达后具有细胞表面受体分子的特征性分布，可被DC—SIGN特异性抗体识别并具有摄取过敏原功能，是研究DC—SIGN分子功能的理想细胞模型。
- 张宇姚煦顾汉艳王宝玺刘军
- 关键词：受体有丝分裂原重组融合蛋白质类
- 单纯疱疹病毒包膜糖蛋白gC合成及验证被引量：1
- 2014年
- 目的 利用基因工程技术表达单纯疱疹病毒（HSV）包膜糖蛋白（gC）并进行验证.方法 分两段合成gC蛋白,分别合成基因GC-F和GC-R,并分别将基因亚克隆进pSumo-Mut（含Stu Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位点）和pCzn1（含Nde Ⅰ和XhoI酶切位点）表达载体,获得pSumo-Mut-GC-F和pCzn 1-GC-R质粒.将两重组质粒转化ArcticExpress^TM（DE3）原核宿主菌,异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达目的蛋白,经Ni柱亲和纯化,最终获得高纯度蛋白.采用Western印迹法检测重组GC-F和GC-R两段蛋白与HSV IgG的结合情况.结果 应用全基因合成方法获得GC-F和GC-R基因片段,经SDS-PAGE鉴定分析,主要分布于沉淀层,经亲和层析后获得的蛋白纯度在80％以上,并可被人抗HSV-1抗体（IgG）阳性血清识别.结论 利用基因工程技术构建融合表达载体,并经IPTG诱导成功表达gC蛋白,与HSV-1感染血清反应阳性,是后续进行功能研究的理想实验材料.
- 张宇姚煦顾汉艳王宝玺刘军
- 关键词：湿疹单纯疱疹病毒属包膜糖蛋白
