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杨树原
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1
被引量:1
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2011
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重组腺病毒Ad5-mHes1的构建及其在小鼠海马组织中的表达
被引量:1
2011年
目的构建含小鼠Hes1基因的重组腺病毒(rAd)并观察其在小鼠海马组织中的表达情况.为进一步研究Hes1基因在成年小鼠神经再生中的作用奠定基础。方法利用限制酶对pEGFP—miles1质粒和pDC316质粒进行酶切,将获得的miles1目的基因片段和pDC316质粒酶切产物回收,在T4DNA连接酶作用下连接,形成pDC316-mHes1穿梭质粒,并用PCR法及EcoRI+HindⅢ双酶切法对pDC316-miles1进行鉴定。利用AdMax包装系统,穿梭质粒pDC316-mHes1与骨架质粒pBHGlox_E1,3Cre共转染293细胞,同源重组产生复制缺陷型腺病毒Ad5-mHes1,其报告病毒是包含高强度绿色荧光蛋白(EGFP)的腺病毒Ad5-EGFP。向成年C57BL/6小鼠海马中立体定向注射Ad5-miles1及Ad5-EGFP,Western blotting检测注射后7d Hes1蛋白在海马中的表达情况,荧光显微镜观察EGFP在海马中的表达情况。结果用PCR法及EcoR I+HindⅢ双酶切法对pDC316-miles1鉴定的实验结果与预期结果相符,经测序后其序列与miles1 CDS序列一致。注射后7d.Hesl蛋白在PBS注射组和Ad5-mHes1注射组海马组织中均有表达,其Hesl蛋白与GAPDH的比值分别为0.363±0.053和0.705±0.128,差异有统计学意义(P〈0.05)。荧光显微镜下在海马齿状回颗粒细胞层中观察到Ad5-EGFP表达的绿色荧光。结论本研究成功构建了Ad5-miles1表达载体系统,并在C57BL/6成年小鼠海马组织中表达了Hes1基因。
颜荣
赵杰
张奇
张琳
郇林春
赵旺森
杨树原
张建宁
杨新宇
关键词:
重组腺病毒
质粒
海马
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