许会芬
- 作品数：25 被引量：67H指数：6
- 供职机构：西北农林科技大学动物科技学院陕西省农业分子生物学重点实验室更多>>
- 发文基金：公益性行业(农业)科研专项转基因生物新品种培育专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 西农萨能羊Ets-1基因cDNA的克隆与序列分析
- Ets转录调控因子通过调节细胞的增生、分化、凋亡及细胞与细胞间的相互作用，在许多生理和病理过程中发挥重要作用。Ets转录因子受多种信号通路的调控，如：MAP激酶(Erk，p38和JAK)、Ca2+依赖的信号通路、TGF—...
- 石恒波罗军李君许会芬胡仕良
- 山羊Ets-1基因cDNA的克隆与序列分析被引量：1
- 2011年
- 根据GenBank已收录的牛(Bos taurus)、人(Homo sapiens)和小鼠(Mus musculus)等物种Ets-1基因序列的同源保守区域,设计特异性引物,采用RT-PCR和RACE技术,分离并克隆了西农萨能奶山羊(Capra hircus)Ets-1基因的cDNA序列。该序列全长2 263 bp(GenBank登录号HQ589338),包括5'UTR 331 bp,CDS 1 326bp和3'UTR 606 bp,编码441个氨基酸组成的蛋白质。核苷酸序列分析发现,山羊编码序列与牛、猪、人、小鼠等的相应序列同源性分别为98%、94%、92%和90%,3'UTR相应序列为96%、83%、81%和77%,5'UTR相应序列为98%、85%、82%和71%。氨基酸序列分析发现,山羊与牛、猪、人和小鼠的Ets-1的相似性较高,均在95%以上。蛋白质结构分析发现,其蛋白质分子量为50 340.8 D,等电点为5.08,具有典型的螺旋-转角-螺旋结构域,不存在跨膜结构,并且整个序列不含信号肽。
- 李君罗军许会芬胡仕良
- 关键词：山羊ETS-1基因克隆
- 1～15月龄西农萨能母羊血浆生化指标和生殖激素变化规律研究被引量：6
- 2013年
- 本试验旨在研究1～15月龄西农萨能羊血浆生殖激素和生化指标的变化规律。选取30只出生日期相近、体重相似的健康西农萨能羊母羔进行饲喂,每隔30天空腹颈静脉采血1次,以测定母羊自出生至妊娠、分娩中血浆4种生殖激素以及生化指标含量的变化。结果表明:哺乳期羔羊血浆雌激素、孕酮、卵泡刺激素、黄体生成素含量较低,此后逐渐上升;妊娠阶段母羊血浆雌激素、孕酮含量逐渐上升,卵泡刺激素、黄体生成素水平显著下降;分娩后试验羊血浆雌激素、孕酮释放水平逐渐下降,卵泡刺激素、黄体生成素含量略有上升。1～10月龄试验羊血浆总蛋白、白蛋白含量逐渐上升,妊娠阶段显著下降,分娩后有所回升。妊娠阶段试验羊血浆总胆固醇、甘油三酯、尿素氮水平急剧升高,分娩后逐渐下降。妊娠对试验羊血浆生化指标、生殖激素含量存在显著影响(P<0.05)。生殖激素浓度变化规律可为奶山羊早期选种和高效扩繁提供试验依据。
- 孙爽罗军王慧王维李芳许会芬张犁苹
- 关键词：血浆生化指标生殖激素
- 西农萨能羊脂肪酸合酶基因(FASN)启动子元件的定点突变分析
- 脂肪酸合酶(FASN)是哺乳动物脂肪酸合成过程中的关键酶，它利用乙酰-COA、丙二酸单酰-CoA和还原型辅酶Ⅱ(NADPH)催化饱和脂肪酸的合成，且与乳脂的分泌途径紧密相关。FASN在提高乳类的风味和品质方面具有重要作用...
- 李君罗军胡仕良许会芬姚大为
- 关键词：重叠延伸PCR定点突变
- 西农萨能羊脂肪分化相关蛋白(ADRP)基因的原核表达、纯化及多克隆抗体制备
- 2014年
- 在大肠杆菌中表达西农萨能羊脂肪分化相关蛋白(ADRP),并制备其多克隆抗体。以实验室保存的pMD19-T-ADRP质粒为模板,扩增ADRP的CDS区,将其克隆到pET32a(+)载体,阳性克隆转化到大肠杆菌菌株E.coli BL21(DE3)中诱导表达,优化融合蛋白表达条件,使用Ni-NTA亲和层析柱纯化融合蛋白,纯化的ADRP蛋白经复性后免疫兔子制备多克隆抗体,ELISA和Western blot检测血清效价和特异性。结果表明:成功构建pET32a(+)-ADRP原核表达载体并诱导其表达,获得最佳表达条件,即37℃、0.5 mmol/L IPTG诱导6 h;ELISA检测显示抗体效价达1∶64 000;经Western blot鉴定,制备的多克隆抗体能特异性结合原核表达以及乳腺上皮细胞表达的ADRP蛋白。本实验成功表达、纯化了ADRP融合蛋白,获得具高特异性、高效价的兔抗ADRP多克隆抗体。
- 李芳罗军余康许会芬石恒波朱江江
- 关键词：ADRP原核表达多克隆抗体
- 固醇调节元件结合蛋白SREBP-1促进山羊乳腺上皮细胞中脂肪酸及甘油三酯的合成
- 引言固醇调节元件结合蛋白SREBP-1是哺乳动物体内调节脂质代谢平衡的重要核转录因子,与体内胆固醇及脂肪生成基因的调节密切相关。研究发现,SREBPs可以直接激活胆固醇、脂肪酸、甘油三酯及磷脂生物合成及摄取过程中30多个...
