段邵斌
- 作品数：2 被引量：9H指数：2
- 供职机构：中南大学湘雅二医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖南省科技计划项目更多>>
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- 去甲斑蝥素抑制蛋白磷酸酶2Ac对Smad3-L区去磷酸化抗肾间质纤维化被引量：4
- 2015年
- 目的 证实去甲斑蝥素（NCTD）具抗肾间质纤维化的作用,其抗肾间质纤维化的机制与靶向抑制蛋白磷酸酶2Ac（PP2Ac）对Smad3中间连接区（Smad3-L）的去磷酸化修饰有关.方法 常规培养人肾小管上皮细胞（HK-2）,转染PP2Ac shRNA质粒后,细胞分为5组：（1）空白组;（2）TGF-β1（5μg/L）组;（3） TGF-β1 ＋NCTD （2.5 mg/L）组;（4）TGF-β1＋PP2Ac shRNA组;（5）TGF-β1＋PP2Ac shRNA＋NCTD组.采用实时荧光定量PCR和Western印迹检测PP2Ac、纤维连接蛋白（FN）、胶原蛋白Ⅰ （Col-Ⅰ）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和E-钙黏蛋白（Ecadherin） mRNA及蛋白的表达.然后将HK-2细胞随机分为3组：（1）空白组;（2）TGF-β1组;（3）TGF-β1＋NCTD组,采用免疫荧光检测pSmad3-L（Ser204）和pSmad3-L（Ser208）在HK-2细胞的分布,Western印迹检测HK-2细胞核蛋白pSmad3-L（Se204）和pSmad3-L（Ser208）的表达.结果 （1）TGF-β1促进HK-2细胞PP2Ac表达,同时上调FN、Col-Ⅰ和α-SMA的表达,下调E-cadherin 的表达.NCTD和PP2Ac shRNA均抑制PP2Ac的表达,下调FN、Col-Ⅰ和α-SMA表达,上调E-cadherin的表达.但NCTD与小干扰RNA共同作用对PP2Ac表达的抑制,以及对TGF-β1诱导的上述指标的改变程度同单纯PP2Ac小干扰RNA干预组无明显差异.（2）TGF-β1刺激HK-2细胞核内pSmad3-L（Ser204）、pSmad3-L（Ser208）表达明显增多,NCTD干预使pSmad3-L（Ser204）、pSmad3-L （Ser208）在细胞核内表达进一步增多.结论 NCTD通过抑制PP2Ac介导的Smad3-L区去磷酸化,发挥抗肾间质纤维化作用.
- 肖争尤燕华李瑛李华向玉琼庾楠楠李军段邵斌刘虹
- 关键词：去甲斑蝥素PHOSPHATASE
- 人白蛋白对HK-2细胞FN、TGFβ_1、IL-6分泌水平的影响被引量：5
- 2007年
- 目的探讨人白蛋白对体外培养的HK-2细胞FN、TGFβ1、IL-6分泌水平的影响。方法本实验选择HK-2细胞株为研究对象,人白蛋白分别以不同的浓度作用培养的HK-2细胞,在不同的时间点用ELISA法检测HK-2细胞FN、TGFβ1、IL-6的分泌水平。结果1)不同浓度人白蛋白作用12 h对HK-2细胞FN、TGFβ1和IL-6分泌水平的影响(ELISA法):结果显示:2.0、5.0、10、20 g/L组与对照组相比较,FN、TGFβ1和IL-6均有显著性升高(P<0.01),0.10、.5 g/L组FN、TGFβ1和IL-6与对照组比较无统计学意义(P>0.05);FN和TGFβ1在5.0 g/L组分泌水平最高,浓度值分别为(47.55±8.31)ng/ml(、124.76±3.10)pg/ml;IL-6在20 g/L组分泌最高,浓度值为(18.04±0.48)pg/ml。2)5.0 g/L人白蛋白在不同作用时间对HK-2细胞FN、TGFβ1和IL-6分泌水平的影响(ELISA法):结果显示:与对照组相比较,作用6 h,FN分泌水平升高(P<0.05),作用12 h和24 h,FN分泌水平有显著性升高(P<0.01),48 hFN分泌水平开始下降,与对照组比较无统计学意义(P>0.05)。TGFβ1分泌水平在6、12和24 h与对照组相比较有显著性升高(P<0.01),48 h与对照组比较无统计学意义(P>0.05);IL-6分泌水平在6、122、4 h与对照组比较均无统计学意义(P>0.05),在48 h分泌水平下降,与对照组比较有显著性差异(P<0.01)。结论1)不同浓度人白蛋白分别作用HK-2细胞12 h,可促进HK-2细胞分泌FN、TGF-β1和IL-6,且FN、TGF-β1、IL-6的分泌与人白蛋白浓度呈明显的剂量依赖性。2)5 g/L人白蛋白分别作用HK-2不同时间,可促进HK-2细胞分泌FN、TGF-β1和IL-6,且FN、TGF-β1、IL-6的分泌水平与人白蛋白作用时间呈明显的时间依赖性。
- 张林刘伏友彭佑铭段邵斌李瑛李辉
- 关键词：人白蛋白肾小管上皮细胞
