费然
- 作品数：77 被引量：430H指数：12
- 供职机构：北京大学人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 干扰素β对肝星状细胞活化调控机制的影响被引量：10
- 2006年
- 以往的研究已经证实干扰素β（IFNβ）不仅具有抗肝炎病毒的作用，还具有抗肝纤维化的作用，但其作用机制尚不明确。本研究旨在探讨能否经过调控转化生长因子β1（TGFβ1）、Smad4、Smad7、血小板衍生生长因子（PDGF）-BB等细胞因子的表达而影响肝星状细胞（HSC）的激活。
- 饶慧瑛魏来费然王江华蒋栋张权丛旭
- 关键词：肝纤维化肝星状细胞干扰素Β转化生长因子Β血小板源性生长因子
- HCV亚基因组复制子细胞培养上清外泌体HCV RNA的分离及其与胞内病毒水平的相关性
- 2016年
- 目的检测丙型肝炎病毒（HCV）复制子细胞培养上清中外泌体HCV RNA的稳定性和表达水平,并研究干扰素α抑制HCV复制过程中,外泌体HCV RNA水平与胞内病毒复制水平的相关性。方法建立G418筛选稳定表达的HCV复制子细胞模型HCV-Con I-Rep,比较超速离心和沉淀法对HCV RNA阳性外泌体的分离效果;实时定量PCR法检测培养上清的HCV RNA水平并评价其对表面活性剂NP-40和RNase A的敏感性;不同剂量干扰素α（0、0.4、2、10、50、250IU/ml）处理72h或100IU/ml干扰素α处理不同时间（0、6、12、24、48、72h）,分别检测上清和胞内HCV RNA水平,并评价两者的相关性。结果成功构建了稳定表达的HCV复制子细胞模型;PEG沉淀较超速离心法能够更高效地分离外泌体;HCV复制子细胞培养上清外泌体中含有较高水平（~106 IU/ml）的HCV RNA,但在表面活性剂的存在下,可因外泌体脂质膜破坏而被RNase A降解;干扰素α处理过程中,胞内HCV RNA和上清中外泌体HCV RNA水平均显著降低;Spearman相关性分析提示,胞内HCV RNA和上清中外泌体HCV RNA在不同剂量干扰素处理组和不同处理时间组的水平均具有显著相关性（r=0.9690,P〈0.01和r=0.7069,P=0.001）。结论 HCV亚基因组复制子细胞培养上清外泌体HCV RNA水平可作为更方便检测的指标,反映胞内病毒复制水平的变化。
- 王江华费然王雪艳张海莹魏来
- 关键词：复制子外泌体干扰素Α
- 酶免疫法量化分析乙型肝炎病毒核酸扩增产物被引量：3
- 1998年
- 有关聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）技术应用研究的重点，是利用其能够短时间内在体外扩增出数百万个特异性靶ＤＮＡ序列拷贝的特点，对感染者体内含量极低的病原体核酸模板（如乙型肝炎病毒ＨＢＶ、丙型肝炎病毒ＨＣＶ等）进行...
