汪海仪
- 作品数：7 被引量：16H指数：3
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- NF-κB p65介导的前列腺素E2分泌及DNA结合抑制因子2蛋白表达在促进大鼠桡骨骨折早期愈合的作用被引量：4
- 2011年
- 目的骨再生过程包含一系列复杂的分子信号途径,通过探讨NF-κB作为骨折愈合过程中"关键性激活点"的可能性,为基因治疗骨折延迟愈合和骨不连提供实验依据。方法取6～7周龄Wistar雄性大鼠33只,体重180～220 g,随机分为4组。对照组(A组,n=3)、单纯NF-κB抑制剂Bay 11-7082处理组(B组,n=6):分别在大鼠右前肢桡骨中下段经皮注射0.3 mL生理盐水或含50μmol/L Bay 11-7082的生理盐水,每天1次,持续至处死。单纯骨折组(C组,n=12)、Bay 11-7082干预骨折组(D组,n=12):制备右侧桡骨中下段骨折模型后,C组不作任何处理,D组处理方法同B组。观察大鼠一般情况,A组于注射后7 d,B、C、D组于注射后3、7 d取标本行ALP活性、前列腺素E2(prostaglandins E2,PGE2)含量检测以及Western blot检测NF-κB p65、BMP-7和DNA结合抑制因子2(inhibitor of DNA binding 2,Id2),并取C、D组14、28 d标本行HE染色观察。结果各组大鼠均存活至实验完成。注射后3、7 d B组ALP活性及PGE2含量与A组比较,差异均无统计学意义(P>0.05);C组较A组增高,D组较A组降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。注射后3、7 d,各组骨折端组织中均见NF-κB p65、BMP-7、Id2表达,B组各因子表达水平与A组比较,差异均无统计学意义(P>0.05);C组NF-κB p65和BMP-7蛋白表达水平较A组增高,Id2蛋白表达水平较A组降低,差异均有统计学意义(P<0.01);D组NF-κB p65、BMP-7蛋白表达水平较A组降低,Id2蛋白表达较A组增高,差异均有统计学意义(P<0.01)。组织学观察示,注射后14、28 d C组骨折端组织见大量骨性骨痂,而D组28 d时才见骨性骨痂。结论 NF-κB p65可通过调控PGE2分泌以及BMP-7和Id2蛋白表达促进大鼠桡骨骨折的早期愈合。
- 牛增志王乐禹胡晓芳汪海仪欧阳钧黄文华余磊邱小忠
- 关键词：NF-ΚB前列腺素E2BMP-7
- LPS诱导MC3T3-E1成骨细胞增殖并增加NF-κB p65蛋白的表达被引量：4
- 2010年
- 目的:研究LPS-NF-κB信号通路在骨形成过程中的作用。方法:MC3T3-E1成骨细胞常规培养,待细胞融合率为80%时,分别加入100μg/L和500μg/L LPS处理6 h。流式细胞仪检测细胞周期,计算细胞DNA相对增殖指数;RT-PCR法检测LPS处理成骨细胞后NF-κB mRNA的表达;蛋白质印迹法(Western blot-ting)检测LPS处理成骨细胞后NF-κB p65蛋白的表达;细胞免疫荧光法检测LPS处理成骨细胞后NF-κB p65的核易位情况;电泳迁移率变动分析(EMSA)LPS处理MC3T3-E1细胞后NF-κB活力的变化情况。结果:100μg/L和500μg/L LPS可诱导MC3T3-E1成骨细胞增殖;LPS处理成骨细胞后NF-κB mRNA的表达与正常组比较无显著变化(P>0.05),而NF-κB p65蛋白的表达明显高于对照组(P<0.01);LPS处理成骨细胞后免疫荧光法可明显观察到NF-κB p65从细胞质转移入细胞核,且EMSA结果显示LPS处理组细胞核内NF-κB结合活性增加。结论:低浓度的LPS可促使成骨细胞增殖,此过程中并不影响NF-κB p65的基因表达水平,但能增加NF-κB p65蛋白的表达并提高细胞核内NF-κB的结合活性。
- 王乐禹蒋萱余磊胡哓芳汪海仪欧阳钧邱小忠
- 关键词：骨重建脂多糖类成骨细胞NF-ΚB
- 前列腺素E2对MC3T3-E1成骨细胞基因表达谱的影响被引量：2
- 2011年
