曹守春
- 作品数：69 被引量：311H指数：8
- 供职机构：中国食品药品检定研究院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学理学更多>>
- 狂犬病病毒减毒株CTN-181毒力减弱的分子基础研究被引量：2
- 2013年
- 目的了解CTN-181弱毒株的全长基因结构及其毒力减弱的分子基础。方法将CTN-181的全长基因进行测序并与4株减毒疫苗株和5株街毒株进行全序列基因比对,与CTN-181株的母株CTN-1进行不同区段蛋白基因中的替换位点比较。结果全长基因比较显示,CTN-181株与其他9株狂犬病病毒的核苷酸和氨基酸同源性为81.4%～93.3%和86%～97%。与CTN-1母株比较,CTN-181株存在12处核苷酸和7处氨基酸突变,氨基酸突变位点发生在N157(N→S),M187(Q→P),G276(L→V),G333(R→Q),G336(N→D),G389(E→K)和L1061(S→N)。结论 CTN-181存在7处氨基酸突变,可以认为是其毒力减弱的分子基础,其中在G蛋白内的4个位点的氨基酸突变最为重要。
- 石磊泰张晓焕俞永新刘景华曹守春李加吴小红董关木
- 关键词：全基因组序列毒力相关基因
- SARS-CoV-2重组载体疫苗的研究进展被引量：1
- 2021年
- 重症急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)的全球传播对人类生命健康造成了巨大威胁。目前已有多种类型的疫苗在全球范围内获批使用,以阻止疫情蔓延。其中重组载体疫苗起到了非常重要的作用,截至2021年5月25日,已有4款载体疫苗在不同国家获批使用,17款疫苗正在进行临床试验以及40余款疫苗处于临床前研究阶段。本文就目前全球SARS-CoV-2重组载体疫苗的研究现状作一综述。
- 李兴航曹守春杨晓明(审校)
- 关键词：载体疫苗腺病毒载体
- 脊髓灰质炎病毒Sabin2株结构蛋白VP1在昆虫杆状病毒表达系统中的表达
- 2011年
- 目的在昆虫杆状病毒表达系统中表达脊髓灰质炎病毒(Poliovirus,PV)Sabin2株结构蛋白VP1。方法从Sabin2疫苗原液中RT-PCR扩增PV结构蛋白VP1基因,克隆入pFastBac1质粒,转化含杆状病毒穿梭载体Bacmid的E.coliDH10Bac,获得重组杆状病毒表达质粒Bacmid-VP1,在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rBac-VP1。将第2代rBac-VP1感染sf9细胞,间接免疫荧光法检测VP1蛋白的表达,并优化感染条件。结果重组杆状病毒表达质粒Bacmid-VP1转化子可扩增出3 203 bp的目的片段;第2代rBac-VP1的滴度为6×107 pfu/ml,其感染的sf9细胞在荧光显微镜下可见绿色荧光,以不同MOI的rBac-VP1感染sf9细胞,VP1蛋白表达量差别不大,而在96 h内,随着感染时间的延长,VP1蛋白的表达量逐渐升高。结论在昆虫杆状病毒表达系统中成功表达了PV Sabin2株结构蛋白VP1,为脊髓灰质炎亚单位疫苗的研制奠定了基础。
- 刘金花董关木安祺曹守春孔艳
- 关键词：脊髓灰质炎病毒VP1蛋白杆状病毒
- 狂犬病疫苗效价测定改良NIH法建立及应用
- 2023年
