顾少华
- 作品数：109 被引量：178H指数：8
- 供职机构：上海市计划生育科学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市科学技术委员会资助项目上海市科学技术委员会科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学化学工程更多>>
- 检测乙、丙型肝炎病毒基因芯片的制备被引量：26
- 2001年
- 目的 :探讨研制检测乙型和丙型肝炎病毒的基因芯片。方法 :以 HBV、HCV高度保守的基因片段为探针 ,同时用没有同源性的植物基因片段为内参照基因 ,制备成“乙、丙型肝炎病毒双检基因芯片”。检测时抽提患者血清中的病毒核酸 ,进行RT- PCR扩增及荧光标记 ,然后与双检基因芯片杂交 ,杂交结果用 Scan Array 30 0 0扫描仪扫描。 结果 :双检基因芯片的内参照结果能做到绝对阳性和绝对阴性 ,同时对不同血清 (正常人血清 ,乙肝 E抗原阳性血清 ,丙肝 RNA阳性血清 ,乙肝、丙肝阳性混合血清 )能有效检测区分。 结论 :本研究成功地制作了乙、丙型肝炎病毒双检基因芯片 。
- 吴海顾少华胡志前许一斌徐东应康谢毅毛裕民
- 关键词：基因芯片基因诊断乙型肝炎病毒丙型肝炎病毒
- 一条人脑胶质瘤相关新基因的克隆与表达被引量：3
- 2006年
- 目的运用基因芯片技术获取正常成人脑组织与人脑胶质瘤中差异表达的基因,并对其中一条与脑胶质瘤相关的新基因进行了克隆和表达的研究。方法抽提正常成人脑组织与人脑胶质瘤组织中的mRNA来制备探针,经杂交、洗涤后,通过计算机观察二者表达谱的差异情况,对 681F05克隆子进行了Northern blot,生物信息学分析和蛋白质的表达。结果通过四次基因芯片筛选,获得15条与胶质瘤相关的新基因,经northern blot证实681F05基因在人正常脑组织中低表达, 而在人脑胶质瘤中高表达。BLASTn和BLASTx分析显示,它们编码蛋白与线虫Cyp-10蛋白同源性分别为52％和72％。cDNA序列分析发现这两个克隆是同一个基因[命名为cyclophilin—like gene (PPIL3)]的两个不同的剪切体(PPIL3a和PPIL3b)。并在大肠杆菌中得到了PPIL3a和PPIL3b与 GST较好表达的融合蛋白。结论基因芯片筛选正常脑组织与人脑胶质瘤差异表达的基因具有样品用量少,高质量,高速度,高敏感等特性。681F05基因可能是与人脑胶质瘤形成有关的一条全长新基因。
- 祁震宇惠国桢张世明李瑶周宗祥顾少华应康谢毅
- 关键词：基因芯片脑胶质瘤融合蛋白全长新基因
- HPV58型E1^E4蛋白的表达纯化和多克隆抗体的制备被引量：2
- 2012年
- 目的:构建pRSET-A\E1^E4原核表达载体,获得E1^E4蛋白的多克隆抗体。方法:在BL21(DE3)细胞中诱导E1^E4融合蛋白表达,收集包涵体经过镍柱纯化后免疫新西兰白兔,获得的抗血清经硫酸铵沉淀法纯化得到抗体。结果:经Western blotting检测表明制备的E1^E4蛋白多克隆抗体特异性较好。结论:成功获得了纯化的E1^E4蛋白抗体,有助于后续HPV58型E1^E4蛋白功能和B细胞抗原表位的研究。
- 薛冰高锦阳唐海平王健谢毅徐万祥顾少华
- 关键词：蛋白表达抗体制备
- 兔抗hCG CP22抗血清体外抑制肿瘤细胞生长的研究
- 2011年
- 目的:探讨抗原抗体反应检验若干人肿瘤细胞分泌β-hCG情况,和抗hCGCP22抗血清体外抑制肿瘤的作用。方法:采用细胞免疫荧光染色测定5个肿瘤细胞株是否表达β-hCG,用CCK-8试剂盒检测CP22抗血清(AS CP22)和β-hCG羧基端37肽(CTP)抗血清(AS CTP)体外抑制肿瘤细胞生长的光密度。结果:以AS CP22为探针和AS CTP为阳性对照,体外培养的人胰腺癌BXPC-3、人卵巢癌HO-8910和人结肠癌Lovo细胞膜上都能观察到绿色荧光,提示肿瘤细胞均表达β-hCG亚单位,而人前列腺癌PC-3和Du-145细胞则未检测到绿色荧光;与正常兔血清(NS)比较,AS CP22和AS CTP均可显著的体外抑制BXPC-3和HO-8910细胞生长,P<0.001。AS CP22抑制BXPC-3和HO-8910肿瘤细胞的作用都强于AS CTP,P<0.05。结论:人胰腺癌BXPC-3、人卵巢癌HO-8910和人结肠癌Lovo细胞在体外培养的情况下均表达β-hCG亚单位,且它们的体外生长都能被兔抗hCG嵌合肽(CP22)抗血清体外抑制。
- 何亚萍徐万祥廖矛川孙志达季朝能顾少华陈金中谢毅
- 关键词：人肿瘤细胞Β-HCG抗血清免疫荧光染色
- 人乳头瘤58型病毒E7蛋白的线性抗原表位最小基序肽
- 本发明属于生物医药与生物检测技术领域，具体为一种人乳头瘤(HPV)58型致癌性E7蛋白的抗原表位(Bcellepitope)最小基序肽及其用途。本发明提供了8个可作为抗原单独或组合用于特异检测HPV58型病毒感染患者血清...
