赵英
- 作品数：34 被引量：156H指数：10
- 供职机构：石河子大学农学院园艺系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技攻关计划引导项目北京市农林科学院博士后基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 苹果茎痘病毒库尔勒香梨分离物外壳蛋白基因的原核表达被引量：1
- 2010年
- 【目的】苹果茎痘病毒为潜隐性病毒,该病毒寄主范围和分布广泛,能侵染多种果树。目前侵染新疆库尔勒香梨,造成了严重的经济损失,研究了解ASPV的功能基因及治病机理,并诱导其表达,制备出高效的血清,将病害的损害度降到最低。【方法】用新疆库尔勒香梨携毒枝条的韧皮部提取苹果茎痘病毒RNA,根据已经公布ASPV(EU095327)核苷酸序列,设计合成1对CP基因的引物,通过RT-PCR扩增出CP基因,将其克隆至表达载体pET-3a中。【结果】经测序表明,目的基因CP已正确地整合至表达质粒中。【结论】重组质粒转化大肠杆菌BL21,在不同时间下诱导均获得了表达,且表达蛋白产物的分子质量大小与预期值一致,并可被特异性抗体所识别。
- 李文慧赵英牛建新刘娜叶春秀
- 关键词：苹果茎痘病毒CP基因克隆原核表达
- 梨树组织中的苹果锈果类病毒原位RT-PCR检测被引量：12
- 2008年
- 利用自行设计的方法分离提取总RNA,通过一对特异引物,分别扩增出不同梨树品种上苹果锈果类病毒(ASSVd)的特异片段,经由回收、克隆和测序,有10条序列已在GenBank(EU031467-EU031476)登录,利用克隆的ASSVd质粒,通过RT-PCR合成了生物素标记的cDNA探针,建立了斑点杂交检测技术。在此基础上以已知带有苹果锈果类病毒的库尔勒香梨和无类病毒梨树叶片为材料,利用DIG标记,研究了梨树类病毒的叶片石蜡切片IS-RT-PCR检测技术。包括SuperScriptⅡ浓度、4种碱基混合物(dNTPs)、RNA酶抑制剂(RNasin)及互补引物浓度对cDNA合成的影响,退火温度、LA Taq DNA聚合酶、Mg2+、引物浓度及循环次数对原位PCR效果的影响。研究结果表明:RNasin的用量大于0.2U/μL时,信号强度随着RNasin量的加大而增强;只有当dNTPs浓度达0.4mmol/L时才能生成一定量的cDNA;SuperScriptⅡ浓度在0.5￣1.3U/μL均可进行正常的逆转录,而且在该范围内产物的量随SuperScriptⅡ浓度提高而增多;引物浓度达到0.9μmol/L以上时才能进行有效的逆转录,并且生成的cDNA的量随引物浓度增大而增加。原位扩增ASSVd的cDNA适合退火温度为62℃。循环30￣35次可出现较强的蓝色信号,引物浓度在0.8￣1.2μmol/L时显色较好;LA Taq酶浓度为0.004U/μL以上,均显示较深的蓝色;Mg2+浓度为1.5mmol/L就可满足原位PCR所需。
- 赵英牛建新
- 关键词：苹果锈果类病毒CDNA探针
- 新疆桃树上苹果锈果类病毒(ASSVd)的检测与全序列分析
- 1983年,日本小金泽硕首次报道在病果中检出类病毒 RNA,随后中国学者(陈炜等,1986) 也从病树枝条上检出类病毒,测定明确了核糖核酸的碱基序列,并证明了这种病毒的致病性,至此才确认了苹果锈果病是由一种类病毒引起的病...
- 赵英牛建新
- 文献传递
- 沙棘嫩枝扦插关键技术被引量：5
- 2016年
- 以青河县主栽沙棘品种＂向阳＂为试材,设不同扦插时间、不同基质处理、不同扦插密度3个影响因素,研究不同处理对沙棘嫩枝扦插的效果,筛选沙棘嫩枝扦插的最佳组合方式。结果表明：不同处理对沙棘嫩枝扦插均有显著影响;嫩枝扦插插穗的采集应在6月15日至7月10日进行,沙土及腐殖质土是嫩枝扦插的理想基质,当扦插密度为400~600株·m-2时,不仅生根率及成活率高,而且地径也较为粗壮,插穗生长最佳。
- 张西珍赵英牛建新陆阳
- 关键词：沙棘嫩枝扦插育苗
- 利用两种方法检测苹果锈果类病毒被引量：4
- 2008年
- 以克隆ASSVd的部分序列,通过RT-PCR成功合成了地高辛标记的cDNA探针,提取苹果和梨树枝条的总RNA,用斑点杂交技术对其进行了检测试验,结果表明,探针具有很高的灵敏度和特异性。地高辛标记的cDNA探针不与阴性对照枝条RNA以及感染PBCVd、AFCVd、ADFVd枝条总RNA发生杂交,仅与感染ASSVd样品的总RNA杂交。
- 赵英牛建新
- 关键词：RT-PCR地高辛标记探针
- 沙棘离体叶片再生体系建立
- 沙棘作为一种具有高生态价值与经济价值的树种,近年来发展迅速。由于实生繁殖难以保留其母本优良性状,故以无性繁殖为主。建立并优化沙棘的离体叶片再生体系,不仅能为生产提供技术支持,还能为沙棘的遗传转化研究奠定基础。以沙棘离体培...
