王莉佳
- 作品数：219 被引量：1,598H指数：22
- 供职机构：重庆医科大学附属儿童医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市卫生局科研项目教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学电子电信更多>>
- Foxp3表达与CD_4^+CD_(25)^+调节性T细胞在儿童哮喘发病中的作用被引量：50
- 2006年
- 目的研究Foxp3基因表达与CD4+CD2+5调节性T细胞在哮喘发病中的作用。方法以确诊哮喘的患儿为研究对象,急性发作期15例、缓解期15例,同期选10例正常儿童作对照,提取外周血单个核细胞(PBMC)进行CD4、CD25表面标志及血浆、培养上清液IL-4、IFN-γ、IL-10和TGF-β等细胞因子的ELISA检测,同时收集哮喘患儿和正常儿童的诱导痰,用RT-PCR方法检测PBMC及诱导痰中转录因子Foxp3-mRNA的表达。结果PBMCCD4+CD2+5T细胞百分率在哮喘急性发作期、缓解期分别为(10·1±2·1)%、(11·7±2·5)%,低于对照组的(15·5±2·7)%(P分别<0·01、<0·05);对照组PBMC在体外培养后CD4+CD2+5细胞百分率显著升高,同培养前比较差异有统计学意义(P<0·01)。PBMCFoxp3-mRNA表达水平(Foxp3/β-actin)在哮喘急性发作期、缓解期分别为0·46±0·14、0·50±0·19,低于对照组0·77±0·22,诱导痰Foxp3-mRNA表达水平哮喘患儿也低于对照组;PBMC在体外培养后对照组Foxp3-mRNA表达水平较培养前升高(P<0·05),而哮喘患儿培养前后Foxp3-mRNA表达水平无显著变化。血浆及培养上清液IFN-γ、TGF-β在哮喘急性发作期、缓解期低于对照组(P<0·05),且IFN-γ、TGF-β与PBMCFoxp3-mRNA水平、CD4+CD2+5细胞百分率呈正相关。哮喘患儿血浆及培养上清液IL-4显著高于对照组,急性发作期血浆IL-10显著高于对照组,而缓解期与正常组无显著性差异;IL-4、IL-10与PBMCFoxp3-mRNA水平、CD4+CD2+5细胞百分率无相关性。结论哮喘患儿的TGF-β分泌不足、Foxp3基因表达降低、CD4+CD2+5调节性T细胞数量减少及分化发育障碍可能在儿童哮喘的发病中起重要作用。
- 罗征秀刘恩梅邓兵李欣陈坤华王莉佳黄英符州
- 关键词：哮喘转录因子T淋巴细胞
- 脱氧核酶抑制突变型p53基因表达的体外研究
- 目的:在无细胞体系筛选出能有效切割突变型p53(mp53)mRNA的脱氧核酶(DZ),观察其在 HT29结肠癌细胞内抑制mp53 mRNA和蛋白质表达的效应及对HT29细胞的生长抑制作用,探索脱氧核酶在肿瘤p53基因治疗...
- 蒋利萍方平王莉佳
- 文献传递
- 小鼠CCR7基因重组腺病毒的构建及其在DC2.4的表达
- 2010年
- 目的构建含有小鼠趋化因子受体-7（CCR7）基因的重组腺病毒（AdCCR7）,观察其体外感染DC2.4细胞效率。方法将小鼠CCR7基因克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV,在BJ5l83菌内和骨架质粒pAdeasy-1同源重组,筛选阳性克隆;经线性化后转染HEK293细胞,获得含小鼠CCR7基因的重组腺病毒AdCCR7;TCID50方法检测病毒滴度,PCR法鉴定病毒DNA。带绿色荧光蛋白腺病毒（AdGFP）和AdCCR7分别感染DC2.4（GFP-DC2.4和CCR7-DC2.4）,同时设未处理DC2.4为空白对照。流式细胞术（FCM）检测各组细胞表面分子CD11c,MHCⅡ,CD86及CCR7表达,趋化实验检测CCR7的功能。结果获得滴度约为l.4×1010pfu/ml重组腺病毒AdCCR7。AdCCR7感染DC2.4后,CCR7-DC2.4组与另外两组细胞比较CD11c、MHCⅡ及CD86的表达均无明显差异,但CCR7表达升高;其对趋化因子CCL19的趋化率可达44.7%~60.0%,明显高于其它两组。结论成功构建含小鼠CCR7基因的重组腺病毒AdCCR7,该病毒可感染细胞株DC2.4,增加细胞表面CCR7表达以及细胞对CCL19的趋化性,为进一步体内实验研究携带CCR7基因的未成熟DCs功能提供了工作基础。
- 应林燕符州罗健陈艳王莉佳李欣
- 关键词：CCR7DC2.4腺病毒
- 短发卡结构状RNA体外抑制呼吸道合胞病毒M2基因mRNA水平和病毒蛋白表达的研究被引量：1
- 2006年
