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李元: 作品数：71 被引量：398H指数：11; 供职机构：第四军医大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划高等学校骨干教师资助计划更多>>; 相关领域：医药卫生生物学农业科学文化科学更多>>

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抗MTB FurB单克隆抗体制备及特性分析: 2007年; 目的制备针对结核分支杆菌FurB蛋白的单克隆抗体(mAb)并分析其特性。方法利用纯化的FurB蛋白,采用腹股沟皮下包埋硝酸纤维素膜和腹腔内注射FurB的方法免疫小鼠,然后进行细胞融合、克隆化制备抗FurB mAb,用Western-blot鉴定其特异性,用ELISA法初步分析其特异性位点和相对亲和力。结果获得3株抗FurB mAb,分别为DD12、BH1和DH8,经Western-blot分析都可与FurB蛋白特异性结合。三株mAb中DH8效价最高达到10-10,相对亲和力,BH1>DH8>DD12,3株mAb的抗原表位相近。结论获得的抗FurB mAb效价高、特异性强,可以作为进一步研究FurB功能和作用的有效工具。; 姜泓高雪李元张海徐志凯薛莹; 关键词：分枝杆菌结核单克隆抗体

产毒大肠杆菌菌毛抗原F_(41)单克隆抗体的研制与鉴定: 1990年; 作者报道以纯化的产毒大肠杆菌菌毛F_(41)抗原,利用杂交瘤技术获得5株高滴度的抗F_(41)抗原的单克隆抗体,经鉴定1F6,2C5,3B6为IgG_1 1H5,4E11为IgM。腹水抗体效价达10^(-6),通过免疫扩散,免疫印迹法及固相菌体ELISA试验证实,5株单克隆抗体均为针对产毒大肠杆菌菌毛F_(41)抗原的特异性抗体;红血球凝集抑制及肠上皮细胞粘附阻断试验证明1F6,2C5,3B6具有生物学活性,1H5,4E11无生物学活性。; 李元吕苹吴玉水汪美先; 关键词：大肠杆菌单克隆抗体抗原

结核分枝杆菌Rv2450基因的克隆、表达及纯化被引量：7: 2004年; 目的 :克隆结核分枝杆菌 (Mtb)Rv2 4 5 0基因 ,序列测定正确后进行融合表达、纯化 .方法 :采用聚合酶链反应(PCR)从MtbH37Rv基因组中扩增出Rv2 4 5 0编码基因 ,序列测定正确后 ,亚克隆到融合表达载体 pPro EXHT中 ,转化大肠杆菌DH5α ,目的基因经IPTG诱导 ,由T7启动子调控表达带 6个组氨酸残基的Rv2 4 5 0蛋白 ,在变性条件下对目的蛋白进行亲和层析纯化 .结果 :得到融合 6个组氨酸残基的Rv2 4 5 0蛋白纯度大于 90 % .结论 :构建了MtbRv2 4 5 0基因的重组表达载体 ,并获得了高纯度的融合表达蛋白 .; 薛莹姜泓高雪柏银兰师长宏张海徐志凯李元; 关键词：结核分枝杆菌克隆纯化

融合表达Ag85B-ESAT6的结核分枝杆菌真核表达载体的构建及其免疫原性被引量：10: 2004年; 目的 :构建融合表达结核分枝杆菌 (Mycobacteriumtuberculosis,MTB)分泌蛋白Ag85B ESAT6真核表达载体 ,研究该重组载体在体外的表达和在小鼠体内诱生体液免疫应答的能力 .方法 :设计含不同酶切位点的Ag85B和ESAT6引物 ,采用PCR的方法从MTB毒株H37Rv DNA中分别扩增出相应大小的DNA片段 ,将片段分别与pGEM T easy载体连接后测序 .将测序正确的Ag85B和ESAT6按照不同的酶切位点克隆入真核表达载体pcDNA3,挑选出阳性克隆 ,分别命名为AZ pcD NA3 EF 和EZ pcDNA3 AF,将重组质粒电转CHO细胞 ,RT PCR检测融合蛋白mRNA的表达 ,间接免疫荧光测定CHO细胞内融合蛋白的表达 ;用重组质粒免疫BALB/c小鼠 ,ELISA测定特异性抗体的滴度 .结果 :PCR获得的Ag85B和ESAT6序列与GenBank报道的一致 .RT PCR可检测融合基因转录出mR NA ,转染重组质粒的CHO细胞内有较强的免疫荧光 ,AZ pcD NA3 EF 质粒免疫小鼠血清特异性抗体滴度为 1∶1 0 0 0 ,EZ pcD NA3 AF 质粒免疫小鼠血清特异性抗体滴度为 1∶1 5 0 0 .结论 :Ag85B和ESAT6融合基因真核表达载体构建成功。; 师长宏范雄林徐志凯李元柏银兰薛莹; 关键词：分枝杆菌结核 ESAT6

单克隆抗体鉴定鼠伤寒沙门氏菌的实验研究: 1992年; 本文应用沙门氏菌单克隆抗体建立了ELISA检测鼠伤寒沙门氏菌(STM)的方法,并与协同凝集方法对临床分离的162株STM进行对比鉴定研究,结果表明ELISA其方法灵敏高度,可检出5×10~2菌/ml,特异性强,且结果准确客观,对鼠伤寒沙门氏菌0-4抗原的检出率为100％,抗原H-i的检出率为96.3％,同时结果表明所用沙门氏菌McAb特异性和敏感性都达到了目前所用的沙门氏菌诊断因子血清的标准,具有推广应用的前景。; 李别虎李元杨晓峰李东阳许立华; 关键词：ELISA 鼠伤寒菌单克隆抗体