- 仝文斌高巍费然冯百芳陶其敏
- 关键词：乙型肝炎病毒DNA扩增酶免疫法
- 酶免疫法检测丙型肝炎病毒RNA的聚合酶链反应产物被引量：17
- 1998年
- 目的建立一灵敏、快速的检测丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ逆转录－套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）产物的酶免疫法。方法对第２次ＰＣＲ所用的引物进行双标记，使扩增产物同时被修饰有生物素和荧光素（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ）成分，再经过固相的链亲合素进行捕获、辣根过氧化物酶标记的抗－ｆｌｕｏｒｅｓ－ｃｅｉｎ反应后显色测定。结果所建立的方法与常规聚丙烯酰胺凝胶电泳法相比灵敏、快速、准确，结果判断客观，重复性也较好；所测结果可反映ＰＣＲ产物量的多少，但不能准确表示模板量的大小。结论建立的方法可取代电泳法而成为ＨＣＶＲＮＡ常规ＰＣＲ反应产物的检测技术。
- 仝文斌张春英费然季颖冯百芳陶其敏
- 关键词：丙型肝炎病毒RNA酶免疫法聚合酶链反应
- 用含有特定细胞因子的无血清培养基培养慢性乙型肝炎病人的树突状细胞被引量：2
- 2002年
- 目的 体外扩增慢性乙肝病人的树突状细胞 (dendriticcell,DC) ,从细胞表型和功能上鉴定和研究。方法 用含GM CSF和IL 4的无血清培养基AIM V体外培养慢性乙肝病人外周血单个核细胞 ,获得树突状细胞。流式细胞仪检测细胞表型 ,IL 1 2ELISA试剂盒检测DC分泌IL 1 2的水平 ,并观察加入细胞因子TNF α后对DC培养的影响。结果 慢性乙肝病人的外周血单个核细胞用AIM V培养及细胞因子诱导后 ,经贴壁法纯化 1 0 0mL可获得 0 .5× 1 0 7～ 1 .5× 1 0 7成熟的具有典型形态的DC ,加入TNF α后 ,CD83阳性占 60 .80 % ,明显高于未加组 (P <0 .0 5) ,IL 1 2分泌较未加TNF α组增高近 1 0倍。结论 ①慢性乙肝病人的DC可用AIM V无血清培养基及特定的细胞因子诱导在体外大量获得 ,TNF α是诱导DC成熟的重要的细胞因子。②典型的细胞形态和CD1 4 -、HLA DRhigh+、CD86high+的细胞表面分子特征可作为临床上快速鉴定培养DC的标志。
- 李若冰陈红松费然王松霞范春蕾魏来王宇
- 关键词：树突状细胞病毒性乙型肝炎无血清培养基细胞因子
- 干扰素α对丙型肝炎病毒复制子的抑制作用被引量：9
- 2005年
- 目的利用丙型肝炎病毒(HCV)复制子细胞模型,体外研究干扰素α(IFN-α)对HCV复制子的抑制作用,并探讨 IFN-α信号传导与激活转录分子( STAT )及介导 IFN-α抗病毒作用的干扰素刺激基因(ISGs)的表达水平.方法以HCV复制子质粒为模板体外转录合成HCV复制子RNA, 将此RNA 转染Huh7肝癌细胞并经G418筛选,建立HCV复制子细胞株;用不同剂量(0～5000 IU/ml) IFN-α处理HCV复制子细胞72 h或用1000 IU/ml IFN-α处理细胞不同时间(0、 24、 48、 72、 96h),通过半定量RT-PCR及实时定量PCR同时检测HCV RNA,Western印迹检测HCV NS5A蛋白表达水平,研究IFN-α对HCV复制子的抑制作用.结果 IFN-α能明显抑制HCV RNA的复制,10 IU/ml 及25 IU/ml IFN-α可使HCV RNA较无IFN-α处理的对照细胞分别降低约68%及75%;IFN-α 1000 IU/ml作用24 h或96 h导致HCV RNA较对照组分别降低75%及88%,同样,IFN-α对HCV NS5A蛋白的合成也有明显抑制作用,说明IFN-α的抗HCV作用呈剂量及时间依赖性;HCV复制子细胞中有抗病毒作用的 ISG(PKR、2'5'OAS、G1P3、ISG20及ISGF3γ)呈明显的IFN诱导性表达.结论 IFN-α能明显抑制HCV RNA的复制,其抑制作用与IFN-α剂量及作用时间有关,PKR、2'5'OAS、G1P3、ISG20及ISGF3γ等ISG可能介导IFN-α的抗HCV作用.
- 贾因棠魏来蒋栋丛旭费然
- 关键词：干扰素ΑC型肝炎样病毒属复制子
- 干扰素-β对肝星状细胞活化调控机制的影响
- 目的探讨干扰素-β(IFN-β)通过转化生长因子β(TGF-β)和血小板衍生生长因子(PDGF) 信号通路蛋白对体外培养的肝星状细胞活化调控机制的影响,为临床应用干扰素-β进行抗肝纤维化治疗提供理论依据。材料与方法体外培...
