张文韬
- 作品数：8 被引量：8H指数：2
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- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 猴B病毒被膜糖蛋白gC的原核表达及诊断价值评价被引量：1
- 2011年
- 目的:原核表达猴B病毒糖蛋白gC胞外区片段,评价其在猴B病毒血清学检测中的特异性和敏感性,为猴B病毒检测奠定基础。方法:利用PCR方法扩增gC胞外区基因片段,同时合成该片段的优化密码子序列,将其插入表达载体pET-28b(+)形成重组质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3)并进行诱导表达;纯化蛋白先以Western印迹进行验证,再以ELISA方法和标准阳性、阴性血清评价其诊断价值。结果:直接从病毒DNA模板上获得的基因片段未能表达,而优化后的基因片段表达水平较高,表达蛋白的相对分子质量约为48×103,为包涵体形式,占菌体总蛋白的30%左右;Western印迹显示,重组蛋白能与猴B病毒阳性血清和His单克隆抗体发生免疫反应;34份标准阳性血清和25份阴性血清的ELISA检测结果显示,重组蛋白的敏感性和特异性分别为94.1%(32/34)和100%(25/25)。结论:利用原核表达系统制备的gC胞外区重组蛋白,可作为猴B病毒血清学检测抗原,其特异性和敏感性都较好。
- 王代平叶华虎董罡张文韬陈旖白杰英胡娟峰曾林聂奎
- 关键词：原核表达血清学诊断
- IL-4对肝片吸虫感染诱导的巨噬细胞中脂肪酸结合蛋白2分布的影响被引量：1
- 2012年
- 为阐明小鼠感染肝片吸虫后巨噬细胞中脂肪酸结合蛋白2（FABP2）的分布，采用肝片吸虫囊蚴为感染源，经口分别感染雌性BALB／c野生型（wT）及其IL一4单抗处置小鼠，在运用特异性PCR鉴定成功感染小鼠后获取巨噬细胞，并设立人工巯基醋酸盐诱导巨噬细胞对照组进行体外培养。用荧光定量PCR检测选择性激活巨噬细胞的标记蛋白Relma、Yml和Ar—ginasel以确定其激活状态。采用特异性抗体对所获取的巨噬细胞细胞质染色后用共聚焦显微镜摄取不同时间点从不同小鼠体内获取的巨噬细胞染色后的图片。野生型BALB／c巨噬细胞中Relma、Yml和Arginasel均大量表达；IL-4单抗处置BALB／c小鼠和巯基醋酸盐诱导小鼠中巨噬细胞中的Relma、Yml和Arginasel的表达量较野生型小鼠中的极显著或显著下降。FABP2在FeMφ中并不分布于细胞质膜下，而是呈点状广泛分布于细胞质中，其荧光强度在12～24h间呈上升趋势，在24～48h间却呈下降趋势。
- 王晶张文韬王豪举郭智莉周雪梅周容琼周作勇罗洪林
- 关键词：肝片吸虫巨噬细胞
- 猴B病毒囊膜蛋白gC基因密码子优化及其在大肠埃希菌中的表达被引量：2
- 2011年
- 根据猴B病毒E2490标准株gC基因,选择大肠埃希菌偏好的密码子,设计合成了1 200个碱基,共编码400个氨基酸,测序证实后,克隆入pET-28b(+)载体,转化至大肠埃希菌BL21(DE3),在IPTG诱导下获得50 ku以包涵体形式表达的gC重组蛋白。Western blot分析表明表达产物能够被猴B病毒标准阳性血清识别。间接ELISA检测表明,重组蛋白与人单纯疱疹病毒1型、2型阳性血清无交叉反应。本研究为进一步建立检测猴B病毒抗体间接ELISA方法奠定了基础。
- 王代平叶华虎曾林白杰英董罡张文韬聂奎
- 关键词：基因合成
- 猴B病毒囊膜糖蛋白gD基因的克隆表达及间接ELISA方法的建立
- 猴B病毒/(Monkey B Virus/)属于α-疱疹病毒亚科,单纯疱疹病毒属成员,是一种以猴/(特别是猕猴属/)为自然宿主的动物源性病原体。猴B病毒在其自然宿主中的感染率大于60/%,但多呈隐性感染。该病毒感染非自然...
