郭学军
- 作品数：10 被引量：16H指数：3
- 供职机构：解放军农牧大学军事兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划军队医药卫生科研基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 重组绿脓杆菌外毒素A受体结合区蛋白的初步复性及细胞生物学活性检测
- 1998年
- 用逐步稀释透析法将纯化的大肠杆菌表达的重组绿脓杆菌外毒素（ＰＥＡ）受体结合区蛋白初步复性，复性后的可溶性蛋白用于竞争抑制ＰＥＡ的细胞毒性实验。将１０ｎｇ／ｍｌ的ＰＥＡ与其敏感细胞Ｌ９２９共孵育，３６ｈ左右可见细胞发生病变死亡，而同时加入复性的重组ＰＥＡ受体结合区蛋白的培养细胞孔与未加ＰＥＡ阴性对照培养细胞一样仍分裂增殖，这种ＰＥＡ细胞毒性抑制作用可持续到所有培养细胞老化死亡。由此可见，重组ＰＥＡ受体结合区蛋白可在体外竞争抑制ＰＥＡ对Ｌ９２９细胞的毒性。
- 刘晓明马从林郭学军朱平王瑾琪甄英凯
- 关键词：细胞毒性
- 重组绿脓杆菌外毒素A受体结合区蛋白的初步复性及细胞生物学活性检测被引量：3
- 1998年
- 用逐步稀释透析法将纯化的大肠杆菌表达的重组绿脓杆菌外毒素Ａ（ＰＥＡ）受体结合区蛋白初步复性，复性后的可溶性蛋白用于竞争抑制ＰＥＡ的细胞毒性实验。将１０μｇ／Ｌ的ＰＥＡ与其敏感细胞Ｌ９２９共孵育，３６ｈ左右可见细胞发生病变死亡，而同时加入复性的重组ＰＥＡ受体结合区蛋白的培养细胞孔与未加ＰＥＡ阴性对照培养细胞一样仍分裂增殖，这种ＰＥＡ细胞毒性抑制作用可持续到所有培养细胞老化死亡。结果表明，重组ＰＥＡ受体结合区蛋白可在体外竞争抑制ＰＥＡ对Ｌ９２９细胞的毒性。
- 刘晓明马丛林郭学军朱平王瑾琪甄英凯
- 关键词：绿脓杆菌外毒素A细胞毒性
- 重组含绿脓杆菌外毒素A受体结合区蛋白的表达、纯化、复性及细胞生物学活性研究
- 1997年
- 绿脓杆菌是烧伤及外科手术感染的主要病原菌之一,而绿脓杆菌外毒素A(PEA)是该菌的最主要的毒力因子之一,极微量的PEA便可引起肝、肾等组织细胞死亡,进而导致肝、肾等多器官功能衰竭,这是临床上绿脓杆菌感染后高死亡率的主要原因。同时,PEA还严重影响创口的愈合。目前临床上对于绿脓杆菌感染的控制以及对PEA毒血症的防治尚无有效的方法与手段。
- 刘晓明马丛林郭学军朱平石瑾琪
- 关键词：绿脓杆菌感染外毒素A包含体复性毒力因子
- LRH-PE40重组毒素的高效表达及其特异性细胞毒性
- 1997年
- 将肿瘤特异性抗体、细胞因子和激素等导向物质与毒性分子如动植物毒素、放化疗药物、细菌毒素等用化学方法偶联起来或用基因融合的方法将各自的基因连接起来表达融合蛋白,制成具有特异靶向特性及细胞毒性作用的导向药物,即所谓“生物导弹”,可以选择性地杀伤相应的抗原相关细胞或受体相关细胞,对其他无关细胞则较少或无影响。这项技术在肿瘤治疗、器官移植、自体免疫病和慢性感染等疾病的治疗上,显示出广阔的前景。
- 孟锐奇朱平姚湘燕马丛林马丛林冯书章郭学军
- 关键词：重组毒素特异性抗体细胞毒性作用基因融合
- 谷胱甘肽过氧化物抗体酶ScFv的基因构建
- 1998年
- 特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株５Ｃ９所分泌的ＭｃＡｂ经化学修饰后，其抗体酶活性比兔肝谷胱甘肽过氧化物酶活性高２．６倍。在所建成的杂交瘤细胞株基础上，通过提取该细胞总ＲＮＡ，分离ｍＲＮＡ，反转录合成ｃＤＮＡ，以及ＶＨ和ＶＬ基因的ＰＣＲ扩增、组装，成功地构建了谷胱甘肽过氧化物抗体酶ＳｃＦｖ基因。电泳分析证明，ＶＨ和ＶＬ基因长度分别为３４０ｂｐ和３２５ｂｐ；所构建的ＳｃＦｖ基因长度约为７５０ｂｐ，并带有ＳｆｉⅠ和ＮｏｔⅠ切点，可用于ＳｃＦｖ的基因重组及其表达。
- 冯书章刘子郭学军张国利吴广谋罗贵民高姝娟
- 关键词：谷胱甘肽过氧化物酶抗体酶基因构建
- 含绿脓杆菌外毒素A受体结合区重组蛋白的纯化被引量：5
- 1998年
