目的:研究以粉尘螨提取液致敏C57BL/6小鼠产生高水平IgE的小鼠哮喘动物模型的建立和评估。方法:C57BL/6小鼠随机分为对照组和哮喘组。哮喘组于实验第0、7、14天分别以粉尘螨提取液腹腔致敏,共3次,对照组以PBS代替。于实验第28天起,哮喘组小鼠以粉尘螨提取液滴鼻激发,连续7天,观察并记录小鼠哮喘发作情况;对照组以PBS代替。最后1次滴鼻24 h后对小鼠作肺泡灌洗液。进行灌洗液细胞计数和分类,肺组织病理学检测(HE染色),ELISA测定血清总IgE和重组粉尘螨二类变应原特异性IgE(rDer f 2-sIgE)含量,ELISA试剂盒测定支气管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar Lavage Fluid,BALF)中IL-4和IFN-γ的含量。结果:哮喘组小鼠肺泡灌洗液中细胞总数和嗜酸性粒细胞较正常组极显著增加(P<0.01);肺组织可见明显的炎性细胞浸润;血清总IgE(P<0.001)和rDer f 2-sIgE(P<0.01)水平极显著升高;BALF中IL-4水平显著增高(P<0.05),而IFN-γ的水平极显著下降(P<0.01)。结论:使用多次腹腔致敏和滴鼻激发的方法可以建立产生高水平IgE的粉尘螨过敏性哮喘动物模型。
克隆化培养上海地区户尘螨,获得不同编码序列的重组Der p 2变应原进行当地人群血清特异性IgG分析,探讨其应用价值。从过敏性疾病患者床褥采集分离户尘螨,采用封闭式培养系统进行培养,分离培养单个孕螨获得克隆化的螨群。用RT-PCR的方法扩增不同螨克隆的Der p 2编码基因,插入原核表达载体pET-19b在大肠杆菌内进行表达,所获得的蛋白经Dot blot和ELISA检测其抗原性及与人群血清IgG的反应水平。结果显示,成功对户尘螨种群进行克隆化培养。获得14个核苷酸多样性位点,对应的两个不同序列的重组Der p 2蛋白与鼠单抗1D8的亲和力不同,但与上海地区人群IgG结合力相似(r=0.864)。检测不同地区尘螨主要变应原的序列多样性,有助于开发更有针对性的疫苗组分,以及特异性保护性IgG的筛选。
