杨孝朴
- 作品数：110 被引量：391H指数：10
- 供职机构：甘肃农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金甘肃省农业生物技术研究与应用开发项目国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生文化科学更多>>
- 生物制品学课程教学改革与实践被引量：6
- 2012年
- 针对生物制品学课程教学中存在的问题,从教学内容、教学方法、教学手段、考核方式等方面探讨了生物制品学课程教学改革的具体措施,以期提高教学质量,培养综合型高素质人才。
- 杨学山杨孝朴杨德龙栗孟飞张真
- 关键词：生物制品学教学内容教学方法
- HPLC法测定新型兽用蒿甲醚注射液中蒿甲醚含量
- 2017年
- 为建立新型兽用蒿甲醚注射液中蒿甲醚含量的高效液相色谱测定方法,采用Hypersil ODS C18色谱柱(5μm,4.6 mm×150 mm),流动相为乙腈-水-四氢呋喃(体积比为62∶37∶1),柱温30℃,流速1.0 m L/min,检测波长216 nm。测定结果显示,蒿甲醚在该色谱条件下系统适应性好,在质量浓度为100~800μg/m L时线性关系良好,回归方程为y=302.36x-682.02,R2=0.999 8;总平均回收率为97.58%,RSD为1.58%;对3批样品的蒿甲醚含量进行测定,RSD为1.42%。表明建立的方法可用于新型蒿甲醚注射液中蒿甲醚含量的测定。
- 王嗣涵李冰周绪正杨孝朴张继瑜
- 关键词：高效液相色谱法
- 实验性脾虚证大鼠血浆胃泌素和胃动素含量变化及四君子汤对其调整作用被引量：37
- 2001年
- 通过大鼠肌肉注射利血平的方法复制了脾虚证动物模型 ,并应用四君子汤治疗以反证 ,研究了脾虚证大鼠血浆胃泌素 ( GAS)和胃动素 ( MOT)的含量变化。结果表明 ,脾虚证大鼠血浆 GAS和 MOT含量显著降低 ,与对照组和四君子汤治疗组比较差异极显著 ( P<0 .0 1 ) ,对照组与四君子汤治疗组之间 GAS和 MOT的变化无明显差异 ( P>0 .0 5) ;脾虚时的消化吸收机能障碍和胃肠动力学的改变与 GAS和 MOT的分泌减少密切相关 ;四君子汤能够提高血浆 GAS和 MOT含量 ,有效地改善脾虚证的胃肠功能。
- 魏彦明宗瑞谦杨孝朴
- 关键词：四君子汤胃泌素胃动素实验性脾虚证大鼠血浆
- 一株产脂肪酶细菌的分离、筛选和鉴定被引量：3
- 2018年
- 【目的】从自然界筛选出脂肪酶高产菌株,鉴定其种属并对其酶学性质进行研究.【方法】从白银市不同地点油污染河流和土壤中采集样品,利用维多利亚蓝培养基与中性红油脂培养基进行初筛,改进铜皂-分光光度计法测定酶活力进行复筛,再结合形态观察、生理生化鉴定和16SrDNA序列分析进行菌种鉴定,并对脂肪酶的酶学性质进行研究.【结果】分离筛选出一株产脂肪酶的细菌BY-8,鉴定为粪产碱杆菌(Alcaligenes faecalis).该菌株所产脂肪酶在40℃和pH 7.0的条件下酶活力为3.64U/mL.酶学性质研究结果表明,产生的脂肪酶最适作用温度和pH分别为35℃和7.0,Mg^(2+)和Ca^(2+)对脂肪酶活性有明显地促进作用,而Cu^(2+)和Zn^(2+)对酶活性有抑制作用,EDTA和SDS可使脂肪酶失去活力.【结论】菌株BY-8所产脂肪酶的酶活力一般,但酶学性质稳定,是一种中性脂肪酶.
- 刘晓丽刘玉华韩生义马才杨孝朴
- 关键词：脂肪酶酶学性质
- 树立精品意识,深化兽医形态学课程建设
- 高等学校教学质量和教学改革工程,是教育部制定的《2003——2007年教育振兴行动计划》的重要组成部分,精品课程建设是“质量工程”的重要内容之一。国家级精品课程是具有“一流教学队伍,一流教学内容,一流教学方法,一流教材,...
