施焕敬
- 作品数：7 被引量：10H指数：2
- 供职机构：暨南大学生命科学技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生理学自动化与计算机技术更多>>
- 构建的Flt3L胞外域原核表达载体在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 2008年
- 目的:构建含组氨酸标签的FMS样酪氨酸激酶3配体(Fms-like tyrosine kinase 3 ligand,Flt3L)胞外域蛋白的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达。方法:依据Flt3L基因序列设计引物,以RT-PCR的方法从小鼠脾脏总RNA中克隆Flt3L基因并构建其胞外域原核表达载体,测序鉴定后在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中诱导表达,用免疫印迹鉴定。结果:克隆到Flt3L编码区全长序列,经DNA测序证明与已报道的序列相同;构建羧基端带有His6标签的Flt3L胞外域蛋白的原核表达载体,转化大肠杆菌后SDS-PAGE分析显示在BL21(ED3)中获得较高表达;免疫印迹分析表明IPTG诱导后表达的Flt3L胞外域蛋白的相对分子质量(Mr)为19 000,与理论值相符,此蛋白与抗His6标签的抗体发生特异性反应。结论:成功克隆Flt3L基因,构建其胞外域蛋白的原核表达载体,并在大肠杆菌中获得表达。
- 卢宏松徐丽慧施焕敬韩捷何贤辉
- 关键词：原核表达组氨酸标签
- 抗人PD-1高亲和力抗血清的制备及其在PD-1免疫印迹分析中的应用
- 2008年
- 利用纯化的可溶性人PD-1胞外域(sPD-1)蛋白为免疫原免疫小鼠,获得抗血清.免疫印迹显示该抗血清与原核表达的sPD-1有特异性反应,但与某些菌体蛋白存在交叉反应.经菌体蛋白吸附法处理后,交叉反应明显减弱.以商业化抗人PD-1抗体和小鼠sPD-1抗血清分析经亲和层析富集的活化的Jurkat T细胞表达的PD-1,只有自制的抗血清鉴定到特异反应条带,其表观分子质量为49 ku.
- 施焕敬徐丽慧韩捷卢宏松何贤辉
- 关键词：JURKAT抗血清免疫印迹
- 棉酚对小鼠淋巴细胞体外增殖和凋亡作用的影响被引量：4
- 2009年
- 研究棉酚(gossypol)对小鼠淋巴细胞体外增殖和凋亡作用的影响及作用机制。分离小鼠淋巴结细胞,以CFSE染色,加入佛波醇酯(PDB)和离子霉素(Ion)进行刺激,以流式细胞仪分析棉酚对淋巴细胞增殖率的影响;以MTS检测淋巴细胞的增殖情况;以Annexin V-PE染色分析细胞凋亡;用Hoechst33342染色观察细胞核形态。CFSE染色分析显示,棉酚对PDB+Ion诱导的小鼠淋巴细胞增殖,具有明显的抑制作用(P<0.01),且呈剂量依赖性。以MTS分析细胞增殖情况,也获得相似的结果。终浓度为4、8和16μmol/L的棉酚处理8 h后的细胞凋亡率分别为4.39%、6.57%和12.14%,PDB+Ion对照组凋亡率为2.13%。凋亡率随着棉酚作用时间的增加而上升,存在时间和剂量依赖关系。高浓度棉酚作用后大量细胞核呈现染色质固缩、核碎裂和致密浓染等凋亡特征。研究表明,棉酚能有效抑制小鼠淋巴细胞体外增殖和诱导其发生凋亡,并呈现出时间和剂量依赖关系。
- 许文彬卢宏松徐丽慧施焕敬刘春永何贤辉
- 关键词：棉酚淋巴细胞增殖凋亡流式细胞术
- 棉酚对Jurkat T细胞增殖与凋亡的影响被引量：2
- 2008年
