钱倩
- 作品数：7 被引量：20H指数：3
- 供职机构：广西医科大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广西壮族自治区自然科学基金广西医疗卫生重点科研课题更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 转录因子E2F-1对裸鼠人胃癌细胞移植瘤生长的影响被引量：6
- 2010年
- 目的 观察含有转录因子E2F-1的重组逆转录病毒载体（pLXSN-E2F-1）对裸鼠人胃癌细胞移植瘤E2F-1基因的表达和肿瘤生长的影响.方法 建立人胃癌MCC-803细胞裸鼠移植肿瘤模型,随机分为pLXSN-E2F-1组、pLXSN组、生理盐水组.隔天向各组分别注射相应药物0.2 ml,共7次,同时测量各组肿瘤体积.15 d后处死裸鼠,显微镜下观察移植瘤组织形态变化,用免疫组织化学法、半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot技术检测移植瘤中E2F-1基因的表达,脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测肿瘤细胞凋亡指数.结果 与生理盐水组和pLXSN组比较.pLXSN-E2F-1组肿瘤生长速度明显减慢（P〈0.05）;病理学观察确认所取组织为恶性肿瘤组织;免疫组织化学结果 显示pLXSN-E2F-1组的肿瘤细胞细胞质内有较多棕褐色颗粒沉着,pLXSN组和生理盐水组肿瘤细胞细胞质内均未见或偶见棕褐色颗粒沉着;半定量RT-PCR和Western blot结果 均显示pLXSN-E2F-1组E2F-1表达较pLXSN组和生理盐水组明显上调（P〈0.05）;pLXSN-E2F-1组的凋亡指数（15.4±4.1）%,显著高于pLXSN组（8.3±2.2）%和生理盐水组（8.1±2.3）%（P〈0.05）.结论 逆转录病毒载体pLXSN-E2F-1瘤内注射可抑制人胃癌裸鼠移植瘤的生长.
- 王晓通李雷钱倩谢玉波肖强
- 关键词：胃癌转录因子逆转录病毒载体
- Cdx2基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定被引量：6
- 2010年
- 目的:构建尾型同源盒基因Cdx2RNA干扰(RNAi)慢病毒表达载体并进行鉴定.方法:选取Cdx2基因的19nt特异性序列,设计针对Cdx2的shRNA序列,应用基因重组技术插入到pLentiLox3.7(pLL3.7)慢病毒表达载体中,XbaI和NotI进行双酶切和DNA测序鉴定重组克隆,重组病毒质粒及其3种辅助包装原件载体质粒通过LipofectamineTM 2000共转染293T细胞,培养48h后,收集细胞培养上清液,将其浓缩后在293T细胞中测定病毒滴度.结果:通过对pLL-Cdx2-shRNA载体进行双酶切鉴定,证实短发夹RNA正确插入慢病毒载体,DNA测序证实插入的序列正确,Cdx2基因RNA干扰重组慢病毒载体经293T细胞包装成功,收集293T细胞分泌的病毒上清测定病毒的滴度为5×107TU/mL.结论:成功构建人Cdx2基因RNAi慢病毒载体,为研究Cdx2对胃癌生长的影响提供了稳定感染细胞载体.
- 钱倩王晓通谢玉波李雷肖强
- 关键词：慢病毒载体CDX2RNAI
- E2F-1基因反转录病毒载体的构建及其对人胃癌细胞MGC-803增殖的影响被引量：1
- 2010年
- 目的:通过构建人同源基因E2F-1反转录病毒表达载体,观察E2F-1过表达对胃癌细胞MGC-803增殖的影响。方法:应用基因重组技术将E2F-1基因克隆到反转录病毒载体pLXSN中,并将经酶切和RT-PCR检测正确的重组载体转染PA317包装细胞,收集病毒上清液感染胃癌细胞MGC-803。应用RT-PCR和Western印迹法检测MGC-803/pLXSN-E2F-1细胞中E2F-1 mRNA和蛋白的表达情况。应用克隆形成实验和MTT法检测细胞的增殖情况。结果:经酶切和RT-PCR检测结果显示,成功构建E2F-1反转录病毒表达载体。与MGC-803和MGC-803/pLXSN组相比,MGC-803/pLXSN-E2F-1组E2F-1mRNA和蛋白的表达明显上调(P<0.05)。MGC-803/pLXSN-E2F-1组的克隆形成率为48%,明显低于MGC-803组的81%和MGC-803/pLXSN组的77%,差异有统计学意义(P<0.01)。MGC-803/pLXSN-E2F-1组的细胞增殖率明显慢于MGC-803组和MGC-803/pLXSN组(P<0.01)。结论:成功构建了E2F-1基因过表达的反转录病毒表达载体,并将其成功感染MGC-803细胞,E2F-1过表达可抑制MGC-803细胞的增殖。
- 钱倩李雷王晓通苑汐子谢玉波肖强
- 关键词：胃肿瘤反转录病毒科
- RNA干扰介导的转录因子E2F-1沉默对人胃癌裸鼠移植瘤生长的影响被引量：5
- 2011年
- 目的 观察转录因子E2F-1基因RNA干扰（RNAi）的重组慢病毒载体（pLL-E2F-1-shRNA）对人胃癌裸鼠移植瘤E2F-1基因的表达和肿瘤生长的影响.方法 建立人胃癌裸鼠移植瘤模型,随机分为pLL-E2F-1-shRNA组,pLL3.7组,生理盐水组.隔天向各组分别注射相应药物0.2 ml,共6次,并测量各组肿瘤体积.11 d后处死裸鼠,显微镜观察移植瘤组织形态变化;免疫组织化学法、半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot检测移植瘤中E2F-1基因的表达,脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记（TUNEL）检测肿瘤细胞凋亡指数.结果 与生理盐水组和pLL3.7组比较,pLL-E2F-1-shRNA组肿瘤生长速度明显减慢（P＜0.05）;病理学观察确认所取组织为恶性肿瘤组织;免疫组织化学结果显示pLL3.7组和生理盐水组的肿瘤细胞细胞核内有少量棕褐色颗粒沉着,pLL-E2F-1-shRNA组肿瘤细胞细胞核内均未见或偶见棕褐色颗粒沉着;半定量RT-PCR和Western blot结果显示pLL-E2F-1-shRNA组E2F-1 mRNA表达较pLL3.7组和生理盐水组明显下降（P＜0.05）,E2F-1蛋白表达较pLL3.7组和生理盐水组减少75.2%和83.9%;pLL-E2F-1-shRNA组的凋亡指数（16.7±5.6）%明显高于pLL3.7组（10.5±4.1）%和生理盐水组（11.2±4.3）%（P＜0.05）.结论 慢病毒载体pLL-E2F-1-shRNA瘤内注射可抑制人胃癌裸鼠移植瘤的生长.
