孙玉龙
- 作品数：8 被引量：8H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 小鼠PC-1蛋白兔多克隆抗体的制备及初步应用被引量：2
- 2003年
- 目的 :获得小鼠PC 1蛋白的兔多克隆抗体 ,检测其在小鼠器官中的表达谱。方法 :以纯化后的小鼠PC 1蛋白及其N端 45个氨基酸与GST的融合蛋白 (GST MPC 1、GST MPC 1 45 )为抗原 ,制备了它们的兔多克隆抗体。进一步应用饱和硫酸铵沉淀法、DEAE5 2和ProteinA亲和层析法对这两个抗体进行了纯化 ,Westernblot检测了PC 1蛋白在昆明白小鼠七个组织中的表达情况。结果 :两个兔多克隆血清的效价分别为 1∶2 0 0 0 0和 1∶2 0 0 0 0 0 ,并能与人工合成的人PC 1蛋白N端的 46个氨基酸发生良好的交叉反应。PC 1蛋白在结肠中有表达 ,在肾中有微弱表达 ,而在心、肺、肝、胃、脾中没有表达。结论 :获得小鼠PC 1蛋白的兔多克隆抗体 ,PC 1蛋白在结肠中有表达 ,在肾中有微弱表达 ,而在心、肺、肝、胃。
- 万里川周建光李杰之孙玉龙刘春丽
- 关键词：多克隆抗体前列腺癌PC-1基因免疫
- 外源高表达PC-1蛋白N端43个氨基酸可加速人前列腺癌细胞系C4-2的生长被引量：2
- 2004年
- 研究PC-1蛋白N端43个氨基酸表达对人前列腺癌细胞C4-2生长的影响。用DNA重组技术将含PC-1蛋白N端43个氨基酸的DNA序列正向克隆到真核表达载体pIRES2-EGFP中,采用脂质体法将重组质粒稳定转染进C4-2细胞中,RT-PCR分析外源序列的转录情况,固相ELISA法测定PC-1蛋白N端43个氨基酸的表达,MTT实验分析细胞的生长速度。结果获得了稳定转染PC-1基因N端43个氨基酸的前列腺癌细胞株,在该细胞株中外源PC-1蛋白N端43个氨基酸得到高表达,细胞生长速度较对照细胞加快了38%。结果表明外源PC-1基因N端43个氨基酸高表达可提高人前列腺癌细胞C4-2的生长速度,推论PC-1基因高表达可能在人前列腺癌的发展中起一定的促进作用。
- 万里川周建光李杰之孙玉龙
- 关键词：前列腺癌基因表达稳定转染
- 小鼠PC-1基因在大肠杆菌中的表达和纯化
- 2002年
- 利用PCR和基因重组技术构建了小鼠PC-1基因全长cDNA及其N端45个氨基酸残基的表达质粒pGEX-4T-1-mPC-1和pGEX-4T-1-mPC-1-45。经IPTG诱导后,在大肠杆菌DH5α中,GST-mPC-1和GST-mPC-1-45两个融合蛋白都获得了可溶性高表达。经谷胱甘肽Sepharose-4B亲和柱层析纯化后,获得了纯的GST-mPC-1和GST-mPC-1-45蛋白。
- 万里川周建光孙玉龙李杰之黄翠芬
- 关键词：小鼠PC-1基因大肠杆菌纯化GST融合表达
- PC-1蛋白鼠单克隆抗体制备的改进及意义
- 2009年
- 目的为PC-1蛋白功能的研究奠定基础。方法以纯化后的PC-1蛋白及其N端46个氨基酸与GST的融合蛋白(GST-PC-1和GST-PC-1-46)为抗原,通过常规和脾内免疫相结合的方法免疫BALB/c小鼠,经鼠脾细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合,用直接ELISA法进行克隆化筛选,单克隆抗体的染色体分析及亚类鉴定,检测PC-1基因表达及分布。结果成功获得2株抗鼠PC-1基因单克隆抗体,抗体亚型为IgG1,PC-1在高恶性前列腺癌细胞C4-2中高表达,在低恶性前列腺癌细胞LNCaP中少量表达,与前期研究结果相符。免疫组化染色示PC-1蛋白定位于细胞质。结论PC-1蛋白鼠单克隆抗体成功制备,针对PC-1基因蛋白的单抗在前列腺癌的放射免疫显像诊断及导向治疗上有潜在应用价值;可用于PC-1蛋白功能的研究。
- 高雪松刘萃龙周立权孙玉龙梁瑞霞陈伟洪宝发周建光
