杭小同
- 作品数：8 被引量：6H指数：1
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒基因工程国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 登革工型病毒E蛋白在293T细胞中的分泌表达被引量：1
- 2009年
- 目的分泌表达登革I型病毒prM／E基因，为研究该蛋白的免疫学功能和特性奠定基础。方法用RT-PCR法获得登革I型病毒广州分离株全长prM／E基因，在prM基因前添加乙型脑炎病毒的信号肽或同时替换E基因羧基末端的20％为乙脑病毒E基因相应的部分，分别将其克隆入真核表达载体pcDNA5／FRT中，获得三种重组质粒D1prME-pc5，D1JsprME．pc5，D1JsprM80E20JE-pc5。用脂质体法分别将重组质粒DNA转入293T细胞，通过免疫荧光、Western印迹检测外源基因在真核细胞中的分泌表达。结果用免疫荧光法检测到分别转染了三种重组质粒的293T细胞的胞质中均有登革I型病毒蛋白的表达。Western印迹检测转染了D1prME-pc5重组质粒的293T细胞上清中没有特异蛋白条带，转染了经基因改造的重组质粒D1JsprME-pc5和D1JsprM80E20JE-pc5的细胞上清中均存在登革I型病毒的特异蛋白条带。结论转染了三种重组质粒的293T细胞均可表达登革I型病毒prM／E蛋白，只有在prM基因前添加了信号肽的重组质粒转染后蛋白才获得分泌表达。
- 苗芳李川张硕王晓芳李建东张全福刘琴芝韦艳杭小同梁米芳李德新
- 关键词：登革热病毒基因
- 登革病毒感染诊断方法的研究
- 登革病毒(Dengue virus)是登革热(Dengue fever, DF)、登革出血热(Dengue haemorrhagic fever, DHF)和登革休克综合症(Dengue shock syndromc, ...
- 杭小同
- 关键词：登革病毒TAQMAN探针
- 文献传递
- 登革病毒实验室诊断研究进展
- 2010年
- 登革病毒（Dengue virus，DV）是黄病毒科，黄病毒成员，通过蚊子传播，伊蚊是主要传播媒介。病毒感染后可发生登革热、登革出血热、登革休克综合征。广泛流行于热带和亚热带地区，近几十年来，登革热病例急剧增长，据WHO估计，目前全球2／5的人口受到登革病毒感染的威胁，每年约有0．5亿到1亿人感染登革病毒，24000人死亡。
- 杭小同李德新
- 关键词：登革病毒感染登革休克综合征病毒感染后黄病毒科登革出血热
- 登革3型病毒义乌流行株免疫原性研究被引量：1
- 2011年
- 目的对2009年浙江省义乌市暴发流行的登革3型病毒进行系统进化分析并初步研究其E蛋白的免疫原性。方法 RT-PCR扩增义乌分离株全基因组,利用MEGA 4分别构建E及NS1区域核苷酸及氨基酸系统发生树,进行系统进化分析。构建重组质粒JESS-ywD3prM/E397JEV-pcDNA5,IFA及Western Blot检测E蛋白在293T细胞中的表达及分泌情况。将纯化后的分泌性E蛋白免疫BALB/c小鼠,通过ELISA、中和试验等方法对体液免疫进行测定。结果登革3型病毒义乌分离株与广州GZ1D3株及印度GWL-25株核苷酸及氨基酸序列同源性均达到99%以上;其分泌性E蛋白可以刺激小鼠产生登革特异性IgG抗体及针对同型病毒的中和抗体。结论义乌分离株属于登革3型病毒亚型Ⅲ,其分泌性E蛋白具有一定的免疫原性。
- 顾雯金聪张硕张全福李建东杭小同王芹李川梁米芳李德新
- 关键词：登革3型病毒生物学特性
- 登革病毒RT—PCR核酸检测竞争性假病毒颗粒型内参照品的建立被引量：2
- 2010年
- 目的 登革病毒核酸检测竞争性假病毒颗粒型内参照品建立与评价.方法 将登革病毒核酸检测靶基因序列间引入180碱基与登革病毒无关基因序列构建内参照检测靶靶标并在其下游通过核糖体内部进入位点基因介导的荧光蛋白报告基因后引入慢病毒包装载体,在辅助质粒的帮助下转染HEK 293T细胞,收获假病毒颗粒,定量分析后加入到到待检样本和模拟样本中一起进行评价和应用.结果 所构建的登革病毒病毒核酸检测竞争性假病毒颗粒型内参照品能够充当RT-PCR法检测不同型别登革病毒的内参照品,扩增片段大小和病毒目的 扩增片段明显不同,易于区别,能够监测反应的整个过程.结论 登革病毒核酸检测竞争性假病毒颗粒型内参照系统,容易制备,保存简单,易于改造为多种RNA病毒的核酸检测的内参照.
