秦玉蓉
- 作品数：19 被引量：41H指数：4
- 供职机构：扬州大学动物科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划江苏省高校自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 湖羊MyoG基因CDS的克隆及其真核表达载体的构建被引量：1
- 2011年
- 参阅GenBank发表的波尔山羊肌细胞生成素(MyoG)基因序列,设计3对具有互补末端的特异性引物,分别扩增出湖羊MyoG基因的3个外显子,利用重叠PCR技术,将此3个外显子连接,并构建成重组质粒pcDNA3.0-MyoG,转染NIH-3T3细胞,RT-PCR鉴定。结果表明:成功克隆了湖羊MyoG基因的CDS,在离体细胞中MyoG基因发生了转录,这为进一步研究MyoG基因的体内外表达及生物学的活性奠定了基础。
- 许峰秦玉蓉阴彦辉张振韬宋正海范广习高波李碧春
- 关键词：MYOG基因重叠PCR真核表达载体湖羊
- 聚乙烯亚胺介导NIH-3T3细胞体外转染pEGFP-N1系统优化
- 2010年
- 目的优化聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)介导的细胞转染以提高目的基因在细胞中的表达强度。方法根据PEI/DNA不同的质量比(0:1、0.5:1、1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1)利用凝胶阻滞分析结合的情况;不同质量比PEI/DNA形成的复合物对NIH-3T3细胞的转染通过细胞表达强度获得最佳PEI/DNA质量比;比较实验组1(PEI/DNA质量比2:1)、实验组2(重复PEI/DNA质量比2:1)及实验组3(PEI/DNA质量比4:2)3种转染方案,探讨重复转染的方法是否提高细胞表达强度。结果①通过凝胶阻滞分析PEI/DNA能够稳定结合的质量比是1:1～10:1;②PEI/DNA复合物对NIH-3T3细胞进行转染,其荧光表达强度当PEI/DNA(质量比)≤2时随着PEI的增加而提高,当PEI/DNA(质量比)>2时,荧光表达强度反而降低;③采用重复转染的方法实验组2细胞荧光表达强度(24.08±0.28)%明显高于实验组1(8.97±4.02)%和实验组3(14.24±2.68)%(P<0.05)。结论在PEI/DNA(质量比)=2的条件下,PEI/DNA复合物转化NIH-3T3细胞的效果比较理想,重复转染可以提高细胞转染后荧光表达强度。
- 丁爱军任丽伟许峰秦玉蓉傅德智李碧春
- 关键词：聚乙烯亚胺细胞转染
- 新型小分子RNA-piRNAs的研究进展被引量：2
- 2008年
- 由非编码小分子RNA(siRNAs,miRNAs)诱导的RNA干涉作为基因功能研究、基因治疗等新工具,目前已成为分子生物学的研究热点。最近,一种新型小分子RNA-piRNAs在老鼠的生殖细胞中被发现,特异性地与Miwi蛋白结合,被认为是精子发育及合子形成过程中必不可少的。本文就piRNAs的发现、遗传特性和可能的作用模式作一综述,并阐述了研究意义和应用前景。
- 常国斌常洪陈国宏刘向萍陈蓉秦玉蓉
- 关键词：小分子RNARNA干涉
- 鸡抗病毒Mx蛋白基因在毕赤酵母GS115中的表达
- 2010年
