王华忠
- 作品数：26 被引量：167H指数：8
- 供职机构：天津师范大学更多>>
- 发文基金：天津市自然科学基金国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学环境科学与工程更多>>
- 植物瞬间表达系统与功能基因组学研究被引量：16
- 2007年
- 结构基因组学和功能基因组学的发展使特定植物基因组和转录组序列的获取更为方便和快捷。随之而来的是对各种基因和调控序列的功能注释,探索植物生长和发育的遗传机理。表达和调控表达是遗传物质的自身语言和动态属性,因此通过植物细胞内表达来分析目标基因和序列的表达和调控行为是功能分析的主要立足点。除创造转基因植株外,近几年来植物细胞瞬间表达系统得到了广泛的使用,与基因重排、病毒诱导基因沉默和RNA干扰等新兴技术的结合使其在植物功能基因组研究中扮演了越来越重要的角色。
- 王华忠陈雅平陈佩度
- 关键词：RNA干扰
- 小麦抗白粉病相关基因的转化被引量：14
- 2007年
- 利用玉米花青素苷合成调节基因C1-Lc作为报告基因,通过瞬间表达后愈伤组织表面红色斑点的统计分析,优化了小麦幼胚愈伤组织的基因枪转化参数。小麦Beclin1类似基因TaTBL和硫代硫酸硫转移酶基因TaTST是2个在白粉菌诱导条件下具有增强表达特性的抗病相关基因。本实验进一步利用基因枪将ubi强启动子控制下的2个基因导入到小麦品种扬麦158的幼胚愈伤组织细胞中,使用除草剂经两轮选择培养基上的筛选和再生获得抗性植株,进一步通过抗性植株的PCR分析获得转TaTBL基因植株5株,转TaTST基因植株6株。转基因植株离体叶片的人工接种实验表明,外源基因的导入不同程度上增强了植株的白粉病抗性,表现为延缓了白粉菌的发育。
- 王华忠邢丽萍陈佩度
- 关键词：小麦白粉病抗病相关基因基因转化
- 小麦重要自噬相关基因ATG18的鉴定和表达分析被引量：6
- 2014年
- 【目的】克隆小麦重要自噬相关基因ATG18,分析其编码产物的序列特征和高级结构,了解其在生物、非生物胁迫及激素处理条件下的表达模式,阐明其生物学功能。【方法】利用EST拼接和RT-PCR方法从白粉菌侵染的小麦叶片中克隆ATG18 cDNA序列,利用生物信息学方法进行基因的外显子-内含子结构分析、编码蛋白的结构域和保守氨基酸预测、高级结构分析和物种间同源蛋白的进化分析。采用实时荧光定量PCR方法研究基因表达对白粉菌侵染和外源激素处理的响应模式及对高盐、干旱、低温黑暗和缺氮培养等逆境胁迫处理的响应模式。【结果】获得了4个小麦ATG18家族成员(TaATG18a、TaATG18b、TaATG18c和TaATG18d)cDNA。4个基因高度相似,均含有1 158 bp开放阅读框(ORF),编码385个氨基酸的蛋白质。4个基因的编码蛋白在一级结构上均含有典型的WD-40结构域、磷脂酰肌醇-3-磷酸(PI3P)结合基序和保守的ATG2结合位点氨基酸残基。4个基因均具有2种转录后的可变剪接方式,2种剪接产物mRNA分别编码完整的有功能蛋白和N端截短导致结构域和功能位点缺失的无功能蛋白。TaATG18a蛋白在高级结构上折叠成与其他WD-40蛋白类似的β-推进器样构象,PI3P结合基序位于推进器第五叶片的折叠4和第五、六叶片的连接部分,ATG2结合位点位于连接第二叶片和第三叶片的loop上。TaATG18s能够被白粉菌侵染诱导表达,但具体的诱导表达模式在抗、感白粉病反应之间存在明显差异。在广谱抗白粉病基因Pm21和小种专一性抗白粉病基因Pm3f介导的抗病反应中,TaATG18s均呈现接种白粉菌后0—36 h期间的2次诱导表达模式,2次诱导表达时间与白粉菌侵染进程密切相关。在中感材料扬麦158遗传背景上的感病反应中,TaATG18s尽管也呈现2次诱导表达,但第一次诱导表达持续时间短且强度低于含Pm21的近等基因系上抗病反应中的表现
- 孙鸿张微卫晓静王华忠
- 关键词：小麦细胞自噬白粉病
- 耐盐和盐敏感型小麦品种对NaCl胁迫的生理响应及耐盐性差异被引量：23
- 2021年