- 目的按照动物试验3R原则,建立改良NIH法(modified NIH,M-NIH)即单一稀释法检测狂犬病疫苗效价,替代传统的NIH法。方法通过比较单一稀释度的待检疫苗与第八批狂犬病疫苗效力试验用国家标准品的小鼠保护率,建立狂犬病疫苗效价测定的改良NIH法,并对该方法进行重复性、准确性及适用性验证。采用M-NIH法和NIH法对52批狂犬病疫苗进行比较研究,再联合9家实验室验证共计247批次,使用Kappa系数和Mcnemar-Bowker检验评价两种方法的一致性。并采用3家企业生产的狂犬病疫苗,进行适用性验证。对M-NIH法获批准后近4年来应用于狂犬病疫苗批签发检验做回顾性分析。结果52批次狂犬病疫苗效价测定的两种方法比较研究结果显示,两种方法的符合率为92.3%(Kappa=0.82,P<0.01);247批次扩大验证结果表明两种方法的符合率为80.2%(Kappa=0.54,P<0.01)。采用M-NIH法测定标准品保护率时,实验室内变异系数为21.7%,实验室间变异系数为23.4%。3家企业批签发狂犬病疫苗适用性验证结果表明M-NIH重复性检测结果与NIH结果符合率为100%。近4年来批签发机构采用M-NIH法抽检820批狂犬病疫苗效价,合格率为93.8%;M-NIH不合格批次最终经NIH法测定后,合格率合计为99.8%。结论建立了改良NIH法。该方法获得批准后用于狂犬病疫苗的效价检测,大大减少了动物使用量,提高了狂犬病疫苗的批签发效率。
- 吴小红曹守春石磊泰王云鹏赵丹华李加李玉华
- 关键词：人用狂犬病疫苗
- 亚胺吩嗪类化合物作为狂犬病病毒抑制剂的用途
- 本发明属于医药技术领域。特别地，本发明涉及具有式(I)结构的亚胺吩嗪类化合物用于预防和/或治疗狂犬病病毒感染或由狂犬病病毒感染所导致的疾病(例如，狂犬病)的用途。本申请还涉及亚胺吩嗪类化合物用于制备预防和/或治疗狂犬病病...
- 王佑春谢会刘强曹守春黄维金聂建辉赵晨燕
- 文献传递
- 狂犬病病毒核蛋白及糖蛋白在杆状病毒表达系统中的共表达及鉴定
- 2013年
- 目的利用杆状病毒表达系统共表达狂犬病病毒CTN-1V株核蛋白（nucleoprotein，NP）及糖蛋白（glycoprotein，GP）。方法RT-PCR分别扩增CTN．1V株病毒GP、NP编码区基因，分别依次克隆入转移质粒pFastBacDual的PⅢ区及P，。区构建杆状病毒重组转移质粒P—NG，转化DHl0BacE．coli感受态细胞获得重组穿梭质粒A-NG，转染Sf9细胞获得重组杆状病毒Bac-NG，高效表达目的蛋白NP、GP，进行Westernblot分析。结果重组杆状病毒穿梭质粒A-NG经PCR鉴定证明构建正确；狂犬病病毒NP、GP在重组杆状病毒感染的Sf9细胞中获得正确表达，表达的重组蛋白NP、GP相对分子质量（Mr）约为51x10^3、59x10^-；表达的重组蛋白NP、GP均可与抗RV小鼠血清特异性结合。结论成功共表达狂犬病病毒CTN-1V株NP、GP，表达产物具有良好的抗原性，为狂犬病病毒基因工程疫苗及诊断试剂的研究奠定了基础。
- 李加曹守春石磊泰吴小红刘景华王云鹏邹剑俞永新董关木
- 关键词：狂犬病病毒核蛋白糖蛋白杆状病毒表达系统
- 狂犬病疫苗株病毒aG株全基因序列测定及特征分析被引量：2
- 2013年
- 对我国狂犬病疫苗生产株aG株进行全基因序列测定分析,为完善aG株毒种的质量控制提供数据支持。将aG株病毒全基因组RNA分成8段进行RT-PCR分段扩增,其中基因组5′末端采取5′RACE方法,将PCR扩增产物分别克隆入pGEM-T载体中,测定序列并拼接获得病毒全基因序列;用DNAStar软件包中的相应软件对基因全序列进行分析,并与国内外主要狂犬病疫苗生产株进行基因同源性分析和主要抗原位点比较。aG株病毒基因组序列全长11 925bp(GenBank登录号为JN234411),属基因Ⅰ型狂犬病病毒;各疫苗株生物信息学分析表明,各株病毒存在同源性差异。本研究获得了aG株病毒全基因组序列,对aG株基因特征进行了分析并将其与国内外疫苗株进行了比较,为完善其质量控制提供了参考和数据支持。