- 杭小同李建东张全福李川张硕梁米芳李德新
- 关键词：登革热病毒逆转录聚合酶链反应
- 重组登革病毒E蛋白结构域Ⅲ抑制登革病毒感染的初步研究
- 2008年
- 目的 了解原核表达的登革病毒（dengue virus，DV）的E蛋白结构域Ⅲ直接抑制登革病毒感染及其抗体的中和作用。方法 在大肠埃希菌中表达l～4型登革病毒E蛋白结构域Ⅲ（EⅢ）。重组蛋白纯化后，进行阻断DV．2感染BHK-21细胞试验。用重组蛋白制备免疫血清，检测抗体中和作用。结果 在大肠埃希菌中成功表达了1～4型登革病毒E蛋白结构域埃希菌，4型重组E蛋白结构域Ⅲ均能够阻断2型DV感染，4型重组蛋白的免疫血清均能中和2型DV，但中和抗体效价不同。结论 原核表达的登革病毒结构域Ⅲ可以直接抑制病毒感染，所产生的抗体具有中和作用。直接抑制和中和抗体均对同型病毒作用较强。
- 陆鹏韦艳曹守春李建东刘琴芝张全福李川苗芳张硕杭小同梁米芳李德新
- 关键词：登革热病毒病毒感染
- 乙脑/登革2型嵌合病毒的构建
- 2009年
- 在乙脑病毒SA14-14-2株复制子载体pPartial△prM/E中克隆入DV2(Dengue virus serotype 2)的prM/E基因,构建乙脑/登革2型嵌合体克隆。将嵌合体克隆线性化后体外转录,获得的RNA转染BHK-21细胞,5～7d可观察到CPE。收获病毒上清液分别感染BHK-21细胞及C6/36细胞。接种于C6/36细胞中的嵌合病毒可使细胞出现CPE,RT-PCR、间接免疫荧光和Western blot检测显示:获得的嵌合病毒具有预期嵌合性核酸并能表达DV2的包膜蛋白,但不能在BHK-21细胞中传代培养。成功构建的乙脑/登革2型感染性克隆为进一步研究登革病毒疫苗奠定了基础。
- 韦艳陆鹏于建石李建东刘琴芝张全福李川苗芳张硕杭小同李德新
- 关键词：乙脑嵌合病毒感染性克隆
- 登革3型病毒义乌流行株免疫原性研究(英文)被引量：1
- 2012年
- 目的对2009年浙江省义乌市暴发流行的登革3型病毒进行系统进化分析并初步研究其E蛋白的免疫原性。方法 RT-PCR扩增义乌分离株全基因组,利用MEGA 4分别构建E及NS1区域核苷酸及氨基酸系统发生树,进行系统进化分析。构建重组质粒JESS-ywD3prM/E397JEV-pcDNA5,IFA及Western Blot检测E蛋白在293T细胞中的表达及分泌情况。将纯化后的分泌性E蛋白免疫BALB/c小鼠,通过ELISA、中和试验等方法对体液免疫进行测定。结果登革3型病毒义乌分离株与广州GZ1D3株及印度GWL-25株核苷酸及氨基酸序列同源性均达到99%以上;其分泌性E蛋白可以刺激小鼠产生登革特异性IgG抗体及针对同型病毒的中和抗体。结论义乌分离株属于登革3型病毒亚型Ⅲ,其分泌性E蛋白具有一定的免疫原性。
- 顾雯金聪张硕张全福李建东杭小同王芹李川梁米芳李德新
- 关键词：登革3型病毒生物学特性
