赵杰
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 供职机构：华北煤炭医学院附属医院更多>>
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- 重组乳酸杆菌中A组轮状病毒VP7基因表达
- 2009年
- 目的扩增A组轮状病毒VP7基因,构建pEDM27/5-VP7重组质粒,转化乳酸杆菌并分析VP7蛋白的表达及活性。方法通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)获得目的基因VP7,纯化后与pEDM27/5载体进行连接,转化乳酸杆菌,乳糖进行诱导表达,分别于4,8,12 h后,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白印迹技术(Western blot)对产物进行分析测定。结果A组轮状病毒经RT-PCR扩增后,1%琼脂糖电泳检测可见一条约1.0 kb的特异性条带,与预期目的基因(VP7基因)大小相符;SDS-PAGE和Western-blot杂交分析发现,经乳糖诱导4,8,12 h后分别可见一条分子量约为28 kD蛋白带表达,经扫描分析,诱导后表达蛋白分别约占菌体总蛋白的2.30%,5.12%,5.38%,且随着时间变化而持续表达增加,并能与抗A组轮状病毒VP7蛋白特异结合。结论重组乳酸杆菌持续表达免疫活性A组轮状病毒VP7蛋白,为进一步研究乳酸杆菌作为轮状病毒基因工程疫苗的表达载体提供了基础依据。
- 吴景华王海欣赵杰刘丽娜
- 关键词：A组轮状病毒乳酸杆菌基因转化
- 婴幼儿轮状病毒VP7基因表达产物生物学活性研究
- 2009年
- 目的诱导并分析克隆婴幼儿轮状病毒VP7基因表达及其生物学活性,为进一步构建轮状病毒基因工程疫苗奠定基础。方法扩增与纯化VP7基因,并与pEDM27/5载体进行连接,转化乳酸杆菌,乳糖进行诱导表达,用鼠抗Vp7蛋白单克隆抗体特异性结合表达的Vp7蛋白,并测定其生物学活性。结果成功扩增婴幼儿轮状病毒VP7基因,并转化pEDM27/5载体,通过蓝白斑筛选DNA阳性重组子,转化感受态乳酸杆菌,SDS-PAGE电泳可见乳糖诱导后一条分子量约为28kD的蛋白带高效表达,并能与抗婴幼儿轮状病毒VP7蛋白特异结合。结论重组乳酸杆菌表达的VP7蛋白具有良好的生物学活性;可用于研制开发轮状病毒基因工程疫苗。
- 吴景华王海欣赵杰董爱英
- 关键词：婴幼儿轮状病毒乳酸杆菌基因转化