- 许会芬罗军石恒波李君王海萍
- 关键词：SREBP-1脂肪酸甘油三酯腺病毒
- 西农萨能羊SREBP-1基因CDS区的克隆与序列分析
- SREBP-1是体内非常重要的转录因子之一。属于SREBPs转录因子家族，它主要通过调控体内胆固醇、脂肪酸、甘油三酯和磷脂合成过程中一系列关键酶的表达，从而调节体内的脂类平衡。目前确定的直接受SREBPs基因激活的基因已...
- 许会芬罗军赵旺生石恒波
- 山羊INSIG1基因超表达对乳腺上皮细胞中脂质合成的影响被引量：8
- 2016年
- 本研究旨在通过构建西农萨能奶山羊胰岛素诱导基因1(INSIG1)的重组腺病毒(Adenovirus,Ad)超表达载体,研究该基因超表达后对乳腺上皮细胞中脂质合成的影响,从而为该基因在山羊乳腺脂质合成调控中的功能研究奠定基础。根据GenBank(登录号:JQ665439)中山羊INSIG1基因序列设计引物,PCR扩增得到其CDS区序列。将目的基因连接到穿梭载体pAdTrack-CMV后获得pAdTrack-CMV-INSIG1质粒,将该质粒PmeⅠ线性化后转入大肠杆菌BJ5183感受态细胞进行同源重组,获得pAdEasy-INSIG1重组腺病毒超表达载体。该重组质粒经PacⅠ线性化后转染293A细胞进行病毒的包装及扩繁,利用LaSRT法测定其滴度。将获得的重组腺病毒AdINSIG1感染山羊原代乳腺上皮细胞,利用实时荧光定量PCR检测INSIG1及脂质合成相关基因的mRNA表达情况,利用GPO-Trinder酶学反应检测细胞中甘油三酯的含量。结果表明,成功构建了奶山羊INSIG1基因重组腺病毒超表达载体,获得了具有较高滴度(2×108 U·mL-1)的超表达腺病毒Ad-INSIG1;Ad-INSIG1感染山羊原代乳腺上皮细胞48h后,与Ad-GFP组相比,INSIG1基因的mRNA表达量上调约500倍,固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)和SREBP裂解活化蛋白(SCAP)的mRNA表达量无明显变化,参与脂肪酸从头合成(ACCα、FASN)及去饱和(SCD1)基因的mRNA表达量均显著下降(P<0.05);参与甘油三酯合成的3个关键基因中,GPAM及DGAT2的mRNA表达量显著下降(P<0.05),AGPAT6的表达无显著变化;同时,催化甘油三酯分解(ATGL)的基因mRNA表达量也显著下降(P<0.05);细胞内甘油三酯含量无显著变化。综上所述,在山羊原代乳腺上皮细胞中,INSIG1能够抑制脂质合成相关基因的表达,对山羊乳腺脂质合成具有调控作用。
- 王苗罗军许会芬朱江江赫秋亚姚大为史怀平
- 关键词：山羊乳腺上皮细胞超表达
- SREBP-1基因对山羊乳腺上皮细胞脂肪酸代谢的调控作用研究
- 固醇调节元件结合蛋白-1(Sterol regulatory element binding protein-1,SREBP-1)是哺乳动物体内重要的核转录因子之一,主要参与调控内源的胆固醇、脂肪酸、磷脂及甘油三酯等的生...
- 许会芬
- 关键词：奶山羊转录调控乳腺上皮细胞脂肪酸代谢
- 日粮中不同能量和蛋白水平对西农萨能羊泌乳量、乳成分及血浆生化指标的影响被引量：13
- 2013年
- 为了筛选出产奶羊合适的日粮能量和蛋白水平,研究采用2×2二因子完全随机区组试验将60只处于泌乳盛期的西农萨能羊[体重为(60.00±7.88)kg]随机分为4组,分别饲喂能量水平为12.36 MJ/kg(干物质)和12.92 MJ/kg(干物质)、蛋白水平为13.25%和15.80%的日粮,研究不同能量和蛋白水平对泌乳量、乳成分及血液生化指标的影响。结果表明:各处理间产奶量无显著差异(P>0.05);各组羊产奶量由产奶高峰期开始出现下降趋势,当能量水平为12.92 MJ/kg、蛋白水平为13.25%时泌乳量下降幅度最小,有利于保持产奶量。不同能量和蛋白水平对乳成分中的非脂固形物、乳糖、密度、冰点及酸度均无显著影响(P>0.05),但是能量水平为12.92 MJ/kg、蛋白水平为13.25%时乳中乳脂、乳蛋白及全脂固形物的含量均低于其他处理,尤其是乳脂的含量显著降低(P<0.05);能量水平为12.92 MJ/kg的2个试验组羊血浆中葡萄糖、三酰甘油及胆固醇含量均高于能量水平为12.36 MJ/kg的2个试验组(P<0.05),各蛋白水平之间无显著差异(P>0.05)。
- 许会芬罗军朱越朱江江李君杜鹃
- 关键词：奶山羊产奶量乳成分蛋白水平