- 张文韬
- 关键词：克隆ELISA
- 文献传递
- 猴B病毒囊膜糖蛋白gD基因的克隆表达及其诊断价值评价被引量：3
- 2012年
- 目的克隆表达猴B病毒囊膜糖蛋白gD胞外区片段,评价其诊断价值,为猴B病毒快速鉴别诊断技术建立和疫苗研制奠定基础。方法利用PCR扩增gD胞外区基因片段,测序正确后插入原核表达载体pET28b(+)。重组质粒转化至大肠杆菌(BL21)DE3并进行诱导表达。纯化蛋白首先以His抗体和B病毒阳性血清进行鉴定,再用ELISA评价其诊断价值。结果目的蛋白为包涵体,占菌体总蛋白的35%,分子量约为48kD。Western印迹显示,重组蛋白能与猴B病毒阳性血清和His单克隆抗体发生免疫反应;32份标准阳性血清和30份阴性血清的ELISA检测结果显示,该蛋白的检出率分别为93.75%和100%。结论重组猴B病毒囊膜糖蛋白gD胞外区片段具有良好的反应原性,可作为猴B病毒血清学检测的候选抗原。
- 张文韬董罡袁菊芳马兰芝张广州曾林叶华虎聂奎
- 关键词：血清学检测
- IL-4受体阻断对小鼠急性感染肝片吸虫后肝脏单核细胞悬液中细胞因子的影响被引量：1
- 2013年
- 本研究旨在探索肝片吸虫感染小鼠急性期肝脏单核细胞悬液中细胞因子表达模式及其原因。试验将小鼠分为4组,分别对感染抗体处置组、感染非抗体处置组、抗体处置非感染组和非抗体处置非感染组的肝脏单核细胞培养上清液中IL-4、IL-5、IL-13及IFN-γ进行测定;同时也对肝脏中IL-4及IL-12P40mRNA水平进行荧光定量PCR检测。结果显示,IL-4和IL-5的表达模式相似。在非感染状态下,无论是否进行抗体处置,两者都处于较低表达水平。在感染状态下,两者在非抗体处置小鼠中的表达显著高于抗体处置组(P<0.05)。IL-13与IL-4及IL-5的表达差异在于感染并用抗体处置后,小鼠肝脏单核细胞中的IL-13仍有较高水平表达。IFN-γ的表达量在感染后有所增加,但在有无抗体处理间无显著差异(P>0.05)。mRNA检测结果显示,在非感染状态下,抗体处置后的IL-4mRNA水平显著低于非抗体处置组(P<0.05)。感染后非抗体处置组小鼠中IL-4mRNA水平极显著高于抗体处置组(P<0.01),同时也极显著高于非感染非抗体处置组(P<0.01)。IL-12P40mRNA的水平在感染状态下,抗体处置组的IL-12P40mRNA虽较非抗体处置组低,但无显著差异(P>0.05)。但感染后非抗体处置组的IL-12P40mRNA水平均极显著高于感染组抗体处置和非抗体处置组(P<0.01)。本试验结果表明,IL-4Rα对肝片吸虫感染急性期IL-5和IL-4的表达极其重要,但对IL-13及IFN-γ的影响较小。
- 罗洪林王豪举张文韬郭智莉周雪梅周容琼周作勇
- 关键词：肝片吸虫细胞因子
- 小鼠感染肝片吸虫早期IL-4/IFN-!及M2巨噬细胞标记分子的变化被引量：1
- 2013年
- 为弄清肝片吸虫感染早期的主要细胞免疫类型及选择性激活巨噬细胞(M2或AAMΦ)标记分子的变化,本试验采用肝片吸虫囊蚴为感染源,经口分别感染雌性BALB/c野生型小鼠,运用特异性PCR鉴定成功感染小鼠后用间接ELISA对腹腔中IL-4和IFN-!的水平进行测定,并对细胞因子IL-4、转录因子GATA3和M2的标记蛋白Relm"、Ym1分子的mRNA进行荧光定量PCR检测。结果显示,在感染后1,3,5,7周,从所获取肝脏组织中扩增的ITS2片段条带清晰,大小正确,测序后确定为肝片吸虫ITS2序列,表明肝片吸虫感染成功。对腹腔中IL-4和IFN-!的水平测定表明感染组IL-4在感染后1,3,5周比对照组的显著增加(P=0.013,P<0.01,P=0.02),但在第7周时无显著差异。IL-4的水平显著高于IFN-!(P=0.011),而在第7周两者间无显著差异;对腹腔中IL-4、GATA3、Relm"和Ym1mRNA水平的测定结果表明,感染后IL-4和GATA3mRNA水平在第3周达到最高峰;于感染后1,3,5,7周,IL-4和GATA3mRNA水平都分别显著高于对照组(IL4:P=0.01,P=0.012,P=0.023,P=0.014;GATA3:P=0.011,P<0.01,P=0.032,P=0.014),但IL-4和GATA3间无显著差异;Relm"和Ym1mRNA水平都分别显著高于对照组(Relm":P<0.01,P<0.01,P<0.01,P=0.011;Ym1:P<0.01,P<0.01,P<0.01,P=0.012),且二者间无显著差异,并随时间推移mRNA水平都呈下降趋势,于第7周达到最低水平。本研究成功利用肝片吸虫-小鼠模型研究蠕虫感染早期细胞免疫类型及M2标记分子的变化,发现在肝片吸虫感染小鼠早期主要引起Th2为主的细胞免疫。IL-4和M2巨噬细胞标记分子Relm"和Ym1在感染后1,3,5,7周都显著增加且具有相似的变化趋势,但Relm"和Ym1在第1周的高表达可能受诸多因素的影响还有待深入研究。
- 罗洪林张文韬郭智莉周雪梅周容琼周作勇
- 关键词：肝片吸虫TH2细胞因子
- IL4对肝片吸虫感染诱导巨噬细胞中脂肪滴分布的影响
- 2013年
- 试验以肝片吸虫囊蚴经口分别感染雌性BALB/c野生型及其IL4单抗处置小鼠,运用特异性PCR鉴定成功感染小鼠后获取巨噬细胞,设立人工巯基醋酸盐诱导巨噬细胞对照组进行体外培养。用荧光定量PCR检测巨噬细胞的标记蛋白Relmα和Ym1以确定其激活状态。将所获取的巨噬细胞的细胞质用特异性抗体染色,并用共聚焦显微镜拍摄不同时间点从不同小鼠体内获取的巨噬细胞染色后的图片。结果发现,Relmα和Ym1基因在IL4单抗处置小鼠和巯基醋酸盐诱导小鼠的巨噬细胞中均表达,但在IL4单抗处置小鼠的表达量显著下降。脂肪滴分布在肝片吸虫诱导的选择性激活巨噬细胞的细胞质中,被染色成绿色且呈圆形。同时发现脂肪滴的分布形式多样,大小不一,既有单个分布也能成蔟分布。
- 谌剑波郭智莉周容琼周作勇张文韬周雪梅罗洪林
- 关键词：肝片吸虫巨噬细胞
