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张坤: 作品数：10 被引量：35H指数：4; 供职机构：石河子大学动物科技学院更多>>; 发文基金：国家科技支撑计划国家科技重大专项兵团博士基金更多>>; 相关领域：农业科学更多>>

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新疆部分地区牛副流感病毒3型的检测与基因分型被引量：5: 2016年; 为调查新疆部分地区牛副流感病毒3型（BPIV3）的感染情况,从新疆石河子、奎屯、库尔勒、沙湾、阿克苏地区的5个规模化奶牛场采集1月龄以内犊牛鼻液206份,其中发病犊牛180份,相同日龄健康犊牛46份,通过采用抗原双抗体夹心ELISA的方法检测牛副流感病毒3型抗原,RT-PCR方法检测牛副流感病毒3型g M基因,并挑选不同地区的8株病毒进行序列分析比较其同源性,进行基因分型。结果：ELISA方法检测的感染率仅为2.43%,PCR方法检测的感染率为35.44%;扩增的M基因序列同源性为97.90%,与参考的BPIV3a亚型毒株的同源性为96.4%~99.6%,将其划分为BPIV3a亚型。本研究结果为新疆地区牛副流感病毒3型感染的防治与疫苗研究奠定了基础。; 倪宏斌剡根强张坤凌晨冯广余宋康; 关键词：ELISA RT-PCR 基因分型

新疆阿克苏地区牛传染性鼻气管炎病毒与牛副流感病毒3型感染的检测被引量：3: 2018年; 为调查阿克苏地区是否存在牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)与牛副流感病毒3型(BPIV-3)的感染,从阿克苏两个规模化奶牛场采集1月龄以内可疑发病犊牛鼻液样品18份,采用双抗体夹心ELISA方法检测两种病毒的抗原,PCR方法检测牛传染性鼻气管炎病毒gD基因,RT-PCR方法检测牛副流感病毒3型的gM基因。结果表明,ELISA方法检测IBRV和BPIV-3的感染率分别为22.22%和0%;PCR方法检测IBRV的感染率为72.22%;RT-PCR检测BPIV-3的感染率为44.44%;同时患有两种病毒的检出率为22.22%。说明在阿克苏地区存在IBRV与BPIV-3的感染,且存在两种病毒的双重感染。; 廉德平倪宏斌凌晨张坤剡根强; 关键词：牛传染性鼻气管炎病毒 ELISA PCR RT-PCR

海岛棉一个成花素类似基因的克隆和生物信息学分析被引量：1: 2011年; 【目的】海岛棉成花素类似基因的克隆及生物信息学分析。【方法】利用RT-PCR技术,从海岛棉中克隆成花素FLOWERING LOCUS T(FT)的同源基因,并进行生物信息学分析。【结果】从新海14号花后15 d纤维中,克隆到一个棉花成花素类似基因FLOWERING LOCUS T-LIKE 1,命名为GbFTL1。该基因的开放阅读框为525 bp,编码174个氨基酸。蛋白比对表明GbFTL1和AtFT的相似性为79.3%,和陆地棉GhFTL1的相似性为99.4%,GbFTL1第37位氨基酸为Asn(N),而GhFTL1第37位氨基酸为Ser(S)。GbFTL1含有FT蛋白亚家族两个关键的氨基酸残基及14个保守氨基酸,系统进化树分析表明GbFTL1属于FT亚家族成员。【结论】GbFTL1基因可能为海岛棉中促进开花的基因之一。; 东锐张坤顾超郑银英崔百明黄先忠; 关键词：成花素海岛棉克隆