结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B-ESAT6的融合表达及纯化被引量：12: 2004年; 目的　融合表达结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B ESAT6 ,为结核病的预防提供有效亚单位疫苗。方法　设计含不同酶切位点的Ag85B和ESAT6引物 ,采用聚合酶链反应 (polymerasechainreaction ,PCR)的方法从结核分枝杆菌毒株H3 7Rv DNA中分别扩增出相应大小的DNA片段 ,将片段分别与PGEM T easy载体连接测序。将测序正确的Ag85B和ESAT6按照不同的酶切位点克隆入PPROEXHT表达载体 ,挑选出阳性克隆 ,将诱导的表达产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)分析 ,同时与含6个组氨酸 (histidine 6×his)的单克隆抗体 (monoclonalantibody ,mAb)进行固定化蛋白质免疫学测定(Western blot) ,将用含Ni+鳌合剂的Ni NTA亲合柱纯化的表达产物免疫小鼠 ,用结核分枝杆菌培养上清滤液蛋白 (culturefiltrateproteins ,CFP)作为抗原 ,酶联免疫吸附试验 (enzyme linkedimmunosorbentassay ,ELISA)测定免疫小鼠血清特异性抗体的滴度。结果　PCR获得的Ag85B和ESAT6序列与基因文库 (GenBank)报道的完全一致。两者在大肠杆菌DH5α株中融合表达的产物约为 370 0 0 ,与预计大小相吻合。Western blot结果显示 ,在相对分子量约 370 0 0处有表达产物与 6×hismAb特异性结合带。表达产物为包涵体 ,通过Ni NTA纯化系统 ,可得到纯化的目的蛋白。; 师长宏范雄林徐志凯李元柏银兰薛莹; 关键词：结核分枝杆菌纯化结核病

抗鳗弧菌单克隆抗体的研制及鉴定被引量：9: 2000年; 夏永娟黄威权李元黄宝成李别虎金晓航张荣庆; 关键词：鳗弧菌单克隆抗体杂交瘤

屋尘螨抗原Derp2基因的克隆和表达被引量：10: 2002年; 目的　构建并克隆屋尘螨抗原 Der p2基因 ,在大肠杆菌中初步表达 .方法　根据已发表的 Der p2基因 ,人工设计合成一系列基因片段 ,经单链扩增后连接成完整的 Der p2基因 ;将该基因克隆入表达载体 p Pro EX HTb中 ,测序并进行初步表达 .结果　利用所设计的结构制备了完整的 Der p2基因 ,以大肠杆菌为宿主在 IPTG的诱导下获得初步表达 ,该外源蛋白 Mr约为 17× 10 3,占总蛋白量的 2 0 % .结论　所构建的 Der; 史皆然李元戚好文李别虎柏银兰范雄林薛莹; 关键词：基因克隆基因表达哮喘重组BCG疫苗疾病预防

结核杆菌cfp10真核载体的构建、表达与基因免疫(英文)被引量：2: 2003年; 目的 :构建以结核分枝杆菌H3 7Rvcfp10基因为基础的基因疫苗 .方法 :采用BamHI和XbaI双酶切质粒pGEM Teasy CFP10中 ,10 g·L-1琼脂糖凝胶电泳回收约 30 0bp大小片段 ,以亚克隆法构建于真核表达载体 pcDNA3.1的相应酶切位点 .阳性克隆提取质粒 ,体外电穿孔转化CHO细胞 ,RT PCR法检测cfp10特异的mRNA的表达 .质粒肌注免疫BALB/c小鼠 ,ELISA检测小鼠血清中相应抗体的滴度 .结果 :用BamHI和XbaⅠ酶切鉴定证实目的基因正确插入载体pcDNA3.1,命名为 pcCFP10 ;pcCFP10转化的CHO细胞RNA提取物中 ,RT PCR扩增出 30 0bp大小的条带 .肌注免疫BALB/c小鼠 ,ELISA检测小鼠血清中相应抗体平均滴度为 1∶4 ,0 0 0 .结论 :以CFP10的编码基因为基础的真核表达质粒的构建成功 .; 范雄林王丽梅师长宏李元柏银兰薛莹徐志凯; 关键词：CFP10 基因疫苗真核表达载体

结核分枝杆菌furA基因片段的克隆、表达和分离纯化被引量：3: 2004年; 目的 :获得结核分枝杆菌furA基因片段并高效表达、纯化 .方法 :用PCR技术从MTB毒株H37Rv DNA中扩增出相应大小的DNA片段 ,将片段与pGEM T easy载体连接后测序 .将测序正确的furA按照BamHⅠ和HindⅢ酶切位点克隆入原核表达载体pRSET A ,将连接产物转化入E .coliBL2 1,挑出阳性克隆 ,IPTG诱导表达重组的 (His) 6融合蛋白 .对重组融合蛋白通过镍柱进行纯化 .结果 :PCR获得的furA序列与Genbank报道的一致 (为 4 5 3bp) .重组载体在E .coliBL2 1中以可溶形式高效表达 ,融合蛋白经SDS PAGE和Westernblot分析 ,在Mr 为 2 3.0× 10 3 处有特异的蛋白条带 ,目的蛋白表达量占菌体总蛋白量的 10 % ,重组蛋白经镍柱进行纯化后 ,得到了高纯度的FurA融合蛋白 .结论 :成功克隆结核分枝杆菌furA基因片段 ,并在E .coliBL2 1中高效表达 ,亲和层析纯化后获得高纯度FurA融合蛋白 .; 高雪薛莹姜泓柏银兰师长宏张海李元徐志凯; 关键词：分枝杆菌结核克隆纯化

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