- 王晓通钱倩李雷谢玉波肖强
- 关键词：慢病毒载体RNA干扰E2F-1胃癌
- E2F-1基因过表达影响胃癌MGC-803细胞对化疗药物敏感性的研究被引量：3
- 2009年
- 目的:构建E2F-1真核表达载体,建立稳定过表达E2F-l的胃癌细胞株,探讨E2F-l基因过表达对胃癌MCC-803细胞化疗敏感性的影响方法:应用Tri zol法从胃癌的癌组织中提取mRNA逆转录合成cDNA,按Gene-Bank公布的E2F-1基因序列设计带有酶切位点的引物并行扩增获得E2F-1的ORF片段;然后经限制性内切酶EcoR l和Hind Ⅲ双酶切后将E2F-1定向克隆到真核表达载体pCMV-HA2中转化筛选用脂质体Lipofectamine2000将该载体转染MGC-803胃癌细胞,然后用含G418的培养基筛选获得具Genectin抗性的过表达E2F-1的胃癌细胞株实时定量PCR( real-time quantitative PCR)和蛋白印迹(Western blotting)技术检测MGC-803/E2F-1细胞内E2F-1表达情况四唑蓝(MTT)法检测MGC-803/E2 F-1组(实验组)、MGC-803/EV组(阴性对照组)和MCC-803组(未转染组)细胞对化疗药物的敏感性结果:重组载体pCMV-E2F-1-HA2经EcoR I和Hind Ⅲ双酶切后得到预期片段,测序结果与报道的E2F-1基因之0RF完全一致,证明目的基因已成功克隆入真核表达载体,获取具Genectin抗性的细胞克隆、并进行了扩增。RT-PCR和Western blotting实验证实重组载体pCMV-E2F-l-HA2成功转入胃癌细胞内,并稳定过表达E2F-1 MTT法检测发现,5-氟尿嘧啶(5-FL)、阿霉素(ADM)、丝裂霉素(MMC)对MGC-803/E2F、-1组细胞的抑制率分别为71.45%、74.03%、76.72%,均明显高于MGC-803/EV组(45.58%、53.69%、54.58%)和MGC-803组(53.70%、54.67%、55.05%) (P<0.05)结论:成功构建了真核表达载体pCMV-E2F-1-HA2,并建立了稳定过表达E2F-1的胃癌细胞株MGC-803/E2F-1。E2F-1过表达增强了胃癌细胞对化疗药物的敏感性。
- 钱倩王长青李雷谢玉波肖强
- 关键词：E2F-1转染药敏试验
- E2F-1过表达逆转录病毒载体的构建及其对裸鼠人胃癌皮下瘤生长的影响
- 目的通过构建人同源基因E2F-1逆转录病毒表达载体,观察过表达E2F-1基因对胃癌MGC-803细胞增殖的影响。
方法应用基因重组技术将E2F-1基因克隆到逆转录病毒载体pLXSN中,进行酶切鉴定。重组体和逆...
- 钱倩
- 关键词：逆转录病毒载体E2F-1基因重组逆转录病毒载体E2F-1胃癌移植瘤
- 文献传递
- 转录因子E2F-1基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定
- 2010年
- 目的:构建细胞周期相关转录因子E2F-1RNA干扰(RNAi)慢病毒表达载体。方法:选取E2F-1基因的19nt特异性序列,设计针对E2F-1的shRNA序列,应用基因重组技术克隆到pLentiLox3.7(pLL3.7)慢病毒表达载体中,XbaI和NotI进行双酶切和DNA测序鉴定重组克隆,在脂质体的介导下将慢病毒的混合包装载体质粒和包含E2F-1基因RNAi的重组慢病毒载体共转染293FT细胞,包装成病毒48h后,收集病毒颗粒,孔稀释法测定病毒滴度。结果:双酶切证实shRNA正确插入慢病毒载体,DNA测序证实插入的序列正确;293FT细胞包装E2F-1基因RNAi的重组慢病毒载体成功;收集的细胞培养上清液中,病毒的滴度为5×107TU/mL。结论:成功构建人E2F-1基因RNAi慢病毒载体,为研究E2F-1对于胃癌生长的影响提供了稳定的转染细胞载体。
- 王晓通李雷钱倩谢玉波肖强
- 关键词：慢病毒载体E2F-1RNAI
