杨钟华
- 作品数：7 被引量：17H指数：3
- 供职机构：华中科技大学同济医学院附属普爱医院更多>>
- 发文基金：湖北省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 生长分化因子5促进软骨细胞肥大成熟的实验研究被引量：3
- 2012年
- [目的]探讨生长分化因子5(GDF-5)在诱导成人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)成软骨分化的同时,促进其肥大成熟的作用。[方法]体外分离培养hBMSCs,取第四代细胞实验。将细胞消化、悬浮,以5×106/ml的细胞密度进行高密度培养,分别用含0、500 ng/ml GDF-5的软骨诱导液(CM)诱导培养3、4周。免疫组化、甲苯胺蓝染色检测II型胶原、X型胶原和蛋白多糖的表达情况。荧光实时定量RT-PCR检测两组微团II型胶原、X型胶原和蛋白多糖mRNA的表达情况。[结果]实验组微团中的细胞体积较对照组稍大,细胞密度稍低。甲苯胺蓝和免疫组化染色结果显示各组微团均有Ⅱ型胶原、X型胶原和蛋白多糖的表达和分泌,且4周实验组的表达最为强烈。荧光实时定量RT-PCR检测示,干预后3周实验组II型胶原、蛋白多糖基因表达量明显高于3周对照组(P<0.05),但X型胶原基因表达与对照组相比无显著性差异(P>0.05);干预后4周实验组X型胶原基因表达高于其余各组(P<0.05),Ⅱ型胶原、蛋白多糖基因表达明显高于两对照组(P<0.05),但与3周实验组相比较,差异无统计学意义(P>0.05)。[结论]GDF-5在诱导细胞成软骨分化的同时,还可促进其成熟肥大。
- 张山锋勘武生刘军肖军杨钟华
- 关键词：成人骨髓间充质干细胞生长分化因子5软骨分化
- 三报告基因标记骨肉瘤细胞及原位移植模型的建立
- 2015年
- 目的建立一种共表达绿色荧光蛋白(GFP)、红色荧光蛋白(RFP)和荧光素酶三报告基因稳定标记的骨肉瘤细胞株,并利用该细胞株建立骨肉瘤原位移植裸鼠模型,用于监测体内肿瘤的生长以及药物的评价。方法用慢病毒作为载体,将同时携带荧光蛋白和荧光素酶的基因转到U2-OS骨肉瘤细胞中,筛选稳定细胞株,将细胞原位移植到裸鼠的胫骨,通过活体成像观察骨肉瘤在裸鼠体内的生长转移。结果荧光标签能稳定地在细胞中表达,通过活体成像可观察到骨肉瘤在裸鼠体内的生长转移。结论成功建立了一种实时监测骨肉瘤在小鼠体内生长转移的模型,为骨肉瘤的机制研究和体内药物评价提供了一种理想的平台。
- 张山锋刘珍星叶志伟杨钟华
- 关键词：骨肉瘤U2-OS活体成像原位移植
- 远端蒂隐神经营养血管筋膜瓣加植皮修复胫前软组织缺损
- 杨钟华
- “自组装”工程化软骨修复体外关节软骨缺损的实验研究
- 2016年
- [目的]探讨应用＂自组装＂工程化软骨修复体外关节软骨缺损的可行性及其转归。[方法]密度梯度离心法分离培养成人骨髓间充质干细胞（human bone marrow mesenchymal stem cells,h MSCs）。将第3代h MSCs用含100 ng/ml GDF-5的软骨诱导液定向诱导,2周后重悬细胞,以5×10^6/ml的细胞密度接种于2%琼脂糖包被的24孔板,行自组装培养,2周后对标本行大体和组织学观察并采用生物化学法检测软骨相关的生物学特性。然后将部分标本植入到体外全层软骨缺损模型内,培养4周观察软骨缺损的修复效果,并比较修复前与修复后标本的软骨相关生物学特性变化情况。[结果]体外培养2周时预分化的h MSCs＂自组装＂形成一软骨样组织,组织学检测到软骨特异性成分阳性表达。全层软骨缺损修复模型体外培养4周后,大体和组织学可见缺损由工程化软骨所修复,交界面呈紧密黏附状,Ⅱ型胶原和蛋白多糖呈阳性表达,但弱于未移植组。生化结果显示移植组标本的细胞数、GAG和总胶原含量均低于未移植组（P〈0.05）。RT-PCR结果也反映出这一变化。[结论]＂自组装＂工程化软骨能有效地修复体外关节软骨缺损,并且能较稳定地维持软骨表型。
- 张山锋杨钟华勘武生肖军刘军孙志博
- 非肌肉肌球蛋白重链-9在骨肉瘤组织中的表达及其对细胞上皮间质转换和侵袭能力的影响被引量：6
- 2017年