致犊牛脑膜炎大肠杆菌新疆分离株ibeB基因的特性分析被引量：6: 2016年; 【目的】分析致犊牛脑膜炎大肠杆菌分离株ibeB基因的分子生物学信息。【方法】以自脑炎死亡犊牛脑组织、肝组织分离鉴定的O161-K99-STa致病性大肠杆菌牛-EN株和牛-EG分离株为材料。根据GenBank中公布的脑膜炎大肠杆菌K1株RS218 ibeB基因序列设计1对引物,采用PCR方法,从分离株中成功克隆ibe B基因,比较分离株ibeB基因与不同来源大肠杆菌ibeB基因的部分生物信息学特性。【结果】分离株ibeB基因序列全长1500 bp,包含1371 bp开放阅读框,共编码457个氨基酸;生物信息学分析显示,牛-EN株与致人脑膜炎大肠杆菌K1 RS218的核苷酸和氨基酸同源性分别为90.5%和96.9%,牛-EG株与大肠杆菌K12的核苷酸和氨基酸同源性分别为99.4%和100.0%;ibeB蛋白为亲水性蛋白,分子质量为50.26 kDa,理论等电点为6.05;该蛋白无跨膜区,但具有信号肽序列;亚细胞定位显示,分泌信号通路位点(SP)占比例为0.939,说明该蛋白属于分泌型蛋白。【结论】从致脑膜炎大肠杆菌分离株中成功克隆ibeB基因,该基因与致人脑膜炎大肠杆菌K1 RS218 ibeB基因有较高的同源性,均有相似的生物学特性,属肠外致病性大肠杆菌。; 凌晨蒋建军宋康张坤师燕霞冯广余倪宏斌朱玲王鹏雁剡根强; 关键词：脑膜炎大肠杆菌克隆生物信息学分析

新疆部分地区致犊牛腹泻轮状病毒的检测及VP6基因序列分析被引量：5: 2016年; 为了调查新疆部分地区规模化奶牛场致犊牛腹泻轮状病毒的感染情况,查明该病毒在致犊牛腹泻中的作用,试验采用双抗体夹心ELISA、RT-PCR的方法检测轮状病毒抗原及VP6基因,并对该基因进行序列分析以比较其同源性。结果表明：各牛场腹泻犊牛粪便的轮状病毒阳性检出率为23.08%-90.91%;在健康犊牛粪便中,仅从石河子某奶牛场检出轮状病毒,检出率为38.89%;RTPCR扩增得到大小为383bp的片段;8份克隆毒株序列的同源性为97.9%,同源性较高。说明新疆部分地区犊牛感染轮状病毒十分普遍,轮状病毒是引起犊牛腹泻的主要病原之一,部分健康犊牛带毒但未发病。; 张坤剡根强王静梅杨铭伟; 关键词：轮状病毒犊牛腹泻 ELISA RT-PCR

水稻成花素Hd3a及其受体分子机制研究进展被引量：1: 2012年; 成花素是有一个控制开花位点的基因FT(FLOWERING LOCUS T)编码的产物,成花素FT是植物开花途径中的关键整合因子。而水稻中的Hd3a(HEADING DATE 3a)是拟南芥FT的同源基因,Hd3a蛋白即是水稻中的成花激素,其在叶片中表达并通过微管组织运输到顶端分生组织,同成花素受体14-3-3蛋白结合,然后又附着到另一种转录因子OsFD1(FLOWERING LOCUS D)上形成成花素激活复合体,使开花基因OsMADS15功能活跃起来。文中对水稻成花素Hd3a及其受体14-3-3蛋白分子作用机制的研究进展进行了综述,为进一步研究植物开花分子生物学提供参考。; 祁军顾超东锐张坤崔百明黄先忠; 关键词：成花素水稻

犊牛脑炎大肠杆菌的分离鉴定及病理组织学观察被引量：4: 2016年; 为确定某规模化牛场犊牛脑炎的病原,从2头病死犊牛的大脑、肝脏中分离到6株革兰阴性杆菌,对分离菌进行生化鉴定、O血清学测定、粘附素及肠毒素的测定、实验动物人工感染、药敏试验、病理组织学观察。结果分离菌符合大肠杆菌的生物学特性,对小白鼠有致病性;O血清型为161,PCR检测分离株均携带STa基因,其中4株携带K99菌毛基因,分离株不携带F41菌毛基因;分离株对氨苄西林、庆大霉素、阿莫西林、环丙沙星、诺氟沙星、恩诺沙星、卡那霉素、氯霉素、四环素、链霉素、复方新诺明、头孢噻吩耐药,对阿米卡星、头孢唑林及新霉素敏感;解剖病死犊牛及人工感染死亡小鼠,大脑及脑干严重出血,脑脊液增多,组织学变化呈现脑组织血管扩张、充血、神经元细胞空泡变性坏死。结果表明,致该奶牛场犊牛脑炎死亡系由产毒性大肠杆菌引起。; 许丹丹杨铭伟古丽孜帕邝佳丽倪宏斌张坤王静梅剡根强; 关键词：大肠杆菌 PCR 病理组织学