- 崔燕余四九李晓明杨孝朴
- 文献传递
- 口蹄疫病毒NSP 3ABC基因在昆虫细胞中的分泌表达及其活性检测被引量：4
- 2007年
- 用设计的特异引物,扩增得到了N-端带有6×His编码序列的口蹄疫病毒完整3ABC基因序列,并将其亚克隆入带有蜂毒溶血肽序列的穿梭质粒pMelBac-B中,构建了重组质粒pMel-3ABC。将该重组质粒与杆状病毒骨架DNABac-N-BlueTM共转染Sf9昆虫细胞,通过噬斑筛选和PCR鉴定,获得了含有目的基因的重组杆状病毒。重组病毒感染Sf9昆虫细胞,采用通过SDS-PAGE和Western blot检测,证明目的基因在昆虫细胞中得到了正确的表达,表达产物分泌至细胞培养上清中,并具有良好的生物活性。表达的目的蛋白经过镍柱亲和层析法纯化后,用间接ELISA方法检测与口蹄疫病毒感染动物血清的反应性,证明表达目的蛋白与感染动物血清有很好的反应性而与正常动物以及免疫动物血清不发生反应。该研究为建立一种更加敏感和特异的口蹄疫病毒感染动物与疫苗免疫动物的鉴别诊断方法奠定了基础。
- 马江涛卢曾军曹轶梅郭慧琛郭建宏祝秀梅杨孝朴刘在新
- 关键词：口蹄疫病毒3ABC基因杆状病毒分泌性表达
- 猪TLR3胞外区片段重组载体的构建、表达和多克隆抗体的制备被引量：1
- 2012年
- 为制备猪TLR3(poTLR3)胞外区蛋白的多克隆抗体,从poTLR3克隆载体扩增胞外区基因序列连接到pGEX-4T-1载体上,转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG的诱导下,表达GST-poTLR3融合蛋白,将表达的融合蛋白纯化,免疫家兔制备抗体,并以间接ELISA法测定抗体效价,利用Western-blot和细胞免疫荧光验证抗体与真核表达蛋结合的白特异性.结果表明:制备的多克隆抗体的效价可达1∶128 000,poTLR3胞外区蛋白在大肠杆菌中得到高效表达,并且制备的多克隆抗体特异性好、滴度高.
- 管齐赛房永祥贾怀杰何小兵周涛杨孝朴景志忠
- 关键词：胞外区原核表达多克隆抗体
- O型口蹄疫病毒OA58株3C基因的克隆与真核表达被引量：2
- 2007年
- 利用RT-PCR技术扩增获得了长度约640 bp的口蹄疫病毒目的基因,回收片段后与pMD18-T载体进行连接,测序结果表明获得了口蹄疫病毒3C基因。将重组质粒pMD18-3C与表达载体pEGFP-N1分别用BamHⅠ+XhoⅠ双酶切后,进行定向亚克隆,对重组表达质粒pEGFP-3C进行PCR、酶切鉴定及DNA测序,结果表明重组表达质粒所含的3C基因读码框正确。用pEGFP-3C转染BHK-21细胞,荧光显示目的基因EGFP发出绿色荧光;对3C转录的mRNA进行RT-PCR鉴定,证实3C基因在BHK-21细胞中得到了表达。
- 刘萍丛国正杨孝朴沈小燕邵军军独军政林彤王光华易华山常惠芸谢庆阁
- 关键词：口蹄疫病毒
- 表达EGFP蛋白新型重组新城疫病毒疫苗载体的构建被引量：2
- 2017年
- 为构建新型新城疫病毒(NDV)载体疫苗,前期我们将La Sota全长c DNA中的F基因编码区替换为基因Ⅶ型NDV的F基因编码区,并将其裂解位点突变为弱毒株的序列,构建获得了p NDFLSP-m F重组质粒。为探索p NDFLSP-m F是否能够作为载体有效地表达外源蛋白,在p NDFLSP-m F的P基因与M基因之间引入PmeⅠ酶切位点,并将EGFP基因编码区克隆至构建好的p NDFLSP-m F载体中,构建含有EGFP基因的重组质粒p NDFLSP-m F-EGFP。将p NDFLSP-m F-EGFP以及辅助质粒p CI-NP-K、p CI-P-K、p CI-LK共转染表达T7 RNA聚合酶的重组痘病毒预感染的BSR-T7/5细胞,拯救获得了重组病毒La Sota-m FEGFP。通过RT-PCR证明,被拯救的重组病毒中含有插入的外源基因EGFP。荧光观察和Western-blot分析结果表明,EGFP蛋白能在重组病毒中稳定表达。生物学特性测定结果显示,La Sota-m F-EGFP具有低毒力毒株特征,MDT为144 h,能够在鸡胚上有效地复制,EID50为1×108.75/0.1 m L。上述研究结果为研制和开发新型NDV载体疫苗奠定了基础。
- 赵冉齐甜铭孙军峰刘怀然韩宗玺杨孝朴刘胜旺
- 关键词：新城疫病毒绿色荧光蛋白
- 鸡γ-干扰素基因的克隆及原核表达被引量：4
- 2012年
- 参照Digby发表的鸡γ-干扰素的核苷酸序列,设计1对引物,应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从Con A诱导过的鸡脾淋巴细胞中特异性的扩增出大小约为500bp的基因片段。将该扩增基因进行克隆测序,结果表明其序列与Digby报道的CHIFN-γ基因序列的同源性达100%。将该基因插入原核表达载体pGEX-4T-1中构建成重组表达载体pGEX-CHIFN-γ,并将其导入大肠杆菌BL21中,诱导表达的重组蛋白经SDS-PAGE分析分子质量约为43ku,表明所克隆的CHIFN-γ基因在原核细胞中得到表达。
- 芦芝川史耀旭杨孝朴
- 关键词：Γ-干扰素克隆