- 研究棉酚(gossypol)对JurkatT细胞增殖和凋亡的影响及可能机制。将不同浓度的棉酚作用于JurkatT细胞,用MTS比色法检测细胞存活率;以膜联蛋白V-PE染色分析细胞凋亡;用Hoechst33342染色观察核形态;用荧光染料Mitocapture结合流式细胞术和激光共焦显微镜检测线粒体跨膜电位变化。结果显示棉酚作用JurkatT细胞24h、48h、72h,其IC50值分别为77.2ìmol/L、57.3ìmol/L、23.3ìmol/L,对细胞的抑制作用与药物存在时间-剂量依赖关系;终浓度为8、16、32ìmol/L的棉酚处理24h后的细胞凋亡率分别为5.30%、15.20%、51.19%,对照组凋亡率为3.43%;高浓度棉酚作用后大量细胞核呈现染色质固缩、核碎裂和致密浓染等凋亡特征;随着浓度增加细胞线粒体跨膜电位明显降低。研究表明棉酚能有效抑制JurkatT细胞增殖和诱导其发生凋亡,并呈现出时间-剂量依赖关系,其诱导凋亡的作用可能依赖于线粒体途径。
- 许文彬徐丽慧卢宏松施焕敬何贤辉
- 关键词：棉酚JURKATT细胞细胞增殖凋亡流式细胞术
- 分泌型Survivin真核表达载体的构建及其在HeLa细胞中的表达被引量：1
- 2008年
- 目的:构建含6个组氨酸标签(His6)的小鼠存活素(Survivin)融合蛋白的真核表达载体,及其在真核细胞中的表达。方法:根据小鼠Survivin序列设计引物,经过RT-PCR克隆Survivin的cDNA并进一步构建分泌型Sur-vivin的真核表达载体,经测序鉴定后在大肠杆菌中扩增在HeLa细胞中表达;以金属离子螯合层析富集,再用免疫印迹法鉴定。结果:克隆到Survivin编码区全长序列,经DNA测序后证明与已报道序列相同。构建氨基端融合小鼠IL-2信号肽,羧基端带有His6标签的Survivin融合蛋白的真核表达载体,在HeLa细胞中转染成功并且表达;细胞上清经HisTrap HP柱层析富集后,进行免疫印迹分析,表明该融合蛋白以分泌型方式在HeLa细胞中表达。结论:成功克隆Survivin的cDNA,并构建其分泌型真核表达载体。
- 韩捷施焕敬徐丽慧卢宏松何贤辉
- 关键词：存活素真核表达分泌型肿瘤相关抗原
- 分子佐剂GM-CSF、MIP-1α和黑素瘤DNA疫苗的构建及鉴定
- 目的: 恶性黑素瘤(简称黑素瘤),是来源于黑素细胞的恶性肿瘤。由于包括TRP2在内的多种黑素瘤相关抗原的不断发现,以及部分黑素瘤患者中发现肿瘤自发消退现象表明机体免疫系统能够清除肿瘤细胞,该肿瘤已被作为肿瘤免疫治疗的模式...
- 施焕敬
- 关键词：黑素瘤分子佐剂粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子巨噬细胞炎症蛋白-1ΑDNA疫苗
- 文献传递
- 负载SIV抗原肽的中国恒河猴Mamu-B*1703可溶性单体及其四聚体的制备和鉴定被引量：2
- 2009年
- 目的:制备负载SIV抗原肽的中国恒河猴Mamu-B*1703可溶性单体及其四聚体。方法:以含Mamu-B*1703重链cDNA序列的pMD19-T克隆为模板,通过PCR的方法克隆Mamu-B*1703重链基因,进而构建羧基端融合生物素化酶BirA底物肽(BSP)的Mamu-B*1703重链胞外域融合蛋白的表达载体,并在大肠杆菌中获得表达。β微球蛋白、SIV抗原肽共存时,通过稀释法复性可溶性Mamu-B*1703单体,经生物素化并纯化后与荧光素标记的链亲和素按4∶1的比例混合形成四聚体。结果:ELISA检测显示获得具有正确构象的负载SIV抗原肽的Mamu-B*1703四聚体。结论:印度恒河猴Mamu-B*1701特异性抗原肽IW9,与中国恒河猴的Mamu-B*1703相结合形成可溶性Mamu-B*1703/IW9单体和四聚体。
- 王笑迎欧阳东云何贤辉徐丽慧施焕敬高琦郭贺
- 关键词：恒河猴猴免疫缺陷病毒四聚体
