王学政
- 作品数：4 被引量：9H指数：1
- 供职机构：济南大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 牙本质基质蛋白1的矿化功能研究
- 牙本质基质蛋白1(Dentin matrix protein1，DMP1)基因位于人类染色体4q21，其编码的蛋白质是一种高度磷酸化的偏酸性非胶原蛋白，由于其拥有较大的酸性结构域，携带大量的负电荷，故与钙离子有较强的结合...
- 王学政
- 关键词：生物矿化碱性磷酸酶矿化结节成骨细胞分化
- 文献传递
- 牙本质基质蛋白1功能片段的融合表达及其胞内定位被引量：1
- 2013年
- 目的构建含单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism,SNP)位点不同碱基的37 kD的N-牙本质基质蛋白1(Dentin matrix protein 1,DMP1)和全长DMP1基因重组表达质粒,并分析重组蛋白在HEK293细胞中的表达及定位。方法利用定点突变改造DMP1基因,获得DMP1基因的SNP rs10019009的不同基因型,将含SNP位点不同碱基的37 kD N-DMP1和全长DMP1基因定向克隆入含增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)的质粒pcDNA3.1-EGFP中,构建重组质粒pcDNA3.1-DMP1-EGFP,通过脂质体法瞬时转染HEK293细胞,荧光显微镜观察重组融合蛋白DMP1-EGFP的表达及胞内定位。结果 DNA测序结果表明,定点突变后的DMP1基因的碱基序列与设计序列完全一致;PCR和DNA测序显示重组质粒pcDNA3.1-DMP1-EGFP构建正确;融合蛋白DMP1-EGFP在HEK293细胞中主要表达于细胞胞浆中。结论成功构建了含rs10019009-SNP位点不同碱基的37 kD的N-DMP1和全长DMP1基因重组表达质粒,并在HEK293细胞的胞浆中有效表达,为进一步研究DMP1基因的功能奠定了基础。
- 王学政张更林崔亚洲刘建民柴政斌韩金祥
- 关键词：牙本质基质蛋白1绿色荧光蛋白
- 人卵巢上皮癌微血管内皮细胞分离培养与鉴定被引量：1
- 2013年
- 目的:建立人卵巢上皮癌微血管内皮细胞的原代分离纯化及培养方法。方法:收集2012-03-01-2012-10-31山东省肿瘤医院妇瘤科手术切除的卵巢上皮癌标本21例,采用胶原酶消化法分离人卵巢上皮癌微血管内皮细胞,免疫磁珠法提取纯化内皮细胞。采用形态学观察,免疫荧光技术及自发管腔形成实验对提取的内皮细胞进行鉴定;流式细胞仪检测细胞纯度;MTT法测定细胞增殖并绘制细胞生长曲线。结果:提取人卵巢微血管内皮细胞呈圆形或类圆形,周围有抗CD31免疫磁珠附着,活细胞计数测定>95%,流式细胞仪检测纯度>95%,细胞贴壁后呈长梭形、星形或多角形,胞内含有CD31磁珠,3～6d细胞间互相融合呈单层片状生长,铺满后呈典型铺路石样特征,荧光显微镜下观察表达内皮细胞特异性标志vWF,管腔形成实验证实体外有二维管腔形成。通过观察发现,内皮细胞24h内贴壁,7～11d可完全融合并出现接触抑制现象。通过MTT法测定内皮细胞生长分为增殖期、对数增长期和平台期3个阶段,生长曲线为"S"型。结论:应用免疫磁珠法成功建立了一种操作简单,且可获得纯度高和活性好的人卵巢上皮癌微血管内皮细胞分离及原代培养体系。
- 刘婷杜雪莲盛修贵颜春晓王学政蔡维望
- 关键词：上皮内皮细胞血管荧光免疫测定流式细胞术原代培养
- 融合蛋白GST-PADI4可溶性表达条件的优化及纯化被引量：7
- 2014年
- 目的优化融合蛋白GST-PADI4的可溶性表达条件,并对蛋白进行纯化。方法对融合蛋白GST-PADI4工程菌的诱导温度(16、20、25、30、37℃)、诱导剂IPTG浓度(0.05、0.1、0.2、0.5、1 mmol/L)、诱导时菌液A600值(0.2、0.4、0.6、0.8、1.0)、诱导时间(8、12、16、20、24 h)进行优化,分析融合蛋白GST-PADI4的可溶性表达情况;按优化的表达条件进行大量表达后,采用Sepharose 4B亲和层析柱对融合蛋白进行纯化。结果在16℃,菌液A600值约为0.4时,以0.1 mmol/L IPTG诱导12 h,融合蛋白GST-PADI4有较高的可溶性表达;纯化的融合蛋白纯度为91%。结论优化了融合蛋白GST-PADI4的可溶性表达条件,并获得了高纯度的可溶性融合蛋白,为后续研究PADI4蛋白的功能奠定了基础。
- 柴政斌张更林王学政韩金祥
- 关键词：融合蛋白可溶性表达纯化