- 徐万祥顾少华何亚萍季朝能唐海平王健孙志达谢毅
- 烟曲霉Asp f 3的线性抗原表位最小基序肽Asp f 3<Sup>123-127</Sup>及其扩展短肽
- 本发明属于生物检测技术领域，具体为烟曲霉Asp f 3的线性抗原表位最小基序肽及其扩展短肽。本发明的烟曲霉Asp f 3的线性抗原表位最小基序肽为Asp f 3<Sup>123‑127</Sup>，最小基序肽的扩展短肽为...
- 顾少华霍克克徐万祥高岩石晶季朝能谢毅
- 文献传递
- 用抑制性差减杂交构建As_2O_3诱导的NB4细胞凋亡相关基因文库
- 2009年
- 目的:构建三氧化二砷(As2O3)诱导的急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4细胞凋亡相关基因文库。方法:用含4μmol·L-1As2O3和正常培养基培养NB4细胞24h,抽提总RNA,经逆转录酶合成双链cDNA,分别以砷诱导凋亡组和对照组作为tester和driver,进行双向抑制性差减杂交(suppress-ion subtractive hybridization,SSH),筛选As2O3诱导的NB4细胞凋亡相关基因,将差异表达基因进行PCR扩增并与pGEM-Teasy克隆载体连接,转化DH5α大肠杆菌,经蓝白斑筛选获得白色阳性克隆,PCR扩增出未知基因片段。结果:成功构建了分别代表在NB4细胞中表达上调和下调的基因文库。结论:经双向抑制性差减杂交获得了NB4细胞差异表达基因文库,为克隆NB4细胞凋亡相关基因奠定了基础。
- 狄春红顾少华谭晓华仙玲玲吴奇涵杨磊
- 关键词：白血病NB4细胞三氧化二砷抑制性差减杂交凋亡
- 一条脑胶质瘤相关的全长基因的生物信息学分析被引量：1
- 2005年
- 目的报道一条脑胶质瘤相关的全长新基因的生物信息学分析及其研究的结果。方法对507E08克隆子进行了测序,生物信息学分析和Northern blot分析。结果507E08基因为全长基因,长度为2002bp,共编码203个氨基酸,命名为人核糖体蛋白L14·22。经Northern blot证实507E08基因在人正常脑组织中低表达,而在人脑胶质瘤中高表达。结论生物信息学是一种有效分析未知基因的工具。507E08基因可能是与人脑胶质瘤形成有关的一条全长新基因。
- 祁震宇惠国桢李瑶顾少华谢毅
- 关键词：生物信息学基因脑胶质瘤生物信息学分析人脑胶质瘤全长基因全长新基因BLOT
- 烟曲霉Asp f 3的线性抗原表位最小基序肽Asp f 3<sup>16-23</sup>及其扩展短肽
- 本发明属于生物检测技术领域，具体为烟曲霉Asp f 3的线性抗原表位最小基序肽及其扩展短肽。本发明的烟曲霉Asp f 3的线性抗原表位最小基序肽为Asp f 3<Sup>16‑23</Sup>，最小基序肽的扩展短肽为As...
- 顾少华霍克克徐万祥高岩石晶季朝能谢毅
- 文献传递
- 人脑胶质瘤中全长新基因PPIL3的生物信息学研究被引量：1
- 2011年
- 目的应用基因芯片技术获取正常成人脑组织与人脑胶质瘤中差异表达的基因，并对其中1条基因进行初步研究。方法抽提正常成人脑组织与人脑胶质瘤组织中的mRNA制备探针，经杂交、洗涤后，通过计算机观察两者表达谱的差异，对681F05克隆子进行Northernblot和生物信息学分析。结果通过4次基因芯片筛选，获得15条与胶质瘤相关的新基因，经Northernblot证实681F05基因在人正常脑组织中低表达，而在人脑胶质瘤中高表达。BLASTn和BLASTx分析显示，它们编码蛋白与线虫Cyp-10蛋白同源性分别为52％和72％。cDNA序列分析发现此两个克隆是同一个基因[命名为cyclophilin．1ikegene（PPIL3）]的两个不同的剪切体（PPIL3a和PPIL3b）。结论基因芯片筛选正常脑组织与人脑胶质瘤差异表达的基因具有样品用量少、高质量、高速度、高敏感等特性。681F05基因可能是与人脑胶质瘤形成有关的一条全长新基因。
- 祁震宇王中李瑶顾少华谢毅
- 关键词：基因芯片脑胶质瘤
