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我国地方品种鸡IL-17 cDNA的克隆、表达及鉴定被引量：1: 2011年; 目的:克隆我国地方品种鸡IL-17 cDNA,构建该基因的原核表达质粒,获得融合表达蛋白并鉴定其免疫特性。方法:利用特异性引物,通过RT-PCR方法扩增得到隐性白羽鸡IL-17(ChIL-17)的基因片段,PCR产物克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中,构建重组表达质粒pGEX-6P-1-ChIL17。将重组质粒pGEX-6P-1-ChIL17转化E.coliBL21,IPTG诱导表达目的蛋白,应用SDS-PAGE和Western blot分析鉴定表达产物。结果:成功扩增出ChIL-17基因片段,大小约510 bp,序列与GenBank登录的序列(NM 204460)相比,核苷酸同源性为99.8%,第477位碱基由G变为A,氨基酸同源性为100%。酶切鉴定结果表明,ChIL-17基因正确克隆入原核表达载体pGEX-6P-1中。重组质粒pGEX-6P-1-ChIL17在大肠杆菌中获得表达,SDS-PAGE结果显示出Mr约46 000大小的目的蛋白表达条带;Western blot结果表明,表达产物与小鼠IL-17抗体具有良好的反应性。结论:成功克隆并表达出我国地方品种鸡ChIL-17基因,为抗ChIL-17单克隆抗体的研制奠定了基础。; 赵雯潘志明耿士忠方强丛秋霞焦新安; 关键词：IL-17 克隆原核表达

密码子优化的鸡IL-17在昆虫细胞中的表达: 为了获得具有良好生物学活性且具有较高表达量的鸡IL-17，在前期研究工作基础上，将其编码基因按照真核细胞(昆虫细胞)偏爱的密码子进行优化改造，经全基因合成后插入到转座载体pFastBacnTM I中，构建重组转移载体pf...; 康喜龙潘志明杨芸赵雯焦新安; 关键词：杆状病毒编码基因真核表达昆虫细胞

麻鸭白细胞介素17的原核表达及鉴定被引量：1: 2011年; 为表达麻鸭白介素17(duIL-17),本研究提取ConA刺激的麻鸭脾脏淋巴细胞总RNA,RT-PCR扩增duIL-17基因片段,将该片段插入克隆载体pCR2.1中构建重组质粒pCR2.1-duIL17。将duIL-17基因片段亚克隆到原核表达载体pGEX-6P-1中,构建重组质粒pGEX-duIL17,将其转化到大肠杆菌BL21中,IPTG诱导表达。测序结果显示,duIL-17与参考序列(EU366165.1)相比较第174位碱基由C突变为T,并且为沉默突变。SDS-PAGE和westernblot分析显示,诱导表达的重组蛋白GST-duIL17主要以包涵体形式存在,分子量大小约为45ku,duIL-17与抗鸡IL-17抗体具有良好反应性。本研究为制备duIL-17单克隆抗体提供了实验依据。; 赵雯潘志明耿士忠康喜龙方强丛秋霞焦新安; 关键词：麻鸭 IL-17 原核表达免疫反应性

密码子优化的鸡白细胞介素-17在昆虫细胞中的表达研究: 2013年; 为了获得具有良好生物学活性且具有较高表达量的鸡白细胞介素-17(ChIL-17),本研究在前期研究工作基础上,将ChIL-17的编码基因按照真核细胞(昆虫细胞)偏爱的密码子进行优化改造,经全基因合成后插入到转座载体pFastBacTMⅠ中,构建重组转移质粒pfast-mod.ChIL-17并转化DH10Bac感受态细胞。通过位点特异性转座将mod.ChIL-17基因整合到穿梭质粒Bacmid中,获得重组穿梭质粒Bacmid-mod.ChIL-17。应用脂质体将重组穿梭质粒转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rBac-mod.ChIL-17。重组病毒传代扩增感染Sf9细胞,通过间接免疫荧光检测目的蛋白的表达。结果表明,经过优化的ChIL-17在杆状病毒系统中获得表达。; 康喜龙王静潘志明杨芸赵雯焦新安; 关键词：密码子优化杆状病毒真核表达

中国部分地方品种鸡TLR5基因的克隆与序列分析: Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)广泛表达在天然免疫系统,是一类I型跨膜糖蛋白,由胞外区、跨膜区和胞质区组成.研究显示,TLR5是细菌鞭毛蛋白(flagellin)的识别受体,介导机体针对鞭毛...; 方强潘志明耿士忠赵雯丛秋霞康喜龙焦新安; 关键词：遗传多态性

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赵雯