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携带可诱导共刺激分子基因的重组腺病毒载体构建及其在小鼠间充质干细胞中的表达被引量：4: 2012年; 目的阻断可诱导共刺激途径协同骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)可能能增强急性移植物抗宿主病(acute graft versus host disease,aGVHD)的防治作用。文中旨在构建携带小鼠可诱导共刺激分子(inducible costimula-tor,ICOS)基因的重组腺病毒载体,转染小鼠骨髓MSCs,为转基因治疗提供实验基础。方法设计含有EcoRⅠ、SalⅠ酶切位点的引物,PCR扩增ICOS,将扩增产物克隆到穿梭质粒PDC318上,筛选阳性克隆,测序鉴定正确,将其与含有5型腺病毒右臂的质粒pPE3-F11B-EGFP在293细胞中同源重组,筛选获得含有ICOS基因的重组腺病毒质粒,行PCR鉴定。重组腺病毒质粒转染293细胞,扩增后用氯化铯密度梯度离心纯化病毒,用50%组织培养感染剂量法测定病毒滴度,并转染小鼠MSCs。结果重组腺病毒质粒经鉴定,证实含有ICOS基因,病毒滴度为6.54×109pfu/ml。转染小鼠MSCs,荧光显微镜下可见较多绿色荧光蛋白表达,流式细胞仪检测ICOS表达率为90.16%。结论成功构建了携带小鼠ICOS基因的重组腺病毒载体,并获得高滴度的病毒,能高效转染小鼠MSCs,为后续研究奠定了基础。; 王利平包晓辰魏玮陈洁邵宇王健民钱其军; 关键词：腺病毒载体可诱导共刺激分子间充质干细胞基因治疗

一种利用实时定量PCR扩增单核甘酸多态性（SNP）位点的检测异基因移植后嵌合率的新方法: ＜正＞目的:建立一种SNP-PCR定量检测异基因移植后供受嵌合率（DC）的新方法,探讨其可行性、准确性及优越性。方法:利用18个SNP位点筛选移植前每一对供受者,实时定量PCR（RQ-PCR）对筛选出的差异位点行嵌合率定; 邵宇王健民龚胜兰蔡在龙章卫平宋献民; 文献传递

一种基于单核苷酸多态性位点的定量检测异基因造血干细胞移植后嵌合率的新方法被引量：9: 2010年; 目的建立一种单核苷酸多态性-聚合酶链反应（SNP—PCR）定量检测异基因造血干细胞移植后供受嵌合率的新方法，探讨其可行性、准确性及优越性。方法利用18个SNP位点筛选移植前每一对供、受者，采用实时定量PCR（RQ—PCR）对筛选出的差异位点行嵌合率定量分析，通过倍比稀释、模拟嵌合与微卫星重复序列-PCR（STR—PCR）、性染色体双色荧光原位杂交（XY．FISH）和融合基因的定量检测，比较、验证方法的准确性及敏感度。结果①利用内参质粒标准品扩增的17次标准曲线，平均斜率为-3．39，平均截距为39．97，相关系数均〉0．995，扩增效率接近理想水平；批内差及批间差分别为0．50％和1．10％，在可控范围；与模拟混合嵌合相关系数在0．99以上；可重复敏感度达0．01％。②40例移植患者中，95％以上可以筛选出供、受者差异SNP位点；SNP—PCR与STR．PCR结果吻合率达96．7％，与XY—FISH结果比较差异无统计学意义（P〉0．05）；SNP—PCR与特定白血病融合基因检测结果比较，完全嵌合（CC）标本均未检出肿瘤相关的融合基因，部分嵌合（MC）标本融合基因均为阳性。结论SNP—PCR检测嵌合率准确、敏感、易行，具有极高的临床应用前景，克服了STR—PCR竞争抑制及扩增平台期偏倚的缺点，可以替代其进行临床常规检测。; 邵宇王健民龚胜兰蔡在龙章卫平宋献民王利平; 关键词：造血干细胞移植嵌合体聚合酶链反应

硼替佐米通过下调Jukat细胞系11β-羟基类固醇脱氢酶2型（11β-HSD2）表达而增加其对糖皮质激素诱导凋亡的敏感性: ＜正＞目的:11β-HSD2可以将有活性的激素（hydrocortisone,cortisol）转化成无活性的激素（cortisone）,可能是肿瘤细胞受体前激素耐药的机制之一。研究硼替佐米能否改善白血病细胞激素耐药以及...; 陶怡王健民章卫平周虹宋宁霞邵宇; 文献传递

