汪立杰
- 作品数：9 被引量：13H指数：3
- 供职机构：安徽医科大学公共卫生学院劳动卫生与环境卫生学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金安徽省高校省级自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生理学更多>>
- 三氯乙烯对人角质形成细胞NO合成及细胞活力的影响被引量：1
- 2008年
- 目的研究三氯乙烯(TCE)对人角质形成细胞(KC)一氧化氮(NO)合成以及细胞活力的影响,探讨三氯乙烯引起皮肤细胞毒性的机制。方法体外培养的人角质形成细胞以0.125、0.25、0.5、1.0、2.0mmol/L浓度的TCE染毒4h,另以诱导型一氧化氮合酶(iNOS)抑制剂氨基胍(AG)100μmol/L预处理细胞30min后再行TCE处理,分别于染毒后12h、24h、48h、72h时检测细胞上清中NO的含量,MTT法观察细胞活力。结果低剂量的TCE不引起NO含量改变(与溶剂对照比较,P>0.05),0.5、1.0、2.0mmol/L浓度的TCE染毒组NO含量分别在染毒后的24h、48h和72h开始升高(P<0.05),对应的细胞活力则相应下降(P<0.05);AG预处理的0.5、1.0和2.0mmol/LTCE染毒组在处理48h后NO含量开始下降(与对应的TCE染毒组比较,P<0.05),且回复到正常溶剂对照水平(P>0.05),其所对应的细胞活力逐步回升(与对应的TCE染毒组比较,P<0.05)。结论TCE以剂量和时间依赖方式诱导人KC产生NO,而过量的NO可能介导了TCE的KC细胞毒性。
- 叶良平汪立杰沈彤朱启星
- 关键词：氨基胍
- 三氯乙烯诱导入表皮角质形成细胞凋亡的实验研究被引量：1
- 2009年
- 目的探讨有机溶剂三氯乙烯（TCE）诱导正常人表皮角质形成细胞（NHEK）凋亡的可能机制。方法TCE处理NHEK后，分光光度法测细胞上清中半胱氨酸蛋白水解酶（Caspase）-3、8和9的活性，膜联蛋白V／碘化丙啶（PI）双染后流式细胞仪（FCM）测细胞凋亡，Rhl23／PI双染后FCM测线粒体膜电位（△mm）；用Caspase-3抑制剂或Caspase-9抑制剂预处理NHEK1h，验证Caspase的活化。结果不同浓度TCE处理NHEK4h后培养不同时间，Caspase-3和9活性呈剂量和时间依赖的升高，培养12、24h，各TCE处理组Caspase-3和9活性与溶剂对照比差异均有统计学意义（均P〈0．05），而Caspase-8活性变化不明显。0．125、0．25、0．5、1．0和2．0mmol／LTCE处理NHEK4h后培养12h，膜联蛋白V＋／PI-为（20．1±4．1）％、（30．0±7．5）％、（42．1±8．2）％、（56．0±6．1）％和（79．1±4．3）％，除0．125mmol／L组外，其余组与溶剂对照组（9．4±3．0）％比较，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。膜联蛋白V＋／PI-与Caspase-3和9活性都呈正相关（r=0．786、0．736，均P〈0．05），Caspase-3活性与Caspase-9活性也呈正相关（r=0．845，P〈0．05），膜联蛋白V＋／PI-和Caspase-3活性均与Caspase-8活性无相关。100txmol／Lz-DEVD—FMK预处理使2．0mmol／LTCE处理的NHEK中Caspase-3活性从（0．963±0．043）nmo]pNA·min-1·ml-1。下降为（0．349±0．045）nmolpNA·min-1·ml-1膜联蛋白V＋／PI～从（80．0±5．5）％下降为（16．3±3．2）％（P〈0．01），Caspase-9活性变化不大（P〉0．05）。100μmol／L的Z．LEHD-FMK预处理不仅使得2．0mmol／LTCE处理的NHEK中Caspase-3活性下降为（0．338±0．011）nmolpNA·min-1·ml-1，膜联蛋白V＋／PI-下降为（16．1±1．7）％，而且Caspase-9活性也从（0．821±0．031）nmo]pNA-rain～·ml。下降为（0．240±0．043）nmo｜pNA·rain～·ml～，差异有统计学意义（P〈0．01
- 沈彤马泰叶良平汪立杰朱启星
- 关键词：三氯乙烯线粒体膜细胞凋亡角质形成细胞
- 三氯乙烯诱导人表皮角质形成细胞凋亡中依赖Caspase-9的Caspase-3激活被引量：4
- 2009年
