目的观察肿瘤坏死因子(TNF-α)对急性肺损伤动物模型外周血骨髓间充质干细胞(MSCs)数量的影响。方法 SD大鼠分为对照组、模型组和干预组。对照组给予生理盐水气道滴入;模型组给予内毒素(LP S 5 mg/kg)气道内滴入;干预组气道内滴入LPS同时英夫利昔(10 mg/mL)腹腔注射5 mg/kg。5 h后处死动物取外周血,检测TNF-α含量及成纤维细胞集落形成单位(CFU-F)数。成骨、成脂诱导检测其分化特性。结果模型组大鼠外周血TNF-α水平较对照组显著升高(354.0±82.4 vs 38.0±21.6,P<0.05),而较干预组显著降低(206.5±64.1 vs 354.0±82.4,P<0.05)。模型组大鼠外周血中培养出的CFU-Fs明显高于对照组(3.60±1.47vs 1.40±2.83,P<0.05)及干预组(3.60±1.47 vs 1.70±1.72,P<0.05);外周血骨髓MSCs成骨、成脂诱导后染色均阳性。结论急性肺损伤时,外周血中增加的TNF-α含量对骨髓MSCs动员及归巢均有促进作用。
目的 研究PPAR-γ、PDGF-βR及FAK在肺动脉平滑肌细胞迁移中的分子调控机制。方法 分离大鼠肺动脉平滑肌细胞,培养至3-7代细胞用于实验。分为4组,CON组:常规培养细胞;PDGF-BB组:细胞同步化后加入PDGF-BB(20 ng/ml),刺激1 h后裂解细胞;Y15组:细胞同步化后加入PDGF-BB(20 ng/ml)预刺激1 h,再加入FAK抑制剂Y15(10 μmol/L)刺激2 h后裂解细胞;ROSI组:细胞同步化后加入罗格列酮(10 μmol/L)刺激1 h,再加入PDGF-BB刺激1 h后裂解细胞。裂解各组处理细胞,Western blot检测各组p-PDGF-βR、p-FAK(Tyr397)水平;划痕实验及Transwell方法比较细胞迁移能力。结果 PDGF-BB组细胞迁移能力较CON组明显增强(77.3%± 4.2% vs 61.3%± 3.5%, P <0.05),p-PDGF-βR、p-FAK(Tyr397)水平提高(2.2 ± 0.12 vs 0.93 ± 0.11;1.07 ± 0.08 vs 0.39 ± 0.02, P <0.05)。Y15组细胞迁移能力较PDGF-BB组明显降低(72.7%± 4.7% vs 77.3%± 4.2%, P <0.05),p-PDGF-βR无明显变化(2.0 ± 0.10 vs 2.2 ± 0.12, P >0.05),p-FAK(Tyr397)水平降低(0.48 ± 0.09 vs 1.07 ± 0.08, P <0.05)。ROSI组细胞迁移能力较Y15组差异无统计学意义(75.3%± 4.04% vs 72.7%± 4.70%, P >0.05),p-PDGF-βR水平降低(1.25 ± 0.10 vs 2.0 ± 0.10, P <0.05);p-FAK(Tyr397)水平提高(0.52 ± 0.07 vs 0.48 ± 0.09, P <0.05);而与PDGF-BB组比较,ROSI组细胞迁移能力(77.3%± 4.2% vs 75.3%± 4.04%)及p-PDGF-βR(2.2 ± 0.12 vs 1.25 ± 0.10)、p-FAK(Tyr397)水平(1.07 ± 0.08 vs 0.52 ± 0.07)均显著降低( P <0.05)。Transwell迁移小室实验结果同划痕实验结果。结论 PPAR-γ/PDGF-βR/FAK(Tyr397)通路,可能是抑制肺动脉平滑肌细胞迁移机制之一。
目的 探讨AMPK激动剂二甲双胍对脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤的保护作用及可能的机制。方法 6-8周雄性BALB/c小鼠15只随机分为3组:对照组(气管内滴注无菌PBS 60 μl),LPS模型组(LPS组,气管内滴注1 mg/ml LPS 60 μl,作用24 h),二甲双胍治疗组(Met+LPS组,于滴注LPS前30 min腹腔注射二甲双胍250 mg/kg,再气管内滴注LPS作用24 h)。观察小鼠肺组织病理学改变,肺泡灌洗液中细胞总数及中性粒性细胞数变化,测定肺组织内髓过氧化物酶(MPO)活性。Western blot法检测肺组织中AMPK、P-AMPK(Thr172)及PGC1α表达的变化。结果 与对照组比较,LPS模型组小鼠组织病理学显示,肺泡壁结构明显破坏,炎性细胞浸润及组织出血增加,肺泡灌洗液中细胞总数及中性粒细胞比例明显增高( P <0.01),肺组织内MPO活性显著升高( P <0.01),PGC1α表达减少( P <0.01),P-AMPK(Thr172)水平下降。与LPS模型组比较,二甲双胍治疗组小鼠肺泡壁破坏减轻,炎性细胞浸润及组织出血减轻,髓过氧化物酶活性下降( P <0.01),P-AMPK水平( P <0.01)及PGC1α( P <0.05)的表达明显增加。结论 本研究提示AMPK激动剂二甲双胍对LPS诱导急性肺损伤具有一定保护作用,这种保护作用可能与PGC1α上调有关。
