申纪奎
- 作品数：3 被引量：24H指数：3
- 供职机构：汕头大学医学院第二附属医院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- pcDNA3.1(-)-hTGFβ_3成纤维细胞稳定表达系统的构建与生长增殖活性研究被引量：14
- 2006年
- 目的构建人转化生长因子β3的真核表达载体pcDNA3.1(-)TGFβ3转染NIH3T3成纤维细胞的稳定表达系统,研究转基因TGFβ3对成纤维细胞生长增殖活性的影响。方法通过脂质体介导的转染技术和G418细胞筛选法,将真核表达载体pcDNA3.1(-)TGFβ3质粒导入NIH3T3成纤维细胞,应用RTPCR与Westernblot检测hTGFβ3在真核细胞中的表达。经相差显微镜形态观察及四唑蓝比色实验法(MTT)检测细胞增殖活性。结果在10株转染和经G418反复筛选的NIH3T3成纤维细胞系中,有7株hTGFβ3mRNA及其蛋白的表达明显增强,其余3株细胞相对较弱或者没有表达。TGFβ3转基因稳定表达的NIH3T3成纤维细胞系的生长增殖明显减缓(P<0.05)。结论pcDNA3.1(-)TGFβ3真核表达载体转染NIH3T3成纤维细胞的稳定表达系统构建成功,转基因hTGFβ3在体外培养条件下可抑制成纤维细胞的增殖。
- 唐世杰谢思田胡素銮肖志强申纪奎易红
- 关键词：转化生长因子Β3基因转染成纤维细胞
- 真核表达载体pcDNA3．1(-)-转化生长因子β3的构建被引量：6
- 2005年
- 目的为研究成纤维细胞基因转染的可行性创造条件,从而为转化生长因子(TGF) β3转基因治疗创面与病理性瘢痕的研究奠定基础。方法应用基因重组技术和限制性内切酶酶切构建并鉴定pcDNA3．1(-)-hTGFβ3真核表达载体,经脂质体LipofectamineTM 2000介导质粒转染NIH3T3细胞后应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测hTGFβ3 mRNA在真核细胞中的表达。结果重组真核表达载体pcDNA 3．1(-)-hTGFβ3经限制性内切酶BamH I、HindⅢ酶切,电泳后显示1 253 bp的hTGFβ3目的片段和5．40 kb的pcDNA 3．1(-)载体片段,测序证实酶切片段与GenBank中登记的TGFβ3全长序列相同,证实pcDNA3．1(-)-hTGFβ3真核表达载体构建成功, 经RT-PCR检测了hTGFβ3在转录水平mRNA的表达情况,表明质粒转染NIH3T3细胞后 hTGFβ3 mRNA的表达明显增强。结论重组真核表达载体构建正确,并能在NIH3T3成纤维细胞中表达hTGFβ3 mRNA,为其在创面与病理性瘢痕的转基因治疗奠定了基础。
- 唐世杰谢思田胡素銮肖志强申纪奎易红
- 关键词：转化生长因子Β3基因重组成纤维细胞真核表达瘢痕
- 转化生长因子-β_3对增生性瘢痕成纤维细胞的生物学作用(英文)被引量：6
- 2004年
- 背景:哺乳类动物有3种TGF-β异构体即TGF-β1,β2,β3,这3种异构体各自具有独特而不同的生物学作用,TGF-β1是明显的促瘢痕形成因子,而TGF-β3可减少TGF-β1,β2的产生,从而减少细胞外基质(ECM)合成,因此,TGF-β3有可能是人体内天然的抗瘢痕形成因子。目的:通过外源性TGF-β3对增生性瘢痕成纤维细胞(HSFB)生长增殖及Ⅰ,Ⅲ型胶原及TGF-β1蛋白表达的影响,了解其生物学行为,为临床治疗提供理论依据。设计:随机对照实验研究。地点和对象:汕头大学医学院第二附属医院整形烧伤外科完成,对象为新鲜无菌增生性瘢痕组织,来源于本科收治及门诊手术的增生性瘢痕患者6例,男3例,女3例;年龄5～45岁。干预:6例增生性瘢痕成纤维细胞体外培养,分为4组,实验组又分为5,10,50mg/L组分别加TGF-β35,10,及50mg/L,对照组加入FBM1.5mL,采用MTT比色法测定TGF-β3对HSFB增殖活性的影响,3H-脯氨酸掺入法测定其胶原合成,免疫组化检测Ⅰ,Ⅲ型胶原及TGF-β1蛋白表达情况。主要观察指标:TGF-β3对HSFB体外增殖,HSFBⅠ,Ⅲ型胶原及TGF-β1蛋白表达的影响,TGF-β3作用后HSFB胶原合成情况。结果:转化生长因子β3可抑制HSFB细胞增殖,作用120h后实验组细胞密度分别为(6.34±0.51),(6.01±0.38),(5.24±0.65)×105/瓶,明显低于对照组(10.
- 唐世杰胡素銮王玉银申纪奎
- 关键词：转化生长因子-Β3增生性瘢痕成纤维细胞生物学
- 全文增补中
