李文杰
- 作品数：4 被引量：9H指数：2
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- 硫化氢对蛛网膜下腔出血大鼠海马区神经损伤的保护作用及机制研究被引量：2
- 2014年
- 目的 探讨硫化氢对蛛网膜下腔出血（SAH）大鼠海马区神经损伤的影响及其作用机制. 方法 30只清洁级SD大鼠按随机数字表法分成3组：对照组、SAH模型组、硫化氢组,每组各10只.后2组大鼠应用大脑中动脉穿刺法制作成SAH模型,硫化氢组于造模后腹腔注射100mg/kg硫氢化钠.各组大鼠于造模后24h进行神经功能评分,后取海马组织切片,采用荧光免疫组化染色和Western blotting等方法检测海马区神经细胞胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、S-100B、Bcl-2、caspase-3、c-fos、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）蛋白的表达变化. 结果 硫化氢组神经功能评分（2.1±0.8）较SAH模型组（3.1±0.7）相比明显降低,差异有统计学意义（P＜0.05）.荧光免疫组化染色结果显示：SAH模型组GFAP、S-100B蛋白表达较对照组明显增高,差异有统计学意义（P＜0.05）;而应用硫化氢干预后二者表达较SAH模型组明显下降,差异均有统计学意义（P＜0.05）.SAH模型组Bcl-2、caspase-3均有表达,而应用硫化氢干预后Bcl-2表达较SAH模型组明显增多、caspase-3表达明显下降,差异均有统计学意义（P＜0.05）.Western blotting检测结果显示：SAH模型组c-fos、MMP-9表达较对照组均明显增高,差异有统计学意义（P＜0.05）;而应用硫化氢干预后二者表达与SAH模型组相比明显下降,差异均有统计学意义（P＜0.05）. 结论 硫化氢对SAH后脑损伤有明显保护作用,其机制可能与改善胶质细胞的功能及相关凋亡机制有关.
- 王建强刘艳梅朱倩令狐艳刘珺李文杰王旻晨吴开云
- 关键词：蛛网膜下腔出血硫化氢胶质纤维酸性蛋白S-100BC-FOS
- 硫化氢对蛛网膜下腔出血大鼠额顶叶脑区神经损伤的保护作用
- 2015年
- 目的探讨外源性硫化氢对蛛网膜下腔出血(SAH)大鼠早期脑损伤的保护作用及可能机制。方法30只清洁级SD大鼠随机分成3组:对照组、SAH模型组、硫化氢作用组,每组各10只。后两组大鼠应用大脑中动脉穿刺法制作SAH模型,硫化氢组于模型制作成功后立即腹腔注射100mg/kg硫氢化钠。各组大鼠24h后进行神经功能评分,取额顶叶脑组织,用免疫荧光和Western blotting等方法检测额顶叶脑区神经细胞GFAP、S-100b、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Caspase-3、c-Fos、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达的变化。结果硫化氢组与SAH组相比神经功能评分有明显改善(P<0.01)。硫化氢组神经评分得3分以上的只有2只动物,而SAH组有8只。免疫荧光结果显示,SAH组GFAP、S-100b蛋白表达较对照组明显增高(P<0.05);硫化氢作用后两者表达较SAH组明显下降(P<0.05)。SAH组Bcl-2、Caspase-3均有表达,硫化氢作用后Bcl-2表达明显增加,而Caspase-3则明显下降(P<0.05)。Western blotting结果进一步显示,SAH组c-Fos、MMP-9表达较对照组均明显增高(P<0.05);硫化氢作用后两者表达则明显下降(P<0.05)。结论硫化氢对SAH后脑损伤有明显保护作用,其机制可能与改善胶质细胞的功能及与凋亡机制有关。