- 徐航赵英牛建新
- 关键词：沙棘不定芽
- 文献传递
- 葡萄病毒B的RT-PCR检测技术研究
- 从感染葡萄病毒B的葡萄皮层中提取总RNA，以其为模板合成cDNA第一链并进行PCR扩增，同时利用提取的总RNA为模板进-步RT-PCR扩增，二者均能获得与预期片段大小一致长约460 bp的扩增产物;回收PCR特异扩增产物...
- 杨相昆赵英刘娜牛建新王林代永欣
- 关键词：RT-PCR检测技术重组质粒同源性
- 文献传递
- 梨组织中苹果褪绿叶斑病毒的原位RT-PCR检测被引量：12
- 2007年
- 为了建立梨树苹果褪绿叶斑病毒原位RT-PCR检测技术，用已知带有苹果褪绿叶斑病毒的库尔勒香梨和无病毒实生苗叶片为材料，利用DIG标记，研究了香梨病毒的叶片石蜡切片IS-RT-PCR检测技术。包括AMV逆转录酶、dNTPs、RNasin及互补引物浓度对cDNA合成的影响，退火温度、TaqDNA聚合酶、Mg^2＋、引物浓度及循环次数对原位PCR效果的影响。结果表明：RNasin的用量大于0．2U·μL^-1时，信号强度随着RNasin量的加大而增强；只有当dNTPs浓度达1．0mmol·L^-1时才能生成一定量的cDNA；AMV浓度在0．3-0．5U·μL^-1均可进行正常的逆转录，而且在该范围内产物的量随AMV浓度提高而增多；引物浓度达到0．9μmol·L^-1以上时才能进行有效的逆转录，并且生成的cDNA的量随引物浓度增大而增加。原位扩增ACLSV的cDNA适合退火温度为56℃。循环20-30次可出现较强的蓝色信号，引物浓度在0．8-1．2μmol·L^-1时显色较好；Taq酶浓度为20U·μL^-1以上，均显示较深的蓝色；Mg^2＋浓度为1．5mmol·L^-1就可满足原位PCR所需。获得了苹果褪绿叶斑病毒的原位PCR优化检测体系，利用建立的优化程序对香梨样品进行了检测验证，取得了很好效果。
- 牛建新周民生马兵钢赵英刘宏
- 关键词：库尔勒香梨苹果褪绿叶斑病毒原位PCR
- 利用原位杂交及原位RT-PCR技术检测梨树组织中苹果茎痘病毒的分布被引量：7
- 2008年
- 【目的】搞清苹果茎痘病毒在梨树组织中的分布,为茎尖脱毒提供直接的理论依据和技术支撑。【方法】以库尔勒香梨茎尖、叶片为材料,利用非放射性标记物地高辛(DIG),通过RT-PCR反应体系,合成了苹果茎痘病毒的cDNA探针,利用核酸探针斑点杂交检测方法对该探针特异性及灵敏度进行验证。研究制作了适合原位PCR及原位杂交的石蜡切片,利用原位反转录酶聚合酶链式反应(IS-RT-PCR)技术检测石蜡切片组织中苹果茎痘病毒RNA的定位及分布,并对影响实验结果的重要因素进行优化。【结果】梨树中的苹果茎痘病毒RNA阳性信号主要位于叶片的叶肉细胞、茎尖的外围皮层组织及相应的初生维管束。蛋白酶K消化时间以20 min为宜,要获得良好的扩增效果,RT反应体系中RNasin的量需大于0.2 U.μl-1,dNTPs大于0.4 mmol.L-1,SuperScriptⅡ在0.1～1.3 U.μl-1,引物在0.9μmol.L-1以上。PCR反应体系中适宜的退火温度为60℃,循环35次,引物浓度应在0.8～1.2μmol.L-1,LA Taq酶浓度大于0.5 U.100.μl-1。【结论】梨树茎尖顶端分生组织0.25 mm的区域为无病毒区域。
- 赵英牛建新
- 关键词：库尔勒香梨苹果茎痘病毒CDNA探针地高辛原位PCR
- 利用内标为基础的RT-PCR技术检测葡萄茎痘伴随病毒被引量：2
- 2006年
- 选取经RT-PCR检测确认带葡萄茎痘伴随病毒的‘全球红’葡萄品种。以葡萄叶片、韧皮部作为试材,采用SDS法提取高质量总RNA作为模板,以GRSPaV的特异互补引物引导,反转录合成cDNA,通过PCR扩增,获得830bp的预期目的片段。以线粒体nad5基因为内标,建立了GRSPaV与nad5共扩增体系,将扩增的GRSPaV特异性片段及nad5目的片段分别克隆测序,与NCBI中所提交的核酸序列进行比对,GRSPaV与序列号AF057136的同源性达96%;nad5与序列号D37958的同源性达96·67%。
- 牛建新李西平赵英张强马兵钢
- 关键词：RT-PCR