- 为了利用酵母表达技术制备鸡抗病毒Mx蛋白,试验采用基因工程技术,将编码鸡抗病毒Mx蛋白基因亚克隆至含有分泌信号肽序列的毕赤酵母表达载体中,构建成分泌型重组表达载体pPIC9K-Mx;用电转化法将线性化的pPIC9K-Mx转化至毕赤酵母菌株GS115中,G418梯度筛选转化菌;再经MM与MD平板对比生长试验筛选,PCR鉴定目的片段,筛选出高拷贝重组子,该高拷贝菌株分别经0.5%、1%甲醇诱导,表达产物再经SDS-PAGE检测。结果表明:成功构建了鸡抗病毒Mx蛋白基因的毕赤酵母表达载体,经G418抗性筛选得到高拷贝菌株;在甲醇含量维持在1%时,鸡抗病毒Mx蛋白在毕赤酵母GS115中获得良好表达,表达产物大小约为75ku;表达蛋白约占表达上清液的39.2%。
- 田智泉杨海燕徐琪孙敏许峰任丽伟丁爱军秦玉蓉李碧春
- 关键词：毕赤酵母MX蛋白
- 鹌鹑血液中小分子RNA表达的初步研究被引量：6
- 2008年
- 利用改进的Trizol法首次从鹌鹑血液中提取小分子RNA,比较小分子RNA在组织与血液中的表达差异,为简化小分子RNA的提取程序,提高实验研究效率以及探讨小分子RNA的遗传特性提供可供借鉴的资料。结果发现:①改进Trizol法提取血液中的总RNA,效果显著,条带清晰;②发现血液中只存在一种小分子的miRNAs(18～22bp);③影响小分子RNA提取效率的关键因素包括样本的新鲜程度和RNA酶的污染。研究结果表明,通过改进的Trizol法提取血液中小RNA方法是可行的,小分子RNA在家禽血液中的表达具有特异性,snoRNAs,piRNAs在血液中不表达。
- 秦玉蓉陈蓉吴海常洪陈国宏吴信生常国斌
- 关键词：鹌鹑血液小分子RNA
- 湖羊myogenin重组基因表达及其亚细胞定位的研究被引量：3
- 2011年
- 为构建湖羊肌细胞生成素(myogenin,MyoG)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的融合蛋白真核表达载体,分析EGFP-MyoG融合蛋白在NIH-3T3细胞的表达及亚细胞定位。利用PCR技术扩增出MyoG基因完整的CDS,克隆至真核表达载体pEGFP-C1,转染NIH-3T3细胞,荧光显微镜下观察EGFP-MyoG融合蛋白的亚细胞定位,并通过RT-PCR、western blot检测蛋白的表达。酶切鉴定和DNA序列分析均证实,MyoG基因已正确插入pEGFP-C1中,获得融合蛋白表达载体pEGFP-C1-MyoG,转染NIH-3T3细胞48h后,RT-PCR检测到约680bp的特异性条带,western blot检测出相对分子量约为53kD的融合蛋白,荧光显微镜分析表明,MyoG蛋白定位于细胞核。说明融合蛋白EGFP-MyoG在NIH-3T3细胞中成功表达,并定位于细胞核。
- 许峰秦玉蓉阴彦辉张振韬张亚妮高波杜立新李碧春
- 关键词：湖羊MYOG基因亚细胞定位
- 徐淮山羊LPL基因克隆及其表达产物亚细胞定位的研究被引量：2
- 2011年
- 旨在克隆徐淮山羊脂蛋白酯酶(LPL)基因的cDNA,并通过EGFP融合蛋白实现该基因亚细胞水平的表达定位。本研究通过RT-PCR方法克隆徐淮山羊LPL基因cDNA,并初步进行生物信息学分析,构建含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的融合表达载体pEGFP-C1-LPL。聚乙烯亚胺(PEI)介导pEGFP-C1-LPL转染NIH-3T3细胞,48h后在荧光倒置显微镜下观察,并用RT-PCR方法检测LPLmRNA在细胞内的表达。结果,成功克隆出山羊LPL基因1 530bp长的cDNA,完整阅读框大小为1 437bp,共编码478个氨基酸,GenBank登录号为GU082383。信号肽区域预测结果表明LPL蛋白含有一小段信号肽序列,其可能性为100%。信号肽酶切割位置在第23和24个氨基酸之间,其可能性达到65.9%。成功构建融合表达载体pEGFP-C1-LPL,并且RT-PCR显示转染后LPL在mRNA水平上表达明显。EGFP-LPL融合蛋白定位在NIT-3T3细胞外和细胞膜部分。结果表明,首次成功克隆出徐淮山羊LPL基因cDNA;重组质粒pEGFP-C1-LPL构建成功,并在NIH-3T3细胞中明显表达。