- 关键词：PC-1基因前列腺肿瘤单克隆抗体
- PC-1蛋白单克隆抗体制备和鉴定
- 2008年
- 为获得高效价PC-1蛋白的鼠单克隆抗体(mAb),用于PC-1功能的实验,采用纯化的PC-1蛋白与GST的融合蛋白(GST-PC-1)为抗原,免疫小鼠和骨髓瘤细胞进行细胞融合,用直接ELISA法进行克隆化筛选,mAb的染色体分析及亚类鉴定及初步应用。结果表明细胞融合和ELISA筛选后,获得2株抗鼠PC-1蛋白mAb,两株PC-1 mAb效价分别为1∶25600,1∶13600,抗体亚型为IgG1,Western blot证实其特异性识别PC-1蛋白。该mAb可以用于测定PC-1蛋白。
- 高雪松张慧周立权孙玉龙梁瑞霞陈伟刘萃龙周建光
- 关键词：抗原前列腺癌单克隆抗体免疫
- PC-1基因功能研究:PC-1蛋白兔多克隆抗体制备的改进和应用
- 2005年
- 目的:获得高效价PC-1蛋白的兔多克隆抗体,用于PC-1功能的实验。方法:实验于2004-02/08在解放军军事医学科学院生物工程研究所完成。以纯化后的PC-1蛋白及其N端46个氨基酸与GST的融合蛋白(GST-PC-1和GST-PC-1-46)为抗原,通过一种经淋巴结注射、免疫家兔的改进的免疫方法制备兔多克隆抗体。应用ProteinA亲和层析纯化抗体。以酶联免疫吸附和Western-blot及免疫组化法鉴定所得抗体。结果:①2个兔多克隆抗体的效价分别为1∶12800和1∶51200。②PC-1在高恶性前列腺癌细胞C4-2中高表达,在低恶性前列腺癌细胞LNCaP中有少量表达。③经免疫组化染色后,含有PC-1蛋白的C4-2及LNCaP细胞均呈阳性反应,细胞质中可见明显着色,而空泡状的胞核则没有着色,提示PC-1蛋白主要分布在细胞浆中。结论:用一种改进的免疫方法,获得高效价的、可应用于酶联免疫吸附和Western-blot及免疫组化实验的PC-1蛋白兔多克隆抗体。
- 高雪松张慧孙玉龙周立权梁瑞霞陈伟洪宝发周建光
- 关键词：前列腺肿瘤免疫法
- 一种在哺乳动物细胞中研究蛋白分子转录激活活性系统的建立被引量：1
- 2002年
- 为了在哺乳动物细胞中建立一套用于研究蛋白分子转录激活活性的系统 ,首先以质粒pTet Off和真核表达载体pCDNA3.1B( ) /myc his为基础 ,分别构建重组质粒pZHO1(用于插入待测基因并作为该系统的阴性对照 )、pZHO2(用于作阳性对照 ) ,此外 ,该系统还包括质粒pTRE luc(编码Firefly荧光素酶报道基因 )和质粒pRL TK(编码Renilla荧光素酶基因 ,用作内参对照 )。为验证该系统的可行性 ,分别将质粒pZHO1、pZHO2、pZHO3(编码p5 3分子N端转录激活区 73个氨基酸片段 ,作为实验组 )与质粒pTRE luc和pRL TK共转染至C4 2、MCF 7、COS73种不同的细胞株中 ,通过检测各转染组细胞中Firefly荧光素酶相对活性的大小来判断该系统的可行性。结果表明 ,所构建的系统可以在哺乳动物细胞中检测目的分子的转录激活活性。
- 张浩周建光李杰之王健孙玉龙陈珊黄翠芬
- 关键词：哺乳动物细胞蛋白分子转录激活活性TET-OFF
- 人前列腺癌相关基因pc-1表达产物在细胞内的定位研究被引量：5
- 2001年
- 目的 :研究pc 1基因表达产物在细胞内的定位。方法 :采用巢式PCR技术 ,从原始克隆质粒中扩增出可编码蛋白分子的pc 1cDNA片段 ,分别将其克隆入含EGFP和MYC标签的真核表达载体中 ;用脂质体介导法将其转染入人前列腺癌细胞C4 2中 ;通过免疫细胞化学方法和激光共聚焦显微镜技术检测pc 1表达产物在细胞内的定位。结果与结论 :pc 1表达产物定位于细胞质中 ,为进一步研究其生理、生化功能奠定了基础。
- 张浩周建光孙玉龙李杰之袁兰黄翠芬
- 关键词：前列腺肿瘤免疫细胞化学激光共聚焦细胞定位