树突状细胞(DC)在硼替佐米对急性移植物抗宿主病的(aGVHD)不同效应中起重要作用: 目的:为扩大蛋白酶体抑制剂硼替佐米的临床应用价值,研究其在何种条件下改善aGVHD以及涉及机制探讨。方法:在建立小鼠aGVHD模型(C57BL/6→BALB/C)的基础上,首先在一定数目供体淋巴细胞输注条件下(脾细胞SC...; 陶怡王健民邵宇宋宁霞周虹吕书晴杨建民; 文献传递

伴有PDGFRβ基因异常的骨髓增生异常/增殖性肿瘤综合征的临床和实验研究被引量：4: 2010年; 目的探讨伴有血小板衍生生长因子β（PDGFRβ）基因异常的骨髓增生异常/增殖性肿瘤（MDS/MPN）综合征的临床和实验室特征.方法按常规方法制备骨髓细胞染色体标本,用RHG显带技术进行核型分析;分别应用PDGFRβ、PDGFRα、FGFR1分离探针,5号、12号全染色体涂抹探针,进行双色荧光原位杂交（D-FISH）和染色体涂抹分析;定量PCR方法检测JAK2 V617F基因.结果 27例患者临床和血液学改变符合MDS/MPN综合征诊断,用D-FISH技术从中筛查出4例患者伴有PDGFRβ基因的重排,其中2例用涂染技术证实为t（5;12）.4例PDGFRβ阳性的MDS/MPN患者均未检测到PDGFRα、FGFR1、JAK2 V617F基因异常.结论 PDGFRβ重排可见于部分MDS/MPN患者.这类疾病应被归入＂伴有PDGFRβ异常的髓系肿瘤＂的范畴,嗜酸粒细胞增高并不是它们的共同临床表现,用FISH技术筛查PDGFRβ基因是一种简便、可靠的检测手段,对于提高诊断水平及指导临床用药具有重要意义.; 龚胜蓝邱慧颖宋献民邵宇王健民; 关键词：基因重排

异基因造血干细胞移植后早期嵌合率检测的预后意义: ＜正＞目的:研究异基因造血干细胞移植后供体细胞嵌合状态的形成、转归及早期+7d及+14d嵌合率对移植后严重并发症的预测作用。方法:对51例接受异基因造血干细胞移植患者进行一般特征回顾性比较,采用实时定量PCR扩增单核苷酸...; 邵宇王健民章卫平宋献民程辉陈洁龚胜兰; 文献传递

小鼠白血病细胞B7-H2的表达及其对造血干细胞移植GVL效应的影响: 目的:检测小鼠白血病细胞系上B7-H2的表达情况,探讨其对异基因造血干细胞移植GVL效应的影响。方法:通过流式细胞术及实时定量PCR的方法检测小鼠白血病细胞上B7-H2的表达及其胞内mRNA水平;选用小鼠淋巴瘤细胞株A2...; 王斌王健民程辉周虹邵宇王利平庄晓萌章卫平宋宁霞; 文献传递

嗜酸性粒细胞增多及细胞遗传学异常对急性非淋巴细胞白血病M4预后的影响:GIMEMA试验被引量：2: 2009年; 1 文献来源 M4 acute myeloid leukemia：The role of eosinophilia and cytogenetics in treatment response and survival The GIMEMA experience [J]. Haematologica, 2008, 93（7）： 1025 -1032.; 王健民邵宇佘妙容; 关键词：细胞遗传学预后

可诱导共刺激分子基因修饰的骨髓间充质干细胞明显减轻小鼠急性移植物抗宿主病: ＜正＞目的:通过构建携带ICOS基因的腺病毒载体,高效转染小鼠MSCs后,输入aGVHD模型小鼠体内,观察其对小鼠aGVHD的影响,并阐明可能的机制。方法:构建Ad5/F11b-mICOS-EGFP腺病毒载体,同时设空病...; 王利平王健民包晓辰庄晓萌程辉宋宁霞胡晓霞邵宇周虹; 文献传递

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邵宇

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