- 为探究小麦品种类型对盐胁迫的生理响应及敏感性差异,以耐盐型品种济麦22和盐敏感型品种河农6425为材料,对幼苗期植株施以不同浓度的NaCl胁迫处理,比较分析了两个品种幼苗在胁迫条件下的生长、生理生化和叶绿体荧光特征等方面的差异。结果表明,NaCl胁迫对幼苗地上和地下部分的生长表现浓度依赖性的抑制效应,对耐盐型品种的抑制程度较小。在生理响应方面,幼苗体内的Na^(+)含量随NaCl浓度的增加而上升,K^(+)和Ca^(2+)含量则表现相反的变化趋势,耐盐型品种幼苗在胁迫处理前、后均具有较高的K^(+)/Na^(+)比和Ca^(2+)/Na^(+)比;NaCl胁迫导致幼苗的光系统Ⅱ受损,表现在Fv/Fm、Fv/Fo、qP和YⅡ等叶绿体荧光参数数值下降,降幅在耐盐性品种上相对较小。在氧化胁迫和抗氧化系统方面,NaCl胁迫导致幼苗体内活性氧水平的上升和过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)等抗氧化酶的响应;POD活性在处理后的0—12 d范围内呈先下降后上升的趋势,CAT活性则呈先上升后下降的趋势。耐盐品种的POD活性在胁迫早期受抑制时间较短,随后的响应更迅速且上升幅度更高;耐盐品种的CAT活性上升幅度更高,且在胁迫后期对高浓度NaCl和长时间胁迫导致的酶活性抑制的耐受性更强。耐盐品种抗氧化酶的这一响应特征与其较低的活性氧上升幅度一致,也与其较低水平的代表膜损伤程度的丙二醛(MDA)积累一致。耐盐型品种根部的MDA积累经200 mmol/L NaCl处理1 d后达到峰值,而盐敏感品种根部的MDA积累经150 mmol/L NaCl处理1 d后即达到峰值。以上研究结果表明,耐盐型小麦品种济麦22可分别通过其较强的K^(+)/Na^(+)、Ca^(2+)/Na^(+)调节能力和抗氧化酶体系缓解盐胁迫所导致的渗透胁迫和活性氧伤害,从而表现出耐盐的特征。
- 豆昕桐王英杰王华忠岳洁瑜
- 关键词：NACL胁迫离子含量抗氧化酶活性
- 病原侵染早期小麦抗白粉病性状的构成因素剖析和QTL定位分析
- 2011年
- 以国际小麦作图组织提供的W7984×Opata85重组近交群体为材料,将白粉病抗性分解为互作早期不同时间点的乳突指数、乳突级别、吸器指数和二级菌丝指数等成分性状,在成分性状鉴定和统计的基础上,进行遗传分析和相关QTL定位。白粉菌侵染早期乳突指数和吸器指数随时间的变化趋势均受主效单基因的调控。数量性状分析共找到34个与抗白粉病相关的QTL(21个主效QTL),分布于小麦1B、1D、2B、3A、3B、3D、4A、4B、4D、5B、6A、6B、6D、7B和7D染色体上。位于7B染色体上的QTL(QPmPI16.tn-7B)对乳突形成的影响极为显著,贡献率达48.7%,促进乳突形成的等位变异来自Opata85。不同成分性状存在共定位的QTL。成分性状的特异QTL提供了更多有关抗白粉病遗传机制的信息。
- 王华忠章珍贺洋岳洁瑜
- 关键词：小麦白粉病QTL定位
- Cd胁迫对2个耐Cd能力不同的小麦品种幼苗生长和生理特征的影响被引量：8
- 2020年
- 为了解耐镉(Cd)能力不同的小麦品种幼苗对镉适应性的生理差异,分别用浓度为0、10、50、100和300μmol/L的Cd处理河农6425(Cd敏感型)和92R137(耐Cd型)的幼苗,测量2个小麦品种幼苗的生长指标、含水量、叶绿素荧光参数等,并检测根部Ca^2+水平的变化.结果表明,与对照组相比,Cd处理组中2个小麦品种幼苗的株高、叶长、最长根长以及含水量等生长指标均下降,地上部位和根部的Cd含量显著升高.92R137的长势和含水量好于河农6425,Cd含量和转移吸收均高于河农6425.低浓度Cd处理组中,2个小麦品种的叶绿素荧光参数Fv/Fm、Fv/F0、YⅡ和qP的变化幅度均较小,高浓度Cd处理组中,YⅡ和qP随着处理浓度的增加和培养时间的延长急剧下降,且河农6425的变化幅度高于92R137的变化幅度.正常小麦根尖有少量Ca^2+均匀分布,随Cd处理时间延长,小麦根尖Ca^2+水平逐渐上升,积累于分生区.92R137小麦根尖的Ca^2+水平随时间匀速增加,荧光亮度逐渐增强;河农6425小麦根尖的Ca^2+积累速率逐渐加快,Cd处理20 min时Ca^2+水平明显高于92R137.总之,Cd适应性强的品种92R137幼苗的长势好,含水量、Cd含量、Cd转移系数和叶绿素荧光参数均高于Cd适应性差的品种河农6425,根尖中Ca^2+水平低于后者的水平.