- 目的探讨有机溶剂三氯乙烯(TCE)诱导正常人表皮角质形成细胞(NHEK)凋亡过程中可能的信号通路。方法用0.125、0.25、0.5、1.0、2.0mmol/L的TCE处理NHEK4h,并培养4、8、12、24h,分光光度法测上清中Caspase-9和Caspase-3活性,Annexin-V/PI双染后流式细胞仪(FCM)测细胞凋亡;Caspase-3抑制剂Z-DEVD-FMK和Caspase-9抑制剂Z-LEHD-FMK预处理组,用100μmol/LZ-DEVD-FMK或Z-LEHD-FMK预处理NHEK1h,再用2.0mmol/LTCE染毒4h后培养至12h。结果不同浓度TCE处理NHEK4h后培养不同时间,可诱导Caspase-3和Caspase-9活性升高,培养12、24h时,各TCE处理组Caspase-3和Caspase-9活性与溶剂对照比差异有统计学意义(P<0.05)。不同浓度TCE处理NHEK4h后培养12h,凋亡细胞(Annexin-V+/PI-)所占百分比随TCE剂量增加而升高,除0.125mmol/LTCE组外,其它各处理组Annexin-V+/PI-细胞所占百分比与对照组比差异均有统计学意义(P<0.05)。相关分析显示Annexin-V+/PI-细胞所占百分比与Caspase-3和Caspase-9活性都呈正相关(P<0.05)。100μmol/LZ-DEVD-FMK预处理明显抑制2.0mmol/LTCE诱导的Caspase-3活性上升和Annexin-V+/PI-细胞所占百分比的增加(P<0.05),对Caspase-9活性影响不明显(P>0.05)。100μmol/LZ-LEHD-FMK预处理不仅抑制2.0mmol/LTCE诱导的Caspase-3活性上升和Annexin-V+/PI-细胞所占百分比的增加,还抑制Caspase-9活性上升(P<0.01)。结论TCE诱导NHEK凋亡中,内部凋亡途径中上游关键酶Caspase-9和下游效应分子Caspase-3均激活,且Caspase-3的激活依赖Casapase-9的活化。
- 沈彤叶良平汪立杰张学军朱启星
- 关键词：半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9细胞凋亡
- IL-6和IL-8在三氯乙烯致敏豚鼠血清中的变化被引量：3
- 2010年
- 目的通过豚鼠致敏最大值试验(guinea pig maximization test,GPMT)方法建立豚鼠致敏模型,检测并比较TCE致敏豚鼠与未致敏豚鼠血清中IL-6和IL-8的水平,探讨IL-6和IL-8在三氯乙烯(TCE)过敏性皮炎中的作用。方法将豚鼠随机分为空白对照组,溶剂(橄榄油)对照组,DNCB阳性对照组和TCE处理组。采用GPMT法建立豚鼠致敏模型。根据致敏结果及末次激发后采血的不同时点将TCE处理组分为TCE未致敏24h组,TCE致敏24h组,TCE未致敏72h组,TCE致敏72h组。用ELISA试剂盒测定血清中IL-6和IL-8的含量。结果DNCB组致敏率为100%,TCE组致敏率为62.1%。溶剂对照组与空白对照组差异均无统计学意义。与溶剂对照组相比,TCE未致敏24h组IL-6水平降低,差异有统计学意义(P<0.05),TCE未致敏72h组与TCE未致敏24h组相比,IL-6水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与溶剂对照组相比,TCE未致敏72组IL-8水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论血清中细胞因子IL-6和IL-8水平在TCE诱导的致敏组和未致敏组豚鼠间,仅个别时间段的差异有统计学意义,提示两者可能仅在一定时间段中发挥作用。
- 汪亮汪立杰戴丹沈彤朱启星
- 关键词：三氯乙烯白细胞介素-6白细胞介素-8
- 三氯乙烯致敏豚鼠免疫性肝损伤及免疫调节机制的初步研究
- 1研究背景 三氯乙烯(trichloroethylene,TCE)是一种有机溶剂,在工业上主要用做金属和电子元件的脱脂、清洗和去污。职业性皮肤接触TCE的工人中出现的严重皮肤损伤已经成为目前国内主要的职业卫生问题。但其皮...
- 汪立杰
- 关键词：三氯乙烯肝损伤免疫反应
- 文献传递
- Caspase-9在三氯乙烯诱导人表皮角质形成细胞凋亡中作用的研究
- 目的用体外研究方法,通过检测Caspase-9活性及细胞凋亡,探讨Caspase-9在有机溶剂三氯乙烯(TCE)诱导正常人表皮角质形成细胞(NHEK)凋亡中的作用。方法用0.125、0.25、0.5、1.0、2.0 mm...