- 饶慧瑛魏来费然孙焱王江华
- 文献传递
- 肿瘤特异性肿瘤/睾丸抗原在肝癌组织中的表达被引量：21
- 2003年
- 目的 研究7种主要肿瘤/睾丸(CT)抗原MAGE-1、MAGE-3、MAGE-4、MAGE-10、NY-ESO-1、SSX-2、SCP-1在原发性肝细胞癌(HCC)患者癌组织中的表达、编码基因的变异状况及与临床指标的关系。 方法 收集30例肝癌患者的癌和癌旁组织,采用特异性引物逆转录聚合酶链反应检测7种CT抗原的表达,并对PCR产物进行测序分析。结果 在30例HCC患者中,MAGE-1、MAGE-3、MAGE-4、MAGE-10、NY-ESO-1、SSX-2、SCP-1在癌组织中的表达率分别为66.7％、70.0％、20.0％、36.7％、40.0％、33.3％和33.3％,而癌旁没有表达。癌组织中至少表达1种、2种和3种CT抗原的阳性率分别为90.0％、70.0％和53.5％。我国肝癌表达的7种CT抗原编码基因与国外报道的相比,同源性非常高。MAGE-10和SCP-1的表达与甲胎蛋白的水平相关,MAGE-3和SSX-2表达与平均年龄相关。 结论 7种CT抗原在HCC患者癌组织中均有表达,阳性率为20.0％-70.0％,其编码基因序列高度保守。一些CT抗原的表达与临床指标存在相关性。
- 陈红松覃柳亮丛旭王瑜费然蒋栋曹骥苏建家魏来陈慰峰王宇
- 关键词：肝细胞癌肿瘤特异性抗原睾丸抗原编码基因基因表达
- 干扰素-β-1a对人肝星状细胞系LX-2蛋白质组的影响
- 目的观察干扰素-β-1a(interferon-beta-1a,IFN-β-1a)作用于人肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)系 LX-2后的蛋白质组学差异,从而发现 IFN-β-1a抑制肝...
- 饶慧瑛王江华刘峰费然刘志达魏来
- 文献传递
- 黑色素瘤相关抗原A1在肝癌细胞株中的表达与基因甲基化程度的相关性被引量：3
- 2005年
- 目的探讨人肝癌细胞株中黑色素瘤相关抗原A1(MAGE-A1)表达状况与肝癌细胞基因甲基化的关系。方法提取10种人肝癌细胞株的总RNA,用逆转录聚合酶链反应对细胞株的MAGE- A1基因的表达进行检测;提取10种人肝癌细胞株的基因组DNA,用限制性酶切和Southern印迹杂交对每种细胞的基因组甲基化程度进行定量分析。另外对基因组DNA行HpaⅡ酶切后,用引物CDS21、EDP4和CDS20、EDP4进行聚合酶链反应扩增,然后用特异性探针杂交来检测肝癌细胞株MAGE-A1启动子的甲基化状态。用特异性序列聚合酶链反应方法检测每一种细胞株的人白细胞抗原A位点型别。结果QGY- 7703、SMMC-7721、HLE、BEL-7402、BEL-7404、BEL-7405 肝癌细胞株的MAGE-A1基因表达阳性, 且细胞分化程度均为中低分化;HepG2 2.2.15、HepG2、QGY-7701和Huh7肝癌细胞株的MAGE-A1 基因表达阴性,且细胞分化程度均为高中分化。通过定量分析表明,MAGE-A1表达的肝癌细胞株与MAGE- A1不表达的肝癌细胞株比较,前者基因组甲基化程度较低(t=2.896,P=0.02)。肝癌细胞株MAGE-A1 基因启动子区甲基化分析结果表明HepG2 2.2.15、HepG2、QGY-7701和Huh7为高甲基化,SMMC-7721、HLE、BEL-7402、BEL-7404、BEL-7405为低甲基化。结论肝癌细胞株MAGE-A1
- 肖江陈红松费然丛旭王燕蒋栋魏来王宇
- 关键词：黑色素瘤肝癌细胞株基因表达甲基化MAGE-A1
