张惠菊
- 作品数：9 被引量：5H指数：1
- 供职机构：南京军区福州总医院更多>>
- 发文基金：福建省农科院青年科技人才创新基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人自身抗原U1RNP 70K的酵母重组分泌表达及斑点免疫金渗滤检测法的建立被引量：1
- 2011年
- 目的人自身抗原U1RNP 70K通常采用组织提取法或原核表达获得。文中用基因克隆技术,在毕赤酵母中表达人U1RNP 70K自身抗原,并建立斑点免疫金渗滤检测法。方法 PCR扩增U1RNP 70K基因,与酵母表达载体pPIC9k重组,构建表达质粒pPIC9k-U1RNP 70K。用电穿孔法转化酵母菌SMD1168,在MD平板上筛选重组克隆,用G418快速筛选高拷贝转化子,阳性克隆经甲醇诱导表达后,培养上清液用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western b lot)鉴定。用所表达的蛋白包被硝酸纤维素膜,建立检测U1RNP抗体的斑点免疫金渗滤法(dot immuogold filtrationassay,D IGFA)。结果 PCR产物约为1300 bp,接近于预期的1314 bp,pPIC9k-U1RNP 70K重组阳性克隆测序结果与Gen-Bank中的U1RNP 70K序列完全一致,双酶切鉴定正确,表达产物U1RNP 70K的相对分子质量约70 000。W estern b lot证实表达产物具有天然U1RNP 70K分子的免疫原性,阴性对照菌无目的条带表达。D IGFA的检测结果与欧蒙酶免疫斑点法的阳性符合率为94.74%(54/57),阴性符合率为98.00%(49/50),总符合率为96.26%(103/107)。2种方法检测结果无统计学显著差异(P=0.617)。结论在毕赤酵母中成功地高分泌表达了U1RNP 70K蛋白,并建立了简便、快速、准确检测U1RNP抗体的DIGFA方法。
- 杨湘越张惠菊徐秀云兰小鹏朱忠勇
- 关键词：自身抗原克隆巴斯德毕赤酵母斑点免疫金渗滤法
- 人自身抗原U1-RNP70K的酵母重组分泌表达及其斑点免疫金渗滤法的建立
- 杨湘越张惠菊徐秀云兰小鹏朱忠勇
- 液态芯片技术在临床实验室诊断中的应用被引量：1
- 2009年
- 液态芯片(liquid chip)是近年来新出现的一种临床应用型生物芯片,是以分类编码微球作为反应及信号检测载体,在液相反应体系中实现蛋白质、核酸等多种生物大分子的同步检测。既保持了生物芯片高通量的特性,又具有高灵敏度、高准确度、高精密度和线性测定范围宽及易操作等特点,在临床实验诊断领域具有广阔的应用前景。现就其基本原理、检测、特点在各临床诊断方面的应用作一综述。
- 张惠菊兰小鹏
- 关键词：液态芯片微球同步检测
- 舍格伦综合征A抗原（SSA60）在巴斯德毕赤酵母中的高效分泌表达及胶体金快速检测方法的建立被引量：1
- 2009年
- 目的在巴斯德毕赤酵母中表达舍格伦综合征A抗原（SSA60）并建立胶体金快速检测方法。方法表达质粒pPIC9k—SSA60用电穿孔法转化酵母菌SMD1168，在MD平板上筛选重组克隆，用G418快速筛选高拷贝转化子，阳性克隆经甲醇诱导表达后，培养上清用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）和斑点免疫金渗滤法（DIGFA）鉴定。结果表达产物SSA60的分子量约60000，高拷贝巴斯德毕赤酵母转化菌的表达水平明显高于低拷贝的，表达量占分泌总蛋白60％以上，产物浓度为600～950mg／L。DIGFA检测85份舍格伦综合征（SS）患者血清和30份正常人血清，抗SSA检测阳性率为95．3％（81／85），特异度为100％（30／30）。与德国欧蒙ENA酶斑点法对比检测的符合率为96．5％（111／115），差异无统计学意义（P〉O．05）。结论SSA60在巴斯德毕赤酵母中获得高效分泌表达，DIGFA简便、快速、准确，可用于临床自身免疫病的诊断。
- 杨湘越兰小鹏徐秀云张惠菊
- 关键词：分泌表达巴斯德毕赤酵母斑点免疫金渗滤法
- 常见生物传感芯片及其应用进展被引量：2
- 2008年
- 生物传感芯片是一类综合了生物芯片和生物传感器的优点的新型生物芯片,在保持传统生物芯片的高通量、可寻址、并行处理等特点的基础上,与生物传感器技术相结合,进一步提高了芯片检测的灵敏度和特异性。常见的生物传感芯片主要有光纤传感芯片、表面等离子体共振传感芯片、热生物传感芯片、压电晶体传感芯片等,可用于各种生物大分子,如蛋白质、核酸等的检测,金属离子的测定,病原体的检测,药物筛选等。
- 张惠菊兰小鹏
- 关键词：生物传感芯片生物传感器蛋白质检测药物筛选
- 自身抗原SSA60在毕赤酵母中的高效分泌表达及胶体金快速检测方法的建立
- 目的在巴斯德毕赤酵母中表达人干燥综合征A抗原60(SSA60)并建立胶体金快速检测方法。方法表达质粒pPIC9k-SSA60用电穿孔法转化酵母菌SMD1168,在MD平板上筛选重组克隆,用G418快速筛选高拷贝转化子,阳...
- 杨湘越兰小鹏徐秀云张惠菊
- 关键词：分泌表达巴斯德毕赤酵母斑点免疫金渗滤法
- 文献传递
- 新型自身抗体联合检测斑点免疫金渗滤法的建立及应用评价被引量：1
- 2009年
- 目的:建立一种简便快速的联合检测自身抗体的斑点免疫金渗滤法(DIGFA)。方法:将多种人自身抗原SmD1、SSA、SSB、Jo-1,采用毕赤酵母重组表达后,纯化抗原点于硝酸纤维素膜上,用来检测血清中相应多种自身抗体,通过胶体金标记的金黄色葡萄球菌A蛋白直接显色,阳性者出现红色斑点。结果:DIGFA检测185份经欧蒙ENA酶斑点法检测为不同自身免疫病患者血清和50份正常人血清,阳性符合率分别为抗SmD191.2%,抗SSA92.8%,抗SSB96.9%,抗Jo-192.6%,阴性符合率为100%(50/50)。与欧蒙ENA酶斑点法对比检测的总符合率为93.0%(172/185),差异无显著性(P>0.05)。结论:DIGFA法简便、快速、准确,可用于临床自身免疫病的联合诊断。
- 杨湘越兰小鹏徐秀云张惠菊
- 关键词：自身免疫疾病自身抗体斑点免疫金渗滤法
- 人自身抗原U1-RNP70K的酵母重组分泌表达及其斑点免疫金渗滤法的建立
- 杨湘越张惠菊徐秀云兰小鹏朱忠勇
- 人自身抗原U1RNP 70K的酵母重组分泌表达及斑点免疫金渗滤法的建立
- 目的 人自身抗原U1RNP 70k通常采用组织提取法或原核表达获得,存在诸多问题.本研究通过基因克隆技术,首次在毕赤酵母中表达人自身抗原U1RNP 70K,并建立斑点免疫金渗滤法.经检索,国内外尚无相关研究报道.方法 P...
- 杨湘越张惠菊徐秀云兰小鹏朱忠勇
- 关键词：自身抗原
