- 膜表达型InsB_(15-23) H-2K^d dtSCT对NOD小鼠1型糖尿病发病的影响
- 2015年
- 目的:研究膜表达型Ins B15-23H-2Kddt SCT对NOD小鼠1型糖尿病发病率的影响。方法:用Ins B15-23mdt SCT真核表达载体皮下免疫3周龄NOD母鼠,连续监测NOD小鼠的血糖水平以判断小鼠的发病情况。通过连续切片对NOD小鼠胰岛单个核细胞浸润情况进行检测,并监测IGRP206-214特异性CTLs的变化,来阐明Ins B15-23mdt SCT分子影响1型糖尿病病程的细胞学机制。结果:Ins B15-23mdt SCT组小鼠30周龄时的发病率(9%)显著低于空质粒组(60%)和自然发病组(80%),胰岛单个核细胞浸润情况也较轻,但16和40周龄时两组小鼠外周血IGRP206-214特异性CTLs水平无差异。结论:Ins B15-23mdt SCT真核表达载体能降低NOD小鼠1型糖尿病发病率,并且这种免疫保护作用是IGRP206-214非依赖性的。
- 潘兴元陈则东窦延梁锴余鸣鸣季明春
- 关键词：CD8^+T细胞1型糖尿病NOD小鼠
- 应用dtSCT技术制备低亲和力抗原肽InsB_(15-23)肽的MHCⅠ四聚体被引量：2
- 2013年
- 目的制备低亲和力InsB15-23抗原肽的MHCⅠ四聚体。方法应用二硫键捕获型单链三聚体(disulfide-trap singlechain trimer,dtSCT)技术,将InsB15-23抗原肽、小鼠β2微球蛋白(β2-microglobulin,β2m)和H-2Kd分子以柔性接头(linker,L)依次连接,并在抗原肽的C末端与H-2Kd分子间引入了二硫键,以提高抗原肽与H-2Kd分子结合的稳定性。融合基因克隆入pET-22b原核表达载体,经过诱导表达、洗涤包涵体、稀释复性等步骤获得单体,生物素化后制成InsB15-23dtSCT型四聚体。结果我们比较了自制InsB15-23dtSCT四聚体和商品化G9V传统五聚体对小鼠外周血特异性CTLs的检出率。2种多聚体对阴性对照Balb/c小鼠都显示出很低的非特异性标记水平,都能检出4周龄NOD母鼠外周血中低水平的InsB15-23特异性CTLs,且二者的检出率无统计学差异。结论我们成功制备出稳定的InsB15-23dtSCT型四聚体。与商品化的传统五聚体相比,我们自制的四聚体具有类似的检出率和低非特异性标记水平。
- 潘兴元蒋芳芹梁锴余鸣鸣陈则东窦延季明春焦新安
- 关键词：CD8+T细胞
- 膜表达型InsB_(15-23) H-2K^d dtSCT诱生小鼠特异性CTL细胞研究被引量：2
- 2014年
- 通过SOE-PCR构建膜表达型二硫键捕获型单链三聚体(dtSCT)真核表达载体,肌肉免疫4~5周龄NOD母鼠,利用流式细胞术检测小鼠外周血和脾脏中InsB15-23特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)细胞频率。结果表明:dtSCT组NOD小鼠的外周血中InsB15-23特异性CD8+T细胞频率为1.93%±0.55%,与空质粒对照(0.22%±0.11%)有极显著差异(P<0.01);脾脏中InsB15-23特异性CD8+T细胞频率为0.83%±0.31%,与空质粒对照(0.37%±0.20%)亦有极显著差异(P<0.01)。说明膜表达型InsB15-23H-2Kd dtSCT分子在小鼠体内得到表达,且具有类似天然pMHC I复合物的功能,能够为InsB15-23特异性CTL细胞的活化增殖提供第1信号。
- 潘兴元梁锴余鸣鸣陈则东窦延季明春
- 关键词：NOD小鼠