新疆部分地区牛传染性鼻气管炎病毒感染的检测与gD基因序列分析: 2017年; 为了调查新疆部分地区牛传染性鼻气管炎病毒的感染情况,试验从新疆石河子、奎屯、库尔勒、沙湾、阿克苏地区的五个规模化奶牛场采集1月龄以内犊牛鼻液126份,其中发病犊牛86份,相同日龄健康犊牛40份,采用双抗体夹心ELISA方法检测牛传染性鼻气管炎病毒抗原,PCR方法检测牛传染性鼻气管炎病毒g D基因,并挑选不同地区的9株病毒进行序列分析比较其同源性。结果表明:ELISA方法检测的感染率为19.84%,PCR方法检测的感染率为47.62%,g D基因序列同源性为77.80%~99.80%。说明新疆部分地区牛传染性鼻气管炎病毒感染较为普遍,且多数毒株之间基因变异较大。; 倪宏斌剡根强张坤凌晨冯广余师艳霞; 关键词：ELISA

新疆北疆部分地区致犊牛腹泻冠状病毒的分子流行病学调查被引量：10: 2015年; 为调查新疆北疆部分地区规模化奶牛场致犊牛腹泻冠状病毒的感染情况,查明该病毒在致犊牛腹泻中的作用及分子流行病学特征,从新疆北疆的石河子、沙湾、奎屯、呼图壁地区的主要奶牛场采集1月龄以内犊牛粪便119份,其中腹泻犊牛粪便71份,相同日龄无腹泻的健康犊牛的粪便48份。采用反转录聚合酶链反应技术直接从犊牛粪便中扩增出牛冠状病毒N基因（597bp）、S1基因（2 861bp）,并对牛冠状病毒S1基因进行测序、对比、分析。结果显示,从腹泻犊牛粪便中检出阳性样品12份,各牛场腹泻犊牛粪便的冠状病毒阳性检出率为0~38.89%,并未在健康犊牛粪便中检出牛冠状病毒。S1基因序列分析结果显示,与牛冠状病毒参考株Mebus、LY-138、OK、F15、L9、LSU的核苷酸和氨基酸序列的同源性分别在95.0%~97.7%、96.0%~98.6%之间。结果表明,此次调查的规模化奶牛场腹泻犊牛存在牛冠状病毒感染,所感染牛冠状病毒毒株与世界其他地区的参考毒株存在变异。; 张坤剡根强王静梅杨铭伟凌晨师燕霞宋康冯广余; 关键词：牛冠状病毒犊牛腹泻 N基因 S1基因分子流行病学调查

海岛棉GbCO基因的克隆和表达分析被引量：1: 2013年; [目的]海岛棉GbCO基因的克隆和表达分析。[方法]利用RT-PCR技术,从海岛棉中克隆CONSTANS(CO)的同源基因,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术分析基因的组织表达。[结果]从新海14号花后9 d的纤维中克隆得到了一个棉花CO蛋白基因,命名为GbCO。GbCO eDNA的ORF为1 008 bp,编码335个氨基酸。序列分析表明GbCO和GhCO的相似性只有78.2%,棉花CO蛋白同蓖麻RcCO、苹果MaCO等亲缘关系较为接近。qRT-PCR结果表明,GbCO基因在棉花的根、茎、叶、花瓣等组织中均有表达,但在叶片中的表达相对较高。并且GbCO在棉花胚珠及纤维发育的起始和伸长阶段都有表达,在开花前1 d和开花后5 d的胚珠中表达量很高。GbCO基因的表达受到光周期的调节,在夜间表达量高于白天。[结论]GbCO基因可能在陆地棉的开花发育中起着重要的作用。; 顾超吕学辰张坤崔百明黄先忠; 关键词：海岛棉早花基因克隆

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