- 张欣王英杰豆昕桐王华忠岳洁瑜
- 关键词：小麦镉胁迫幼苗生长生理特征
- 小麦幼胚再生培养体系优化及优良转化受体基因型的筛选被引量：13
- 2008年
- 为建立适于优良小麦品种遗传转化的高效组织培养体系,以20个优良小麦推广品种为材料,对以幼胚为外植体的愈伤诱导、分化和生根壮苗培养基进行筛选。结果表明,添加500 mg/L水解酪蛋白、100mg/L脯氨酸、100 mg/L谷氨酰胺,并以40 g/L麦芽糖为碳源的MXD2培养基的出愈率最高,愈伤质量最好。以大量元素减半的1/2 MX为基本分化培养基,添加1 mg/L ZT和0.5 mg/L IAA对愈伤组织诱导分化的效果最好,分化率最高达到83.0%。以1/2 MX培养基中添加0.5 mg/L IAA和0.5 mg/L MET的生根效果最好,且移栽成活率高。不同基因型的组织培养特性差异显著,筛选到扬麦158、南农9918、济麦20、宁麦9号等8个基因型可作为优良的转基因受体材料,并初步建立起适合于它们的植株再生体系。
- 邢莉萍王华忠蒋正宁钱晨曹爱忠陈佩度
- 关键词：小麦幼胚基因型转化受体
- 抗白粉病Pm21基因候选克隆的转化及功能鉴定
- ＜正＞南京农业大学细胞遗传所培育的小麦-簇毛麦易位系6VS/6AL上带有的抗白粉病Pm21基因的抗性强,抗谱广。利用现代基因工程技术克隆Pm21基因并将其导入常规小麦品种中,对提高小麦白粉病抗性具有重要的意义。本研究是在...
- 邢莉萍王华忠曹爱忠陈雅平于玲陈佩度
- 文献传递
- 小麦自噬相关因子ATG5的原核表达和抗血清制备被引量：2
- 2017年
- 细胞自噬在植物生长发育和环境响应中扮演了重要角色,ATG5是参与自噬小体组装的核心因子之一。在前期工作中我们克隆了两个小麦ATG5基因TaATG5a和TaATG5b,并对其开展了初步的功能分析。鉴于后续基因功能研究中的免疫学方法涉及对特异性抗体的需求,通过载体构建、原核表达和亲和层析过程获得了TaATG5a的重组蛋白,经兔免疫过程制备了TaATG5a的抗血清,采用ELISA和Western杂交等方法鉴定了抗体的效价和特异性。结果表明,克隆于pET30a载体上的TaATG5a在大肠杆菌中能够被IPTG高效诱导表达,重组蛋白的表观分子量与理论值基本一致,表达量在诱导0-8h范围内逐渐增加。纯化的重组蛋白纯度较高,满足抗体制备要求。制备的抗血清能特异性识别原核表达和小麦内源的TaATG5a,效价达到1∶25600。此外,制备的抗血清通过Western杂交还能够识别共价连接的小麦ATG12-ATG5复合物,该复合物是小麦叶片中ATG5的主要存在形式。
- 张加姿李开心于宝佳岳洁瑜王华忠
- 关键词：小麦原核表达抗血清
- 盐胁迫下不同玉米自交系的耐盐生理差异分析被引量：2
- 2021年
- 为了分析耐盐能力不同的玉米品种响应盐胁迫的生理差异,分别用0、10、25、50和100 mmol/L的NaCl处理PH4CV(盐敏感型玉米自交系)和PH6WC(耐盐型玉米自交系)的幼苗,测量2个玉米品种幼苗的生长生理、光合生理和逆境生理等方面的指标.结果表明,相同NaCl浓度胁迫处理下,耐盐品种PH6WC中K+的质量分数和SOD活性均大于盐敏感品种PH4CV中的数值,MDA含量低于PH4CV中的数值,叶绿素荧光参数Y(Ⅱ)、ETR(Ⅱ)、qP均高于PH4CV中的数值,NPQ低于PH4CV中的数值.以上结果说明,PH6WC可通过降低MDA含量、增加SOD活性、缓解PSⅡ系统所受损伤,来缓解盐胁迫对玉米的伤害效应.
- 王丽红豆昕桐王英杰王华忠韩立森岳洁瑜
- 关键词：玉米盐胁迫逆境生理光合生理耐盐能力
