柴政斌
- 作品数：7 被引量：18H指数：2
- 供职机构：济南大学更多>>
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- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- GST-pulldown技术在蛋白质相互作用中的应用被引量：11
- 2014年
- 蛋白间相互作用在细胞的生命活动中起着关键作用,GST-pull down技术被广泛用于体外验证蛋白间的直接相互作用。GST-pull down技术既可用来验证已知蛋白间的相互作用,也可用来寻找与已知蛋白相互作用的未知蛋白。虽然该技术在体外验证蛋白间的相互作用上有着较强的特异性,但下结论时仍需慎重。本文就GST-pull down技术的原理及其应用及该技术在应用中需要注意的部分问题进行综述。
- 柴政斌张更林韩金祥
- 关键词：DOWN蛋白质相互作用融合蛋白
- 帕米磷酸二钠对成骨不全骨代谢相关信号通路影响的研究
- 柴政斌鲁艳芹韩金祥
- 关键词：帕米磷酸二钠信号通路成骨不全
- 利用GST-pull down方法筛查PAD4相互作用蛋白及进行其核转运机制的初步研究
- GST-pull down法作为蛋白质相互作用的体外研究方法之一,简单、方便、易操作,但研究未知的蛋白质相互作用难度较大,少有报道;肽酰基精氨酸脱亚胺酶4(PeptidylArginine Deiminase typeⅣ...
- 柴政斌张更林韩金祥
- 文献传递
- 牙本质基质蛋白1功能片段的融合表达及其胞内定位被引量：1
- 2013年
- 目的构建含单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism,SNP)位点不同碱基的37 kD的N-牙本质基质蛋白1(Dentin matrix protein 1,DMP1)和全长DMP1基因重组表达质粒,并分析重组蛋白在HEK293细胞中的表达及定位。方法利用定点突变改造DMP1基因,获得DMP1基因的SNP rs10019009的不同基因型,将含SNP位点不同碱基的37 kD N-DMP1和全长DMP1基因定向克隆入含增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)的质粒pcDNA3.1-EGFP中,构建重组质粒pcDNA3.1-DMP1-EGFP,通过脂质体法瞬时转染HEK293细胞,荧光显微镜观察重组融合蛋白DMP1-EGFP的表达及胞内定位。结果 DNA测序结果表明,定点突变后的DMP1基因的碱基序列与设计序列完全一致;PCR和DNA测序显示重组质粒pcDNA3.1-DMP1-EGFP构建正确;融合蛋白DMP1-EGFP在HEK293细胞中主要表达于细胞胞浆中。结论成功构建了含rs10019009-SNP位点不同碱基的37 kD的N-DMP1和全长DMP1基因重组表达质粒,并在HEK293细胞的胞浆中有效表达,为进一步研究DMP1基因的功能奠定了基础。
- 王学政张更林崔亚洲刘建民柴政斌韩金祥
- 关键词：牙本质基质蛋白1绿色荧光蛋白
- 利用GST-pull down方法筛查PAD4相互作用蛋白及进行其核转运机制的初步研究
- GST-pull down法作为蛋白质相互作用的体外研究方法之一,简单、方便、易操作,但研究未知的蛋白质相互作用难度较大,少有报道;肽酰基精氨酸脱亚胺酶4(PeptidylArginine Deiminase typeⅣ...
- 柴政斌张更林韩金祥
- 利用GST pull-down方法筛查PAD4相互作用蛋白的初步研究
- GST pull-down法作为蛋白质相互作用的体外研究方法之一，简单、方便、易操作，但研究未知的蛋白质相互作用难度较大，少有报道;肽酰基精氨酸脱亚胺酶4(Peptidyl Arginine Deiminase type...
- 柴政斌
- 关键词：融合蛋白蛋白免疫印迹
- 文献传递
- 融合蛋白GST-PADI4可溶性表达条件的优化及纯化被引量：7
- 2014年
- 目的优化融合蛋白GST-PADI4的可溶性表达条件,并对蛋白进行纯化。方法对融合蛋白GST-PADI4工程菌的诱导温度(16、20、25、30、37℃)、诱导剂IPTG浓度(0.05、0.1、0.2、0.5、1 mmol/L)、诱导时菌液A600值(0.2、0.4、0.6、0.8、1.0)、诱导时间(8、12、16、20、24 h)进行优化,分析融合蛋白GST-PADI4的可溶性表达情况;按优化的表达条件进行大量表达后,采用Sepharose 4B亲和层析柱对融合蛋白进行纯化。结果在16℃,菌液A600值约为0.4时,以0.1 mmol/L IPTG诱导12 h,融合蛋白GST-PADI4有较高的可溶性表达;纯化的融合蛋白纯度为91%。结论优化了融合蛋白GST-PADI4的可溶性表达条件,并获得了高纯度的可溶性融合蛋白,为后续研究PADI4蛋白的功能奠定了基础。
- 柴政斌张更林王学政韩金祥
- 关键词：融合蛋白可溶性表达纯化