- 目的非肌肉肌球蛋白重链-9(MYH9)对肿瘤的发生发展具有重要的调控作用,文中旨在探讨MYH9在骨肉瘤组织中的表达及对骨肉瘤细胞上皮间质转换(EMT)和侵袭能力的影响。方法收集52例骨肉瘤癌组织及距肿瘤边缘5cm处的癌旁组织,RT-PCR和免疫组化检测骨肉瘤癌组织和癌旁组织中MYH9的mRNA和蛋白表达水平。脂质体法转染U2-OS细胞MYH9 shRNA表达质粒,沉默MYH9表达,转染后将细胞分成3组:以正常的U2-OS细胞为对照组、以转染空质粒的U2-OS细胞为空载组和以转染MYH9 shRNA的U2-OS细胞为干扰组。采用RT-PCR检测转染后U2-OS细胞MYH9的mRNA水平,Western blot检测U2-OS细胞转染后MYH9以及EMT相关蛋白E-cadherin和Vimentin的蛋白水平变化,Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭能力变化。结果 RT-PCR检测结果表明,癌旁组织中MYH9 mRNA的相对表达量(1.526±0.148)较癌组织(3.547±0.195)明显减少(P<0.05);免疫组化检测结果表明,MYH9蛋白在肿瘤组织中主要表达于细胞质中,且MYH9蛋白在癌组织中表达显著高于癌旁组织,其阳性表达率分别为59.6%(31/52)和26.9%(14/52),差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR和Western blot检测结果表明,沉默MYH9基因表达后,干扰组MYH9 mRMA相对表达量和蛋白水平较对照组和空载组明显降低(P<0.05)。与对照组相比较,干扰组骨肉瘤细胞U2-OS中E-cadherin蛋白明显上调,Vimentin蛋白出现下调。Transwell实验表明,48 h后各组均有穿出微孔滤膜的细胞,干扰组穿出微孔滤膜的细胞[(41.2±15.1)个]较对照组[(117.3±12.4)个]和空载组[(193.5±14.7)个]明显减少(P<0.05)。结论 MYH9蛋白在骨肉瘤组织中表达显著高于癌旁组织,沉默MYH9可以通过降低骨肉瘤细胞上皮间质转换来降低骨肉瘤的侵袭能力。
- 刘军杨钟华张山锋王新泽
- 关键词：骨肉瘤
- 淫羊藿苷促进入骨髓间充质干细胞成软骨分化的研究被引量：8
- 2013年
- 目的探讨应用淫羊藿苷促进人骨髓间充质干细胞（hMSCs）成软骨分化的可行性及效果。方法体外分离培养hMSCs，取第3代细胞实验。将hMSCs分别用无血清高糖培养基（H．DMEM）和含1×10-8、1×10-7、1×10-6、1×10-5mol／L淫羊藿苷的软骨诱导液（CM）诱导，显微镜下观察细胞形态变化，噻唑蓝（MTT）法检测各组细胞的增殖。以5×10 9/L的细胞密度离心构建微团，诱导培养3周。逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）检测各组蛋白多糖和Ⅱ型胶原mRNA的表达。免疫组织化学、甲苯胺蓝染色检测Ⅱ型胶原和蛋白多糖表达。结果5组微团分别由无血清H．DMEM、含1×10-8、1×10-7、1×10-6、1×10-5mol／L淫羊藿苷的CM诱导3周后，除H—DMEM组无Ⅱ型胶原和蛋白多糖表达外，其他各组Ⅱ型胶原蛋白和蛋白多糖的表达呈浓度依赖性增加，ImageProPlus6．0软件测得各组Ⅱ型胶原平均吸光度（A）值分别为0．0214±0．0035、0．1182±0．0105、0．1886±0．0184、0．2903±0．0261、0．3476±0．0287，各组差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论淫羊藿苷能促进hMSCs成软骨分化，软骨分化程度呈浓度依赖性增加。
- 肖军马德彰杨钟华张山锋刘军
- 关键词：成人骨髓间充质干细胞淫羊藿苷微团培养软骨分化
- 远端蒂隐神经营养血管筋膜瓣加植皮修复胫前软组织缺损
- 目的介绍远端蒂隐神经营养血管筋膜瓣加植皮修复胫前软组织缺损的手术方法及临床应用效果。方法2007年2月-2012年6月,采用远端蒂隐神经营养血管筋膜瓣加植皮修复胫前软组织缺损10例,男6例,女2例;年龄19～56岁,平均...
- 杨钟华
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