- 目的观察针对人类呼吸道合胞病毒(RSV)M2基因mRNA构建的短发卡结构状RNA重组质粒在细胞水平对RSV复制的影响,为利用RNA干扰技术抑制RSV感染的研究奠定基础。方法将已成功构建的重组质粒pshRNA7816/8330转染HEp-2细胞,通过显微镜观察pshRNA7816/8330对RSV感染细胞病变(CPE)的抑制效率,利用四甲基偶氮唑盐比色实验检测pshRNA7816/8330的细胞毒性,经RT-PCR方法检测pshRNA7816对RSVM2mRNA表达的影响,免疫细胞化学染色法检测pshRNA7816对细胞内RSV蛋白的影响。结果pshRNA7816/8330对HEp-2细胞的正常生长没有明显的细胞毒性作用,2个重组质粒均能抑制RSV所致的CPE,但pshRNA7816对CPE抑制作用较pshRNA8330要强,RT-PCR和免疫细胞化学染色法结果显示pshRNA7816能明显降低RSVM2基因mRNA和RSV蛋白表达水平。结论针对RSVM2-1基因所构建的短发卡结构状RNA重组质粒pshRNA7816在细胞水平能有效抑制RSV的CPE形成降低RSVM2mRNA和病毒蛋白表达水平,从而干扰RSV的复制。
- 崔玉霞王莉佳周娟蒋利萍杨锡强
- 关键词：呼吸道合胞病毒
- 儿童斑秃与Th1/Th2型细胞因子关系的临床研究被引量：5
- 2010年
- 目的:探讨Th1/Th2细胞因子平衡失调在斑秃发病中的作用,以及Th1型细胞功能与斑秃发病的关系。方法:对45例斑秃患儿按其严重程度分为局限性斑秃(Localizef alopecia areat apatients,LAA)活动期组35例,全秃(Alopecia totalis patients,AT)及普秃(Alopecia universalis patients,AU)为一组10例,并以25例健康儿童为正常对照组作为研究对象。用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测在卡介苗多糖核酸(BCG-PSN)治疗前后3个月血清中IFN-γ、IL-12及IL-4、IL-10水平。结果:①斑秃患儿存在Th1/Th2细胞因子平衡紊乱,表现为血清中IFN-γ均明显高于正常组儿童,且AT/AU组明显高于LAA组;IL-12水平在LAA组与正常组儿童无显著差别,但AT/AU组明显高于正常对照组;而IL-4、IL-10水平在LAA组及AT/AU组与正常对照组相比均无显著性差异。②BCG-PSN治疗后可使斑秃患儿血清中IFN-γ水平较治疗前明显下降,同时IL-12水平在LAA组较治疗前也明显下降,但AT/AU组治疗前后无显著差别。而IL-4、IL-10水平治疗前后均无显著性差异。③血清中IFN-γ与IL-12水平成显著正相关。结论:①斑秃的发病与Th1/Th2细胞因子平衡失调有关,表现为Th1型细胞反应亢进,其中可能主要与IFN-γ、IL-12水平有关。②血清IFN-γ、IL-12水平高低可以作为提示斑秃病情严重性的指标。
- 欧阳莹王华蒋利萍王莉佳
- 关键词：斑秃TH1/TH2IFN-ΓIL-12
- CXCR4在哮喘小鼠肺组织中的表达及氯喹的干预作用被引量：2
- 2014年
- 目的检测哮喘小鼠中趋化因子受体CXCR4的表达及其拮抗剂氯喹（CQ）的干预作用。方法将6-8周SPF级Balb/c小鼠随机分成对照组、哮喘组和氯喹干预组,哮喘组和氯喹干预组用鸡卵清蛋白（OVA）致敏和激发建立哮喘小鼠模型,干预组于激发前30 min给予CQ,连续3 d,对照组用PBS代替。最后1次激发24 h内小鼠肺功能仪检测小鼠气道高反应;最后1次激发48 h内检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中细胞总数及细胞分类计数;HE染色光镜下观察肺组织的病理炎症改变,免疫组化染色检测肺组织CXCR4的表达;荧光定量PCR（Q-PCR）测定肺组织中CXCR4 mRNA的表达。结果哮喘组气道高反应及BALF中细胞总数明显高于对照组,干预组小鼠气道高反应及BALF中细胞总数与哮喘组相比显著降低;BALF中哮喘组嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和单核细胞数较空白组显著增加,而氯喹干预组较哮喘组显著减低;HE染色结果显示哮喘组肺部炎症细胞浸润明显,干预组与哮喘组相比明显减轻,病理评分降低;免疫组化显示哮喘组CXCR4在气道上皮细胞呈强阳性表达,干预组表达呈弱阳性;哮喘组CXCR4 mRNA的表达较对照组升高,氯喹干预组较哮喘组CXCR4 mRNA表达量降低;CXCR4表达量与BALF细胞总数呈正相关。结论 CXCR4可能参与哮喘小鼠的气道炎症和气道高反应的发生,氯喹能改善哮喘小鼠的气道高反应和气道炎症可能与拮抗CXCR4相关,为氯喹治疗哮喘提供理论和实验依据,为开发治疗哮喘新药提供新的思路。
- 胡晓燕孙晓春刘娜王莉佳刘恩梅罗征秀戴继宏符州
- 关键词：哮喘趋化因子受体CXCR4氯喹
- shRNA体外抑制呼吸道合胞病毒M2 mRNA水平和病毒蛋白表达的研究
- 目的:呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)是造成世界范围内婴幼儿下呼吸道感染的首位病毒病原,尽管经过多年努力,然而迄今为止仍没有针对RSV感染的可靠疫苗和治疗药物问世。 RNA...
