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人IgMμ链恒定区各肽段的基因合成原核表达及免疫原性分析被引量：2: 2013年; 目的全基因合成并原核表达免疫球蛋白M的重链(IgMμ链)及其各肽段,与天然的IgM、IgMμ链和IgG进行免疫原性的分析比较,进一步了解IgMμ链恒定区的结构与功能。方法根据GenBank数据库IgMμ链恒定区(CH1-CH4)的cDNA序列并进行必要的大肠杆菌密码子优化,利用重叠延伸PCR(OE-PCR)体外基因合成人IgMμ链恒定区全长(CH1-CH4)及其截断片段CH1-CH2和CH3-CH4。原核表达并纯化相应的3种融合蛋白PET32a-rMμCH1-CH4、PET32a-rMμCH1-CH2和PET32a-rMμCH3-CH4,并分别免疫BALB/c小鼠。同时设天然人IgM、IgMμ链和IgG免疫组为对照。再用ELISA法检测6种血清,分析比较其抗原性及免疫原性。结果利用OE-PCR方法体外成功合成1 359 bp的IgMμ链(CH1-CH4)全长基因、651 bp的IgMμ链CH1CH2和708 bp的IgMμ链CH3CH4,并构建相应原核表达质粒PET32a-rMμ1-4、PET32a-rMμ1-2和PET32a-rMμ3-4,血清ELISA检测结果显示:①IgG免疫原性>IgM>IgMμ链>rMμ1-4>rMμ1-2>rMμ3-4;②IgM免疫的血清与IgG有较强的交叉反应性,IgG免疫的血清与IgM也存在较强的交叉反应性;IgMμ链和重组μ链的各肽段免疫的血清与IgG均无明显的交叉反应性。结论重组的IgMμ链及其各肽段与天然IgMμ链有着相似的免疫原性和特异性,为基因工程得到抗人IgMμ链单克隆抗体奠定了研究基础。; 张婧章萍萍祁培培吴莉莉刘超潘卫邓松华; 关键词：免疫球蛋白M 酶联免疫吸附测定法单克隆

自噬调控剂对小鼠体内弓形虫增殖的影响被引量：2: 2016年; 目的:研究自噬调控剂对小鼠体内弓形虫增殖的影响。方法:建立弓形虫感染的小鼠模型,分别使用自噬抑制剂巴弗洛霉A1(bafilomycin A1)和自噬诱导剂氯化锂对弓形虫感染小鼠模型进行干预,应用荧光定量PCR检测不同实验条件下弓形虫数量。结果:实验结果表明巴弗洛霉素A1剂量与小鼠体内弓形虫数量呈负相关,而诱导剂氯化锂与小鼠体内弓形虫数量呈正相关。结论:调控宿主细胞自噬可调控体内弓形虫增殖。; 张琼张婧高劲松李万峰汪学龙; 关键词：弓形虫荧光定量PCR 增殖小鼠

人IgG四亚类对噬菌体展示Ig结合蛋白单结构域随机组合文库的体外进化筛选被引量：3: 2012年; 金黄色葡萄球菌蛋白A(Staphylococcal protein A,SpA)和链球菌蛋白G(Streptococcal protein G,SpG)是细菌产生的特异结合宿主抗体的细菌免疫球蛋白结合蛋白(Immunoglobulin(Ig)-binding proteins,IBPs)的代表分子。SpA和SpG均包含由多个序列高度同源的结合结构域重复组成的抗体结合区,各单结构域都具有完全的结合IgG的功能。为研究这些单结构域随机组合能否产生具有新结合特性的组合分子,将SpA的A、B、C、D、E以及SpG的B2、B3共7个单结合结构域随机组合构建成噬菌体展示文库后,应用人IgG1、2、3、4为诱饵分子对该文库进行4轮筛选,获得了SpA天然分子中不存在的单结构域排列组合分子D-C。在筛选过程中,阴性对照噬菌体的逐渐减少、展示两个结构域以上的噬菌体比例不断增多,尤其是D-C组合的选择性富集和其随机连接肽的严格筛选都显示了筛选的有效性和D-C组合的重要性。噬菌体ELISA进一步证实D-C与人IgG四亚类的结合能力远强于天然SpA分子。该研究应用分子进化技术首次获得了一种与人IgG四亚类具有结合优势的新型组合分子D-C,不仅可为IgG纯化、制备、检测等方面的应用提供新的候选分子,还为细菌IBP结构功能的进一步研究提供新的手段。; 祁培培丁莹莹吴莉莉陈秋莉王锦红刘超廖文婷张婧曹洁潘卫; 关键词：噬菌体 IGG 亚类