- 李加曹守春石磊泰吴小红刘景华王云鹏唐建蓉俞永新董关木
- 关键词：狂犬病病毒全基因组
- 金黄地鼠作为狂犬病暴露后疫苗免疫动物模型的应用被引量：4
- 2016年
- 目的以金黄地鼠作为动物模型,评价不同种类狂犬病疫苗在暴露后免疫中的保护效果。方法将不同类型狂犬病疫苗分别免疫两组金黄地鼠,一组为未感染过病毒的健康动物(Pr EP),另一组为感染过CVS株的动物(PEP),免疫后不同时间点通过心脏穿刺采血,RFFIT法测定血清抗体效价。对PEP组动物同时观察其死亡情况,分析各动物抗体水平与保护效果的相关性。另以4.0 lg MICLD_(50)/ml的CVS狂犬病固定毒株感染金黄地鼠左腿腓肠肌,每只0.2 ml,6 h后开始以不同类型狂犬病疫苗按0、3、7、14 d程序免疫,观察疫苗对动物的保护效果。结果暴露后免疫组(PEP)的血清抗体可在第4天出现阳性,第5天达100%,以后持续维持较高水平。未感染的暴露前免疫(Pr EP)动物的抗体水平从第4天开始一直较PEP组低。但PEP组中不同疫苗免疫的各动物中均观察到免疫后第4天及以后的抗体水平与最终该动物的发病死亡无相关性。高效价人用狂犬病疫苗的免疫保护率为80%,但疫苗原液分别稀释2倍和5倍后,保护率分别降至30%和20%。疫苗加PIKA佐剂作相同倍数稀释后,保护率可达80%,疫苗联合使用免疫球蛋白,暴露后保护率可达100%,未免疫的感染对照组动物的死亡率在90%左右。结论以金黄地鼠作为狂犬病暴露后免疫的动物模型可对不同质量疫苗作出有效评价。疫苗的效价与暴露后免疫中的保护作用有相关性,疫苗联合使用免疫球蛋白注射是最佳的暴露后免疫方案;PIKA佐剂在降低疫苗抗原量的同时提高了疫苗的保护作用;暴露后抗体水平未显示与保护效果具有相关性。
- 汤重发石磊泰俞永新李玉华曹守春李加吴小红王云鹏
- 关键词：狂犬病病毒金黄地鼠暴露后免疫佐剂体液免疫
- 汉滩病毒84Fli株DNA疫苗诱导小鼠免疫应答的初步研究被引量：2
- 2007年
- 为了加强我国病毒性出血热的防治,本研究将汉滩病毒84Fli株核蛋白S和糖蛋白M编码片段分别克隆至pcDNA3.0载体,构建了pcDNA3/84S和pcDNA3/84M重组质粒,等量混合采用肌肉注射途径免疫C57BL/6小鼠,免疫3次,每次间隔2周,同时与双价出血热病毒灭活疫苗进行对比。ELISA及免疫荧光(IFA)分别检测小鼠血清中汉滩病毒核蛋白及糖蛋白特异性抗体,流式细胞仪和ELISPOT方法分析小鼠免疫后的细胞免疫水平。微量中和试验检测小鼠血清抗体的的中和活性。结果显示,DNA疫苗免疫组C57BL/6小鼠在初次免疫2周后即能检测到汉滩病毒核蛋白与糖蛋白的特异性抗体,与灭活疫苗组相比,重组质粒诱导的抗体滴度高,产生时间早,产生的抗体具有中和活性;同时可诱导产生特异性细胞免疫应答。研究表明,汉滩病毒pcDNA3/84S和pcDNA3/84M重组质粒能有效刺激小鼠产生特异性体液免疫和细胞免疫应答。
- 刘峰张全福刘琴芝曹守春李川梁米芳李德新
- 关键词：汉滩病毒DNA疫苗体液免疫细胞免疫
- 高效液相色谱仪自动进样器校准方法及不确定度评定被引量：6
- 2013年
- 建立高效液相色谱仪自动进样器的校准方法,并对其测量不确定度进行评定。参考欧洲医药管理局《质量控制文件》提供的方法对液相色谱仪自动进样器的进样体积误差、进样残留和进样重复性建立校准方法,经评定得进样体积误差的相对扩展不确定度为1.8%。高效液相色谱仪自动进样器校准方法及不确定度评定方法的建立,为高效液相色谱仪自动进样器的校准提供依据。
- 王冠杰季士委田利曹守春邹健杨洋
- 关键词：液相色谱仪自动进样器不确定度评定