- 崔玉霞蒋利萍王莉佳周娟杨锡强
- 文献传递
- 抗生素诱导小鼠肠道菌群失调对免疫功能和Toll样受体2、4基因表达的影响被引量：28
- 2007年
- 目的:探讨抗生素诱导小鼠肠道菌群失调后对机体免疫功能和Toll样受体2、4的影响。方法:60只BALB/c小鼠分为2组:抗生素组和对照组,抗生素组连续7天口服头孢哌酮,7天后经口给予白色念珠菌。结果:抗生素组小鼠肠道内肠杆菌、肠球菌、双歧杆菌、乳酸杆菌较对照组减少,白色念珠菌增加;脾指数、PHA诱导的淋巴细胞转化率、迟发型变态反应、抗体生成细胞数和脾脏的TLR2和TLR4基因表达水平均低于对照组。结论:抗生素诱导肠道菌群失调后小鼠免疫功能和TLR2、TLR4 mRNA表达均降低。
- 刘崇海杨锡强刘恩梅赵晓东刘玮王莉佳
- 关键词：抗生素肠道菌群免疫功能TOLL样受体
- 哮喘患儿DC源性IL-12对T细胞GATA-3和T-bet的影响被引量：4
- 2008年
- 目的了解哮喘中树突状细胞(DC)分泌的细胞因子IL-12与转录因子T-bet和GATA-3的相互关系。方法用rhGM-CSF和rhIL-4诱导培养外周血来源的DC并予鉴定,ELISA法检测其分泌的细胞因子IL-12以及与自身T细胞反应后,RT-PCR检测T-bet和GATA-3mRNA含量,流式细胞术检测T细胞分泌的胞内细胞因子IL-4和IFN-γ水平。结果DC诱导培养第8天,哮喘组DC分泌的IL-12水平低于正常对照组,差异有显著性意义(P<0.01);混合培养第7天,哮喘组IFN-γ和T-betmR-NA水平均低于正常对照组(P<0.05),而IL-4、GATA-3水平和比值IL-4/IFN-γ、GATA-3/T-bet均高于正常对照组,有显著性差异(P<0.01);IL-12与T-bet呈显著正相关,与GATA-3和GATA-3/T-bet呈显著负相关。结论转录因子T-bet、GATA-3调控Th0细胞分化受DC分泌的细胞因子IL-12的影响。IL-12如何影响T-bet、GATA-3的表达有待进一步研究。
- 陈艳符州陈坤华杨锡强刘恩梅王莉佳李欣
- 关键词：白介素-12T-BETGATA-3
- 体液免疫缺陷病初筛指标探讨
- 1990年
- 对263名正常儿童血清免疫球蛋白作了测定,与国内资料比较,本组结果范围较集中,IgM 下限较高。285名正常儿童同族凝集素测定结果示:(1)年幼儿抗A 滴度并不高于抗B滴度;(2)1岁以下抗A,抗B 滴度的下限标准均为1∶4(或1∶5),1岁以上均为1∶8(或1∶10)。291名正常儿童的抗链球菌溶血素O 的滴度测定结果表明12岁以下儿童均可能呈阴性反应,故不宜作为判断抗原特异性IgG 产生能力的过筛指标。
- 王莉佳李成荣杨锡强张远维杨小波沈锦
- 关键词：免疫缺陷病儿童免疫球蛋白