- 沈彤叶良平汪立杰张学军朱启星
- 关键词：三氯乙烯角质形成细胞CASPASE-9细胞凋亡
- 文献传递
- 三氯乙烯诱导人角质形成细胞凋亡中Caspase-3活力的研究被引量：5
- 2009年
- 目的观察三氯乙烯(TCE)诱导离体培养的人角质形成细胞(KC)Caspase-3活力变化及细胞凋亡情况,探讨TCE诱导KC凋亡的可能信号通路。方法以不同浓度(0.125、0.250、0.500、1.000、2.000 mmol/L)TCE对离体分离培养的KC分别染毒至4、8、12、24 h;Caspase-3抑制剂(Z-DEVD-FMK)预处理组,先用100μmol/L Z-DEVD-FMK预处理细胞1 h,然后再用2.000 mmol/L TCE染毒12 h。用分光光度法检测细胞Caspase-3活力变化,借助Annexin-V/PI双染和流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果与空白对照相比,TCE染毒4 h,各TCE剂量组Caspase-3活力无明显变化(P>0.05);染毒8 h,1.000 mmol/L TCE组Caspase-3活力和2.000 mmol/L TCE组Caspase-3活力,与对照组相比差异有显著性(P<0.05);TCE染毒12 h和24 h,各TCE剂量组Caspase-3活力明显升高,与对照组相比差异有显著性(P<0.05),且呈剂量-效应关系。各TCE剂量组,在TCE浓度达到0.250 mmol/L以后,细胞凋亡率与对照组相比差异有显著性(P<0.05),且明显呈剂量-效应关系。Z-DEVD-FMK预处理组,与2.000 mmol/L TCE组比较,Caspase-3活力和细胞凋亡率明显得到抑制(P<0.01),而与空白对照相比差异无显著性(P>0.01)。结论在TCE诱导离体培养的KC凋亡中,Caspase-3的活化可能发挥了重要的作用。
- 汪立杰叶良平沈彤朱启星
- 关键词：三氯乙烯角质形成细胞CASPASE-3
- 三氯乙烯致敏豚鼠单核淋巴细胞中β-arrestin蛋白表达和核转录因子及激活蛋白-1活性的研究
- 2010年
- 目的 测定三氯乙烯（TCE）致敏豚鼠外周血单核淋巴细胞（PBMC）中β-arrestin蛋白表达水平,核转录因子（NF-κB）和激活蛋白-1（AP-1）活性以及血清中肿瘤坏死因子（TNF-α）水平,探讨TCE致敏中免疫反应调节机制.方法 根据豚鼠最大值试验方法,用TCE对豚鼠进行处理（TCE处理组,14只）,同时设立空白对照（5只）和DNCB阳性对照（7只）,对受试动物进行皮肤反应评分,据此判断致敏与否,并把TCE处理组分为TCE致敏组和TCE未致敏组.提取豚鼠外周血单核细胞（PBMC）,用免疫蛋白印迹（Western bloting）法检测β-arrestin蛋白表达水平,用电泳迁移率试验（EMSA）方法检测NF-κB和AP-1活性.酶联免疫吸附（ELISA）试剂盒检测血清中TNF-α水平.结果 空白对照组豚鼠未见红斑或水肿,TCE组的部分豚鼠皮肤出现红斑和水肿,致敏率为71.4%,DNCB处理组所有动物皮肤出现明显红斑或水肿,致敏率为100%.空白对照、TCE未致敏组、TCE致敏组和DNCB处理组豚鼠PBMC中β-arrestin蛋白表达水平比较,差异无统计学意义（P〉0.05）.与空白对照组和TCE未致敏组相比,TCE致敏组NF-κB活性明显升高,且差异有统计学意义（P〈0.05）;而各组豚鼠AP-1活性比较,差异无统计学意义（P〉0.05）.TCE致敏组血清中TNF-α水平[（55.485＋8.732）pg/ml]较空白对照组[（32.118±12.550）pg/ml]明显升高,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 以TCE致敏豚鼠β-arrestin和AP-1可能没被激活,而NF-κB被明显激活且在TCE致敏免疫反应中发挥着调节作用.
- 汪立杰郭瑞娟沈彤朱启星
- 关键词：三氯乙烯NF-ΚB
- 三氯乙烯诱导人角质形成细胞凋亡过程中caspase-8及caspase-9活力的变化
- 2009年
- 目的观察三氯乙烯（TCE）致人原代角质形成细胞（KC）损伤过程中caspase-8、caspase-9活力及细胞凋亡率的变化，探讨TCE引起KC凋亡的可能机制。方法体外培养的KC分别给予0．125、0．250、0．500、1．000和2．000mmol／L的TCE染毒4、8、12、24h，以100μmol／L的caspase-9特异抑制剂Z—LEHD—FMK预处理细胞1h，再用2．000mmol／LTCE染毒12h，MTT法检测细胞活力变化，分光光度法检测caspase-8及caspase-9活力变化，流式细胞仪检测细胞凋亡率变化。结果与空白对照相比，2．000和1．000mmol／LTCE染毒组作用8h后细胞活力降低，染毒超过12h，各剂量组细胞活力均降低，差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。在不同的时间段，各剂量组的caspase-8活力与对照组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。染毒8h时，2．000mmol／LTCE组caspase-9活力明显高于对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）；12和24h时，各剂量组caspase-9活力与对照组比较，差异均有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。不同剂量的TCE染毒12h后，2．000mmol／LTCE染毒组细胞凋亡率升高至（80．43±4．21）％，空白对照组为（9．40±2．98）％，除0．125mmol／LTCE组外，其他各染毒组的细胞凋亡率与对照组相比，差异均有统计学意义（P〈0．05），剂量一效应关系明显。Caspase-9抑制剂预处理组caspase-9活力及细胞凋产率较2．000mmol／LTCE染毒组明显降低，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论Caspase-9的活化在TCE诱导的体外培养的人KC的凋亡过程中发挥重要作用。
- 朱启星叶良平汪立杰沈彤
- 关键词：CASPASE类