- 将表达含绿脓杆菌外毒素（ＰＥＡ）受体结合区基因的质粒ｐＥＴ－ＥＡＢ转化到大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中，经ＩＰＴＧ诱导表达了含ＰＥＡ受体结合区的重组蛋白（称ＰＥ３４）。ＰＥ３４主要以包涵体形式存在于大肠杆菌中，用溶菌酶－脱氧胆酸钠法结合超声波裂解法破碎细菌，离心制备包涵体。用２ｍｏｌ／Ｌ脲洗涤包涵体后，包涵体纯度可达７５％，在８ｍｏｌ／Ｌ脲存在条件下，ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００凝胶滤过，ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦａｓｔＦｌｏｗ离子交换层析纯化，获得ＳＤＳ－ＰＡＧＥ１条带的ＰＥ３４，纯度达９５．８％，得率为２４．５％。
- 刘晓明郭学军马从林朱平孟锐奇李吉平
- 关键词：绿脓杆菌外毒素A大肠杆菌包涵体纯化
- 绿脓杆菌外毒素A受体结合亚单位基因的克隆与表达被引量：9
- 1997年
- 为防治绿脓杆菌感染造成的细胞坏死及多器官衰竭，本试验克隆了含绿脓杆菌外毒素Ａ（ＰＥＡ）结合亚单位（Ⅰ区）和部分跨膜亚单位（Ⅱ区）编码３０９个氨基酸的约１０００ｂｐ的基因片段，以正确阅读框架将该片段置于原核高效表达Ｔ７启动子下游，构建了高效表达质粒ｐＥＴ－ＥＡＢ。转化宿主菌ＢＬ２１（ＤＥ３）、ＨＭＳ１７４（ＤＥ３）、ＨＭ１７４（ＤＥ３）ｐｌｙｓＳ和ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐｌｙｓＳ后，经ＩＰＴＧ诱导４ｈ，均表达了外源目的基因蛋白，其中ＢＬ２１（ＤＥ３）和ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐｌｙｓＳ的表达量明显高于其他宿主菌。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，外源蛋白分子量约３４０００，与ＰＥＡⅠ区和部分Ⅱ区基因所编码的蛋白理论估计值相符，命名为ＰＥ３４。凝胶薄层扫描显示，ＰＥ３４含量占菌体蛋白总量的５６％。
- 郭学军刘晓明朱平刘子孟锐奇马丛林冯书章
- 关键词：绿脓杆菌外毒素克隆
- 具有谷胱甘肽过氧化物酶活性的单克隆抗体的制备及鉴定被引量：1
- 1998年
- 对自由基的研究表明，多种疾病的发生和发展，如缺血性心脏病、脑缺血、肿瘤、白内障、各种炎症及生理衰老等，都与自由基代谢紊乱有密切联系［１］。谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＰＸ）是一种重要的抗氧化药物，它能阻断原发性自由基造成的损伤，或使已受自由基损伤的组织免遭...
- 张国利刘子冯书章冯书章郭学军吴广谋高姝娟
- 关键词：GPX谷胱甘肽过氧化物酶单克隆抗体
- 绿脓杆菌外毒素A受体结合亚单位基因的克隆与表达
- 1997年
- 绿脓杆菌外毒素A(PEA)是绿脓杆菌感染的最主要致病因子,它由3个区域共613个氨基酸组成,分子质量66 ku。在体内,毒素先由Ⅰ区(受体结合亚单位)识别细胞表面受体并与之结合,而后,通过Ⅱ区(跨膜亚单位)将具有ADP-核糖基化活性的毒性单位导入胞浆,使Ⅲ区(毒力亚单位)发挥毒力作用,催化细胞内的延长因子2(EF-2)发生ADP-核糖基化反应,使EF-2灭活,抑制蛋白合成而杀灭细胞。在这种结合、入胞。
- 郭学军刘晓明朱平刘子孟锐奇马丛林冯书章
- 关键词：外毒素A绿脓杆菌受体结合蛋白合成
- 具有GPX活性的单克隆抗体可变区基因的克隆和序列分析被引量：2
- 2000年
- 目的利用分泌具有GPX活性的单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞3G5,克隆其mAb体的可变区基因。方法提取杂交瘤细胞的总RNA ,分离mRNA ,反转录合成cDNA。经PCR扩增VH 基因和VL 基因 ,将VH 基因和VL基因与载体 pGEM T连接后 ,进行酶切鉴定和序列分析。结果构建了2个分别含有VH 和VL 基因的重组质粒。序列分析表明 ,VH 和VL 分别属于mouscheavychainsubgroupIII和mouselightchainsubgroupV亚群 ,长度为372和324bp ,编码124和108个氨基酸 ,在高变区分别有4和2个丝氨酸。结论克隆的VH 和VL 基因符合功能性重排的鼠抗体可变区基因特征 ,为将来制备具有GPX活性的单链抗体提供了可靠的基因材料。
- 吴广谋冯书章刘子张国利郭学军罗贵民高姝娟
- 关键词：谷胱甘肽过氧化物酶单克隆抗体可变区基因