- 秦玉蓉许峰田智泉高波张振韬阴彦辉孙敏李碧春
- 关键词：真核表达绿色荧光蛋白
- 不同鸡种间部分免疫性状的比较被引量：6
- 2010年
- 随机抽取如皋鸡、文昌鸡及安卡鸡各80只,每个品种分为A、B2组,每组分别于49日龄腿肌注射25%绵羊红细胞(Sheep red blood cell,SRBC)0.5、1mL。分别检测了41、56、71、89日龄的异嗜性粒细胞/淋巴细胞(Hetero-phil/Lymphocyte,H/L)值,56、71、89日龄的SRBC抗体滴度以及30、41、56、71、89日龄的新城疫(Newcastle disease,ND)和禽流感(Avian influenza,AI)抗体滴度。结果显示,同一检测日龄H/L值在不同品种间存在差异,随着日龄的增加品种间的差异逐步减小;不同品种H/L值随时间变化的趋势不同,如皋鸡4个日龄变化平缓,文昌鸡和安卡鸡呈先高后低趋势。3个品种SRBC抗体滴度均在56日龄达到最高,其中文昌鸡最高,安卡鸡最低,且差异显著(P<0.05)。除如皋鸡外,其他品种对不同剂量SRBC抗原的敏感程度存在差异。在免疫ND疫苗后3个品种抗体滴度表现出相似的变化规律,但是变化幅度有所差异,安卡鸡前3个检测日龄滴度介于如皋鸡和文昌鸡之间,但免疫后期迅速上升,71和89日龄滴度极显著高于其他2个品种(P<0.001);如皋鸡和文昌鸡之间AI抗体滴度除56日龄之外均不存在显著差异,而安卡鸡在所有日龄均极显著低于其他2个品种(P<0.01)。结果表明,家禽的免疫性状在品种间存在遗传差异,中国地方鸡种比外来鸡种在多个免疫性状上存在不同程度的优势。
- 王存波王克华包文斌雷黎丽周琼廖菁陈蓉秦玉蓉胡国顺龚琳琳陈国宏常国斌
- 关键词：免疫性状抗病性
- 鸡Ⅹ期胚盘细胞分散培养与整胚培养比较初探被引量：11
- 2010年
- 为比较鸡Ⅹ期胚盘细胞分散培养与整胚培养效果,对鸡Ⅹ期胚盘细胞分别进行分散培养和整胚培养并进行传代,观察细胞生长情况,通过碱性磷酸酶(AKP)染色鉴定计算阳性克隆率;结果,分散培养的细胞生长状态良好,整胚培养的细胞贴壁能力较差,培养过程中细胞易分化;传代后两种方法培养的细胞AKP阳性克隆率差异显著(P<0.01)。表明鸡Ⅹ期胚盘细胞分散培养效果较为理想。
- 杨海燕孙敏田智泉秦玉蓉任丽伟许峰李碧春
- 鸡X期胚盘细胞电转染外源基因条件的探索被引量：4
- 2010年
- 以EGFP为报告基因体外电穿孔转染鸡X期胚盘细胞,探讨适宜电转染条件以及影响鸡ES细胞存活率和转染率因素。分离鸡X期胚盘细胞进行培养、传代及鉴定,二代细胞设定不同的电压、脉冲时间、质粒浓度、细胞密度及孵育温度等条件转染。电击后10 min,0.4%台盼蓝染色,血细胞计数板计数,计算存活率。48 h后在荧光显微镜下计绿色荧光细胞数和总细胞数,计算转染率。结果表明:电转染鸡ES细胞的最优化电压为280 v,脉冲时间为75μs,质粒浓度为20μg/mL,转染前4℃、转染后25℃(室温)或4℃各静置10 min,细胞密度调整在1×105个/mL×106个/mL,尽量使细胞处于对数生长期。电穿孔法转染鸡ES细胞是简便有效的方法,利用优化条件转染ES细胞,可以满足进一步实验的要求。
- 杨海燕孙敏田智泉任丽伟秦玉蓉许峰李碧春
- 关键词：电穿孔PEGFP-N1