- 刘艳梅朱倩令狐艳王建强刘珺李文杰王旻晨吴开云
- 关键词：蛛网膜下腔出血硫化氢S-100B
- 小鼠室管膜下区神经干细胞增殖及分化研究被引量：6
- 2015年
- 目的探讨新生小鼠室管膜下区(subventricular zone,SVZ)神经干细胞(neural stem cells,NSCs)体外培养方法,为治疗神经系统疾病寻找合适的种子细胞。方法取SPF级新生ICR小鼠SVZ组织,采用机械法和酶消化法分离培养NSCs并传代,倒置显微镜下观察细胞形态。取第3代细胞行抗SOX-2和抗巢蛋白(Nestin)免疫荧光染色鉴定,Brd U标记法及MTT法检测比较培养3、7 d细胞增殖能力。以未添加b FGF和EGF的无血清培养基诱导第3代NSCs分化,抗β-微管蛋白Ⅲ(Tuj-1)、GFAP免疫荧光染色检测比较诱导3、7 d NSCs向神经元及星形胶质细胞分化的能力。结果成功分离培养新生小鼠SVZ组织中细胞,倒置显微镜下见原代培养3 d即有神经球形成,至7 d时见大量悬浮生长神经球,且体积较前增大,部分神经球出现融合及贴壁分化现象。细胞呈典型NSCs形态。免疫荧光染色鉴定获得细胞为NSCs。细胞增殖能力检测显示,体外培养3 d的NSCs中Brd U阳性细胞数为(75.817±2.961)个、吸光度(A)值为0.478±0.025,均显著高于培养7 d的(56.600±4.881)个、0.366±0.032(t=3.366,P=0.028;t=2.752,P=0.011)。经诱导培养后,NSCs能分化为神经元、星形胶质细胞;细胞分化能力检测显示,诱导分化3 d时Tuj-1、GFAP阳性细胞百分比分别为23.1%±3.7%、23.7%±3.8%,显著低于诱导分化7 d(40.1%±3.6%、37.1%±4.5%)(t=3.285,P=0.030;t=3.930,P=0.017)。结论体外培养的新生小鼠SVZ处NSCs时具有自我增殖和多分化潜能,且体外培养时间不同,细胞增殖、分化能力亦不同。
- 张涛李文杰王峰张宇徐艾强沈忆新
- 关键词：室管膜下区神经干细胞细胞分化细胞增殖小鼠
- 降钙素基因相关肽促进体外培养的神经干细胞向神经元分化被引量：1
- 2015年
- 降钙素基因相关肽（CGRP）是一种含有37个氨基酸的生物活性多肽,可促进多种细胞的增殖[1].本研究旨在观察CGRP对神经干细胞（NSCs）增殖和分化的影响.一、材料与方法1.材料：无特定病原体（SPF）级新生（24h内）CD1小鼠（上海斯莱克实验动物有限公司）,雌雄不拘;神经干细胞培养基：DMEM/F12和Neurobasal（比例1∶1）、1％ N2及1％ B27（均购自Invitrogen公司）;20μg/L碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）和20 μg/L表皮生长因子（EGF,均购自Peprotech公司）;一抗：大鼠抗巢蛋白（Nestin）（Millipore公司）;兔抗β-微管蛋白Ⅲ（Tuj-1,Abcam公司）;小鼠抗胶质纤维酸性蛋白（GFAP,Sigma公司）;山羊抗性别决定基因高迁移率组蛋白（SOX-2,Santa Cruz公司）;二抗：Cy3耦联的驴抗兔IgG（Jackson Immuno Research公司）;Alexa Fluor 488驴抗大鼠IgG、Alexa Fluor 488驴抗山羊IgG及Alexa Fluor 647驴抗小鼠IgG（Invitrogen公司）;倒置显微镜（Olympus公司）;激光共聚焦显微镜（Zeiss公司）;CGRP（大鼠来源,Sigma公司）,以1 g/L溶于双蒸水中储存于-20℃长期保存备用[2].
- 张涛李文杰范志海张鹏王峰张宇沈忆新
- 关键词：降钙素基因相关肽神经干细胞神经元分化碱性成纤维细胞生长因子胶质纤维酸性蛋白激光共聚焦显微镜