调控宿主细胞自噬对弓形虫在宿主细胞内增殖的影响被引量：2: 2015年; 目的研究细胞自噬在弓形虫增殖复制中的作用。方法分别用自噬抑制剂Bafilomycin A1及自噬诱导剂氯化锂作用于人胚胎成纤维细胞(HEF),然后将弓形虫(RH株)速殖子悬液分别以虫/细胞2∶1、4∶1、8∶1、16∶1感染HEF细胞,作用1、2、4、8、24、48、96 h。采用吖啶橙(AO)荧光染色和丹酰尸胺(MDC)荧光染色检测HEF细胞自噬情况,采用Giemsa染色检测不同时间点的弓形虫感染复制动力学。结果 AO和MDC荧光染色结果表明自噬抑制剂Bafilomycin A1及自噬诱导剂氯化锂可分别抑制和促进HEF细胞自噬,Giemsa染色结果显示使用自噬诱导剂氯化锂可以促进弓形虫在HEF细胞内的增殖,使用自噬抑制剂Bafilomycin A1可以抑制弓形虫在HEF细胞内的增殖。结论调控宿主细胞自噬可调控弓形虫增殖复制。; 张婧高冬梅汪学龙; 关键词：弓形虫自噬增殖

不同亚类小鼠IgG对SpA和SpG单结构域构成的随机组合噬菌体文库的体外进化研究被引量：1: 2014年; 目的判断不同亚类小鼠IgG Fc段构像及与SpA或SpG的结合特点,采用不同亚类小鼠IgG对SpA和SpG单结构域构成的随机组合噬菌体展示文库进行亲和筛选。方法不同亚类小鼠IgG对噬菌体文库进行亲和筛选,获得具有结合优势的单结构域排列组合,噬菌体ELISA法来比较其与不同亚类小鼠IgG的结合特性,优势组合分子经原核表达蛋白,HRP标记后,ELISA法进一步来比较其与小鼠不同亚类IgG的结合特性。结果小鼠IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3分别经过5、4、5和5轮亲和筛选后,其文库的展示片段大小均为2个domain,表明进化完全。测序分析显示:小鼠IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3筛选得到的具有结合优势组合分子分别是D-D、D-D、A-C和D-C。噬菌体ELISA验证结合优势组合分子对小鼠不同亚类IgG的结合能力;蛋白经HRP标记后的ELISA结果和筛选不完全一致,但其结合强弱具有一致性,均为:IgG3>IgG2a>IgG2b>IgG1。结论得到3种不存在于天然SpA、SpG分子中,分别与不同亚类小鼠IgG具有较强结合作用的新型组合分子D-D、A-C和D-C,为进一步研究IgG Fc段构像及与SpA或SpG的结合特点提供了新的参考分子。; 徐文竹丁莹莹吴莉莉张婧冯娇娇王锦红潘卫邓松华; 关键词：噬菌体文库定向进化亚类

人和羊IgG对噬菌体展示细菌免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合文库的体外进化筛选被引量：1: 2013年; 目的使用人和羊不同物种IgG来诱导噬菌体展示免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合文库进行体外分子进化筛选,判断不同的Fc段构像是否具有特异的结合优势,同时探索其优势结合序列的组合特点。方法通过PCR获得金黄色葡萄球菌蛋白A(SpA)的A、B、D、E和链球菌(C和G群)蛋白G(SpG)的B2、B3各单结构域片段,构建由该6个片段随机组合的噬菌体展示文库。再分别使用人和羊IgG对文库进行体外亲和筛选,以期能够获得具有特异优势结合能力的组合分子,并在Phage ELISA的水平上进一步验证筛选结果。结果成功构建了符合进行体外进化筛选要求的噬菌体展示单结合结构域随机组合文库后,经过6轮人IgG诱导筛选,文库的展示片段大小统一为3个结构域组合分子,E-B-B3;经过6轮羊IgG诱导筛选,文库的展示片段大小也统一为4个结构域组合分子,D-A-B3-B3。Phage ELISA进一步验证最终组合序列的对人和羊IgG的结合能力。结论首次得到两种天然SpA、SpG分子中不存在的,且分别特异地与人和羊IgG具有强结合作用的新型组合分子E-B-B3、D-A-B3-B3,在人和羊IgG的纯化和检测具有很大的应用前景。; 吴莉莉祁培培章萍萍王锦红张婧何婷潘卫邓松华; 关键词：细菌噬菌体免疫球蛋白G 基因文库

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张婧

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