- 目的通过检测前列腺素E2（prostaglandins E2，PGE2）作用于MC3T3-E1成骨细胞后基因表达谱的改变，探索PGE2促进骨形成作用的分子机制。方法10μmol／L的PGE：处理MC3T3-E1成骨细胞30min后，用基因芯片技术检测PGE，处理成骨细胞后基因表达谱的变化，选取在骨再生过程中重要的基因用Western blot法检测验证。结果PGE，处理成骨细胞后，276个基因表达上调，其中和骨再生有关的基因主要有单核细胞向巨噬细胞转化基因（monocyte to macrophage differentiation，MMD）、核受体基因（nuclear receptor subfamily 4，group A，member 2，NR4A2）、骨形态发生蛋白-7（bone morphogenetic protein-7，BMP-7）、成骨细胞特异性因子（periostin，osteoblast specific factor，POSTN）和钙黏蛋白等；168个基因表达下调，其中和骨再生有关的基因有DNA结合抑制因子1，2，3（Id1，2，3）等。Western blot结果显示，与对照组比较，PGE：处理成骨细胞后核因子-κB（nuclear factor—κB，NF—κB）p65和BMP-7蛋白表达显著上升（P〈0．01），Id2蛋白表达显著下降（P〈0．01），与基因芯片结果基本一致。结论结合基因芯片结果和Western blot结果，可以推测PGE：处理成骨细胞后首先激活核受体基因NR4A2，继而引起NF-κB的活化，最后引起下游基因BMP-7和Id2等的变化从而引起成骨细胞分化，促进骨再生。
- 王乐禹胡晓芳欧阳钧汪海仪余磊秦建强邱小忠
- 关键词：前列腺素E2寡核苷酸序列分析骨再生
- Reversine对小鼠C2C12成肌细胞增殖与分化作用的初步研究被引量：2
- 2010年
- 目的初步探讨Reversine对小鼠C2C12成肌细胞增殖分化的影响。方法体外培养C2C12成肌细胞系.实验第一步分三组:A组:正常对照组,B组:1μM Reversine处理12h组,C组:1μM Reversine处理24h组。上述三组用Annexin-V/PI双染法处理C2C12成肌细胞并用流式细胞仪技术检测三组C2C12细胞凋亡的影响;实验第二步分五组:D组:正常对照组,E组:单独1μM Reversine处理7d,F组:单独成骨诱导7d,G组:1μM Reversine诱导12h+单独成骨诱导7d,H组:1μM Reversine诱导12h+1μM Reversine联合成骨诱导7d。上述五组光镜下观察细胞形态的变化,并通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测五组C2C12成肌细胞分化抑制因子(ID2),肌肉发生调节因子(Myogenin),生肌因子后结蛋白(Desmin)mRNA的表达。结果与A组相比,C组1μM Reversine处理24h能引起C2C12细胞明显的凋亡,B组1μM Reversine处理12h的C2C12细胞未见明显的凋亡。与D组相比,E组和H组的细胞增殖明显受到抑制,F组和G组细胞逐渐增殖并融合。结论 Reversine能够显著的抑制成肌细胞的增殖分化过程。
- 汪海仪吴佳明王乐禹秦建强余磊宋辰刚王齐邱小忠
- 关键词：细胞凋亡细胞增殖细胞分化
- 骨骼肌损伤修复过程中细胞去分化现象的初步研究
- 再生医学领域中,因干细胞具有多分化潜能和自我更新能力的生物学特征,其在修复再生过程的作用,受到越来越多的关注[1,2]。目前存在的问题是:获取人类的胚胎干细胞不仅对胚胎组织是种损伤性的操作,更是受到伦理道德规范的束缚。成...
- 汪海仪
- 关键词：细胞分化骨骼肌
- 文献传递
- C2C12细胞诱导构建三维骨骼肌组织被引量：4
- 2010年
- 目的利用修饰并铸型后的Sylgard 184凹槽与C2C12细胞复合培养、诱导分化,获取三维极性骨骼肌组织。方法 Sylgard 184双组分以10∶1的比例均匀混合并倒板,室温下静置固化并对其表面压槽铸型,Hank液冲洗凹槽,Matrigel和胶原的混合液均匀铺被凹槽底部,置生物安全柜待细胞基质自然干燥、紫外线照射消毒1h以上时接种C2C12细胞悬液,细胞增殖约80%汇合时改用分化培养基进行分化诱导,倒置显微镜下观察肌管的分化状态,RT-PCR方法检测肌管内myogenin和desmin基因mRNAs的表达,免疫荧光检测生肌转录因子myogenin和desmin蛋白的表达,扫描电镜观察肌管形态和肌管间的连接。结果 C2C12细胞在Sylgard 184弹性体铸型压槽中培养分化7d后,倒置显微镜下可见肌管呈极性分化,且肌管之间融合紧密;21d后,扫描电镜检测可见肌管之间排列紧密且相互重叠,形成膜样结构,厚度可达0.15mm,具有三维性;RT-PCR、免疫荧光检测证实极性分化肌管内具有myogenin和desmin的阳性表达。结论修饰并铸型的Sylgard 184凹槽具有一定的方向引导效应,能促进C2C12细胞分化形成多核肌管,且肌管呈极性重叠排列,形成三维极性骨骼肌组织结构。
- 王齐廖华秦建强余磊艾鹤英汪海仪邱小忠
- 关键词：MATRIGEL肌组织反转录-聚合酶链式反应C2C12细胞
- LPS诱导MC3T3-E1成骨细胞内NF-κB p65蛋白水平的增加
- 王乐禹蒋萱余磊胡哓芳汪海仪欧阳钧邱小忠
